一种从莪术油中提取分离莪术二酮的方法技术

本发明专利技术涉及一种从天然药用植物挥发油莪术油中提取纯化莪术二酮的方法，本方法得到的莪术二酮纯度达到９９．９％，符合中药领域对照品的纯度要求，并为后续产品的开发提供优良的原料。该方法系将莪术油与层析用硅胶混匀，上硅胶柱，用不同比例的石油醚∶乙酸乙酯作为洗脱剂梯度洗脱，收集、合并含有莪术二酮成分的洗脱液，浓缩，冷藏放置，析出结晶，结晶物同法再次分离、纯化，得到的晶体重结晶，即得莪术二酮，此方法操作简单，重复性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从天然药用植物挥发油中提取单一有效成分的提取方法，具体涉 及一种从莪术油中提取、纯化莪术二酮的方法，该方法制备的莪术二酮纯度高达99.9%。
技术介绍
莪术油是从多种药用植物中提取的挥发油，如姜黄、莪术、郁金等姜科植物中都含 有莪术油。莪术油中含有多种活性成分，具有行气活血、消积止痛、活血化瘀、去腐生肌、增 强机体免疫能力之功效。现代药理学研究表明，莪术油直接抑制、破坏癌细胞；抗HPV感染； 莪术油对细菌、霉菌、滴虫、病毒等病原微生物具有协同杀灭作用，并修复病变组织、促进创 面愈合。莪术油制剂用于治疗白色念珠菌引起的阴道感染、霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎、 宫颈糜烂以及治疗病毒性感染；还用于预防、治疗宫颈癌。其抗癌、抗菌、抗病毒的主要活性 成分为莪术醇、莪术二酮、榄香烯、吉马酮等，目前临床上有很多以莪术油为有效成分的制 剂，如莪术油葡萄糖注射液、莪术油注射液、复方莪术油栓、复方莪术油软胶囊、保妇康栓 等，广泛用于治疗和预防病毒感染，细菌、霉菌、白色念珠菌感染的妇科疾病及HPV反复感 染的宫颈癌病变。过去，由于莪术油成分复杂，有效成分含量较低，分析方法有限，限制了制 剂有效成分的质量控制。当前，随着分析仪器、分析方法的进步和发展，能更加准确地检测 出莪术油有效成分的单体物质，为莪术油制剂准确的成分定性、定量提供了条件。莪术二酮 为莪术油中主要活性成分，占莪术油含量的15%左右，本申请专利技术人通过反复的试验，找到 了从莪术油中提取、纯化莪术二酮的有效方法，能够为莪术油制剂成分检测提供高纯度的 对照品，并为莪术二酮后续产品的开发提供优质的原料。 现有技术中提取莪术二酮方法通常是先采用石油醚洗脱，再用石油醚乙酸乙酯 (9 : 1)洗脱，但是该单一洗脱方式难以有效地去除杂质。鉴于莪术油中成分复杂，本申请以石油醚(60 90°c ):乙酸乙酯体积比为ioo : o，30 : i，25 : 1，20 : i，is : i， 12 : i，9 : i进行梯度洗脱，并以石油醚(60-90°c):乙酸乙酯体积比为i8 : i，is : i， 12 : i的洗脱液进行二次洗脱，通过二次、多个梯度的洗脱将大部分杂质除去，以保证莪术二酮的纯度，本申请得到的莪术二酮纯度高达99.9%。本申请所述的方法与其他提取纯化方法比较，还具有实验操作简便，设备要求简单，条件容易达到，且收率大，纯度高的特点。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种高纯度的莪术二酮的单体以及从莪术油中提取、纯化莪术 二酮的方法，单体纯度高达99.9%，解决了现有技术中一直缺乏高纯度莪术二酮对照品的 问题。 本专利技术的提取、纯化方法如下 将一定量的莪术油与适量柱层析用硅胶拌匀，上预先填充好的硅胶柱，依次以石 油醚(60 90°C )和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中石油醚乙酸乙酯体积比依次为ioo : o，30 : 1，25 : 1，20 : i，is : 1，12 : i，9 : i，收集每个梯度下的洗脱液，每份30ml，即时对各梯度下的多份洗脱液用薄层法检测，随时监测莪术二酮的洗脱情况，当洗脱进行到石油醚乙酸乙酯体积比为12 : l和9 : i时，莪术二酮被陆续洗脱出来，其中 在9 : l的梯度下最为集中，将i2 : l和9 : i的梯度下检测结果显示含有单一莪术二酮斑点的多份洗脱液合并，浓縮，O 2t:冷藏，放置24 48小时，有晶体析出，滤过，待用。 取层析柱加入柱层析用硅胶(105t:干燥6小时)，填实，真空泵抽6小时，用石油醚(60 90°c):乙酸乙酯(is : i)走柱。取上步得到的晶体用石油醚(eo 9(TC)溶解，与适量层析用硅胶拌匀，上硅胶柱，调整洗脱液的比例，依次以石油醚(60-90°C):乙酸乙酯体积 比为18 : 1，15 : 1，12 : l同法进行梯度洗脱，收集每个梯度下的洗脱液，每份20ml，即时对各梯度下的多份洗脱液用薄层法检测，将i2 : i梯度下检测结果显示含有单一莪术二酮斑点的多份洗脱液合并、浓縮、0 2t:冷藏、放置24 48小时结晶，结晶物用合适的有机溶剂进行重结晶，即得高纯度的莪术二酮。 上述方法中，硅胶柱优选为干法填充的硅胶柱；重结晶溶剂选自石油醚、正丁醇或正己烷，优选为正己烷。 附图说明 附图1 :气相色谱-质谱联用仪分析自制莪术二酮的气-质色谱图 附图2 :高效液相色谱法定量分析自制莪术二酮及市售品的分析报告具体实施例方式实施例1 取层析柱加入柱层析用硅胶(105t:干燥6小时)300g干法填柱，填实，真空泵抽 6小时，用石油醚(60 90°C ):乙酸乙酯(18 : 1)走柱，取莪术油30g，加柱层析用硅胶 15g拌匀，干法上柱，用梯度洗脱法，依次以石油醚(60 90°C )和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中石油醚乙酸乙酯体积比依次为ioo : o，30 : 1，25 : 1，20 : i，is : i，12 : 1，9 : 1，收集每个梯度下的洗脱液，每份30ml，即时对各梯度下的多份洗脱液进行薄层检查，监测莪术二酮的洗脱情况，将i2 : l和9 : i的梯度下检测结果显示含有单一莪 术二酮斑点的多份洗脱液合并，浓縮，o 2t:冷藏，放置48小时，有晶体析出，用垂熔漏斗 滤取结晶，待用。取层析柱加入柱层析用硅胶(105t:干燥6小时)30g，干法填柱，填实，真空泵抽6小时，用石油醚(eo 9(TC):乙酸乙酯(is : i)走柱。取上步得到的晶体用石油醚(60 90°C)溶解，与适量柱层析硅胶拌匀，呈半干状，上硅胶柱，同法以石油醚(60 90°c )和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中石油醚乙酸乙酯体积比依次为is : i，15 : 1，12 : 1，收集洗脱液，每份20ml，即时对各梯度下的多份洗脱液进行薄层检查，随时监测莪术二酮的洗脱情况，将i2 : i梯度下检测结果显示含有单一莪术二酮斑点的多份洗脱液合并，浓縮，0 2t:冷藏，放置48小时，有晶体析出，用垂熔漏斗滤取，将得到的晶体用 正己烷重结晶，即得高纯度的莪术二酮(1. 5g)，纯度为99. 9% 。 实施例2 取层析柱加入柱层析用硅胶(105t:干燥6小时)300g，干法填柱，填实，真空泵抽 6小时，用石油醚(60 90°C ):乙酸乙酯(18 : 1)走柱，取莪术油30g，加柱层析用硅胶 15g拌匀，干法上柱，用梯度洗脱法，依次以石油醚(6Q 9(TC )和乙酸乙酯混合溶剂进行3/4页梯度洗脱，其中石油醚乙酸乙酯体积比依次为100 : o，30 : i，25 : 1，20 : i，is : i，12 : 1，9 : 1，收集每个梯度下的洗脱液，每份30ml，即时对各梯度下的多份洗脱液进行薄层检查，监测莪术二酮的洗脱情况，将i2 : l和9 : i的梯度下检测结果显示含有单一莪 术二酮斑点的多份洗脱液合并，浓縮，o 2t:冷藏，放置48小时，有晶体析出，用垂熔漏斗滤取结晶，待用。取层析柱加入柱层析用硅胶(105t:干燥6小时)30g，干法填柱，填实，真空泵抽6小时，用石油醚(eo 9(TC):乙酸乙酯(is : i)走柱。取上步得到的晶体用石油醚(60 90°C)溶解，与适量柱层析硅胶拌匀，呈半干状，上硅胶柱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从莪术油中提取、纯化莪术二酮的方法，包括如下步骤：　　将莪术油与适量柱层析用硅胶拌匀，上预填好的硅胶柱，以６０～９０℃的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中石油醚∶乙酸乙酯体积比依次为：１００∶０，３０∶１，２５∶１，２０∶１，１５∶１，１２∶１，９∶１，收集每个梯度下的洗脱液，每份３０ｍｌ，即时对各梯度下的多份洗脱液用薄层法检测，将１２∶１和９∶１梯度下检测结果显示含有单一莪术二酮斑点的多份洗脱液合并，浓缩，０～２℃冷藏，放置２４～４８小时，有晶体析出，滤过，晶体用石油醚（６０～９０℃）溶解，溶液与适量柱层析用硅胶拌匀，上预填好的硅胶柱，再次以６０～９０℃的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，调整洗脱液的比例，其中石油醚∶乙酸乙酯体积比依次为１８∶１，１５∶１，１２∶１，收集每个梯度下的洗脱液，每份２０ｍｌ，即时对各梯度下的多份洗脱液用薄层法检测，将１２∶１梯度下检测结果显示含有单一莪术二酮斑点的多份洗脱液合并，浓缩、０～２℃冷藏、放置２４～４８小时结晶，结晶物用合适的有机溶剂进行重结晶，即得莪术二酮产品。

【技术特征摘要】
一种从莪术油中提取、纯化莪术二酮的方法，包括如下步骤将莪术油与适量柱层析用硅胶拌匀，上预填好的硅胶柱，以60～90℃的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中石油醚∶乙酸乙酯体积比依次为100∶0，30∶1，25∶1，20∶1，15∶1，12∶1，9∶1，收集每个梯度下的洗脱液，每份30ml，即时对各梯度下的多份洗脱液用薄层法检测，将12∶1和9∶1梯度下检测结果显示含有单一莪术二酮斑点的多份洗脱液合并，浓缩，0～2℃冷藏，放置24～48小时，有晶体析出，滤过，晶体用石油醚(60～90℃)溶解，溶液与适量柱层析用硅胶拌匀，上预填好的硅胶柱，再次以60～90℃的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，调...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈容，史朝晖，冯仲异，
申请(专利权)人：海南碧凯药业有限公司，
类型：发明
国别省市：66[中国|海南]