一种将外源核酸片段导入双壳贝类精子中的方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种将外源核酸片段导入双壳贝类精子中的方法，所述的方法将收集的双壳贝类的精子离心去除上清后，加入NaCl溶液混匀，再离心后去除上清；将去除上清的沉淀加入CaCl<subgt;2</subgt;溶液后吹打混匀；再加入外源核酸片段后进行冰水浴；冰浴结束后的溶液立即在42℃水浴条件下热激；转化完成后的溶液随后再次冰水浴，完成外源片段导入精子的操作。实验证明，采用本发明专利技术的方法导入sgRNA重组表达质粒，受精成功后泥蚶胚胎体内导入率可达47％～70％。与现有技术相比，本发明专利技术的导入方法操作简单，导入成本低，操作时间短，可以实现批量化作业，满足贝类产卵量大的现实需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因编辑，具体涉及一种将外源核酸片段导入双壳贝类精子中的方法。

技术介绍

1、基因编辑技术是近年来探索基因功能和解析性状直接有效的方法，其中crispr/cas9基因编辑技术具有操作简单、靶点选择广、成本低、效率高等优点，为重要水产物种经济性状的遗传解析和良种培育提供了有力工具。自2014年以来，随着cas9技术的日渐成熟，其应用也越来越广泛。而目前最热门且应用最为广泛的crispr/cas9系统，则是以cas9蛋白和sgrna为核心组成。cas9含有在氨基末端的ruvc和蛋白质中部的hnh两个活性位点，在crrna成熟和双链dna剪切中发挥作用，可引起dna双链断裂。当dna断裂后，细胞核内同时存在与损伤dna同源的dna片段，则可通过同源介导的双链dna修复在目的位点引入外源dna片段，从而达到片段敲入或编辑的效果。crispr/cas9技术的不断发展为生物学及医学领域的研究带来了革命性的突破,利用该技术构建基因突变模式生物有助于基因功能的研究,对于遗传疾病的治疗等具有重要的参考价值,同时还可以从基因组水平上有效改善经济动物的生产性能,提本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种将外源核酸片段导入双壳贝类精子中的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的双壳贝类为泥蚶。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的外源核酸片段为表达sgRNA的重组质粒。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中的NaCl溶液浓度为0.9％。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中的离心是在3000rpm下进行离心。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中的CaCl2溶液的浓度为0.01％。

7.如...

【技术特征摘要】

1.一种将外源核酸片段导入双壳贝类精子中的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的双壳贝类为泥蚶。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的外源核酸片段为表达sgrna的重组质粒。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中的nacl溶液浓度为0.9％。

5....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘广绪，周伟尚，施巍，张微瑕，庄乐南，贺津，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：