一种双酶蛋白组合及其一锅法制备胞苷三磷酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种双酶蛋白组合及其一锅法制备胞苷三磷酸的方法，该双酶蛋白组合包括：一种胞苷酸激酶及一种乙酰磷酸激酶，胞苷酸激酶蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，乙酰磷酸激酶蛋白的序列如SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术的双酶蛋白组合可以以乙酰磷酸为磷酸供体，以胞苷酸为底物，进行两次磷酸化，一锅法合成胞苷三磷酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和酶工程领域，具体涉及一种双酶蛋白组合及其一锅法制备胞苷三磷酸的方法。

技术介绍

1、胞苷三磷酸(ctp)分子量483，化学式c9h16n3o14p3，是由核苷和三个磷酸基团组成的核苷酸。其结构由嘧啶碱基，特指胞嘧啶，与核糖和三个磷酸基团（连接到核糖的5'碳上）相结合而成。去除一个或两个磷酸基团会得到胞苷一磷酸或胞苷二磷酸。在生物体内，ctp可以通过嘧啶生物合成途径从头合成。ctp含有储存在其高能磷酸键中的化学能。在体内，当它被水解成cdp(胞苷二磷酸)时释放能量。ctp也可能在某些代谢过程中作为辅酶，如蛋白质的糖基化和甘油磷脂的合成。ctp也是rna的直接组成部分。因此，在rna聚合酶的作用下，它是mrna、trna和rrna形成过程中的重要底物。

2、ctp的合成主要有化学合成法、生物酶催化法以及细胞催化等方法。其中，化学合成法污染严重；细胞催化法是以胞苷酸为底物，经酵母细胞酶系利用葡萄糖和无机磷合成ctp，但是反应速度慢，并且需要添加大量酵母细胞，转化率低，不利于ctp后期纯化。目前，主要采用的是生物酶催化法，以胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一种双酶蛋白组合一锅法制备胞苷三磷酸的方法，其特征在于，通过双酶组合以乙酰磷酸为磷酸供体，无需ATP作为磷酸载体，对底物胞苷酸进行两次磷酸化，生成胞苷三磷酸；其中双酶组合是胞苷酸激酶蛋白、乙酸和丁酸激酶类似蛋白按比例组合而成。

2.根据权利要求1所述的一种双酶蛋白组合一锅法制备胞苷三磷酸的方法，其特征在于，所述底物胞苷酸和乙酰磷酸的质量比为1:1~1:5。

3.根据权利要求1所述的一种双酶蛋白组合一锅法制备胞苷三磷酸的方法，其特征在于，所述胞苷酸激酶蛋白为来源于Nitrosarchaeum sp.的胞苷酸激酶蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。<...

【技术特征摘要】

1. 一种双酶蛋白组合一锅法制备胞苷三磷酸的方法，其特征在于，通过双酶组合以乙酰磷酸为磷酸供体，无需atp作为磷酸载体，对底物胞苷酸进行两次磷酸化，生成胞苷三磷酸；其中双酶组合是胞苷酸激酶蛋白、乙酸和丁酸激酶类似蛋白按比例组合而成。

2.根据权利要求1所述的一种双酶蛋白组合一锅法制备胞苷三磷酸的方法，其特征在于，所述底物胞苷酸和乙酰磷酸的质量比为1:1~1:5。

3.根据权利要求1所述的一种双酶蛋白组合一锅法制备胞苷三磷酸的方法，其特征在于，所述胞苷酸激酶蛋白为来源于nitrosarchaeum sp.的胞苷酸激酶蛋白，其氨基酸序列如seq id no.1所示。

4.根据权利要求1所述的一种双酶蛋白组合一锅法制备胞苷三磷酸的方法，其特征在于，所述乙酸和丁酸激酶类似蛋白为来源于thermothelomyces thermophilus atcc 42464的乙酸和丁酸激酶类似蛋白，其氨基酸序列如seq id no.3所示。

5.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈圣，章志林，
申请(专利权)人：苏州酶泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：