【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于锰铝佐剂的纳米疫苗递送系统及其制备方法，其可明显增强体液免疫和细胞免疫应答，属于医药。
技术介绍
1、疫苗接种是目前最成功的防控传染性疾病发生与流行的措施之一，由于其广泛应用，使得多种流行性传染疾病包括天花、麻疹和脊髓灰质炎得到了有效的控制。一般疫苗包括灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗和病毒载体疫苗。相比减毒活疫苗和灭活疫苗，亚单位疫苗仅包含具有免疫原性的成分而不是整个病原体，因此亚单位疫苗给机体造成感染疾病的风险低，更适用于免疫力低下的人群。其次，亚单位疫苗易于生产，安全性良好，并且免疫反应可调节，因此目前新型疫苗的开发主要围绕亚单位疫苗的合理设计，以实现更有效和更安全的疫苗接种。但是亚单位疫苗的免疫原性往往比较差，诱导产生的免疫应答强度较低，因此亚单位疫苗中通常需要加入佐剂来提高抗原的免疫原性，增强机体对抗原的免疫应答强度。
2、目前为止，被美国食品药品监督管理局批准用于人体的疫苗佐剂仅有7种，分别为铝佐剂，类病毒颗粒，as01,as03,as04,cpg odn和mf59，其中铝佐剂是市售疫苗中使用最为广泛的佐剂。铝佐剂与抗原混合后能够吸附抗原，在注射部位形成抗原储库，持续不断地释放抗原，形成局部高浓度的抗原，吸引抗原提呈细胞靠近，增强抗原提呈细胞对抗原的摄取、加工和提呈，并且刺激相关细胞分泌炎性因子，从而显著增强机体的免疫应答。尽管铝佐剂具有良好的安全性，但是长期的临床应用结果表明铝佐剂主要诱导的是体液免疫应答，产生大量的抗原特异性抗体，但是其对th1型和ctl细胞免疫应答诱导能力较弱，
3、锰是机体必须的微量无机元素之一，参与体内的多种生理过程，包括生长发育、神经元功能、糖代谢和脂肪代谢、造血功能等。然而，随着对锰研究的深入，越来越多的研究报道了锰能够通过激活环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cgas)-干扰素基因刺激蛋白(sting)信号通路刺激机体的免疫系统，诱导ⅰ型干扰素(ifn)和其它促炎细胞因子的表达，ⅰ型ifn能够刺激树突状细胞(dcs)和巨噬细胞的活化和成熟，促进细胞毒性t细胞(ctl)和自然杀伤细胞(nk)分泌颗粒酶和干扰素从而增强细胞毒作用，并且可以调控th0细胞向th1方向分化来增强细胞免疫应答。因此，锰可以通过激活cgas-sting通路显著增强机体的细胞免疫应答，是一种潜在的金属类佐剂。
4、淋巴结中富含多种免疫细胞，包括b细胞、t细胞、树突状细胞(dcs)和巨噬细胞，是免疫应答发生的主要场所之一。纳米颗粒作为疫苗递送载体在抗肿瘤疫苗方面具有很好的应用前景。纳米疫苗可以提高疫苗递送效率，显著增强机体免疫应答。将疫苗纳米化靶向递送至淋巴结，并延长其在淋巴结中的滞留时间，能够有效增加抗原被淋巴结内抗原提呈细胞的摄取效率，进而诱导t细胞的活化，促进后续适应性免疫应答的激活。粒径较小的纳米疫苗制剂在皮下注射后能够通过毛细淋巴管的内皮细胞间隙进入淋巴循环，随淋巴液引流到淋巴结。因此，我们将疫苗制剂纳米化，通过控制其粒径使其能够将抗原靶向递送至淋巴结，实现淋巴靶向，从而诱导强效的免疫应答。
5、在这里，我们联合使用锰佐剂和铝佐剂，优选的锰佐剂为二氧化锰纳米粒，通过在二氧化锰纳米粒表面吸附铝佐剂和抗原，构建了两种金属类佐剂和抗原共载的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，制备过程仅在室温，条件温和，同时，相比商品化铝胶佐剂，本专利技术的基于锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统中铝佐剂的用量大大降低，具有更高的安全性，所制备得到的纳米疫苗递送系统能够将抗原靶向递送至淋巴结，从而在抗原量有限以及锰铝佐剂的协同作用下诱导强效的体液免疫和细胞免疫应答，弥补传统铝佐剂难以诱导细胞免疫应答的不足，实现靶向递送抗原、激活体液免疫和细胞免疫的多重功能。
技术实现思路
1、本专利技术针对铝佐剂通常只能诱导抗体介导的体液免疫应答，难以诱导强效的细胞免疫应答的问题，提供了一种基于锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其能够借助粒径优势将抗原高效的靶向递送至淋巴结，并促进淋巴结内的抗原提呈细胞对抗原的摄取，在锰佐剂和铝佐剂的协同作用下，促进抗原提呈细胞的成熟，同时诱导强效的抗原特异性体液免疫和细胞免疫应答。
2、本专利技术的目的之一提供一种含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，其包括锰佐剂、铝佐剂和抗原。
3、本专利技术的目的之一在于提供了一种基于锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，所述的锰佐剂优选为二氧化锰纳米粒，其通过软模板法制备，呈表面带有不规则刺突的蜂窝球状纳米粒。
4、本专利技术的目的之一在于提供了一种基于锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，所述铝佐剂优选为氢氧化铝佐剂，其通过铝盐在中性或偏碱性条件下形成，所述铝盐为可溶性铝盐，所述可溶性铝盐优选为硫酸铝。
5、本专利技术的目的之一在于提供了一种基于锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，二氧化锰纳米粒表面同时吸附铝佐剂和抗原。本专利技术利用可溶性铝盐在中性或偏碱性条件下生成氢氧化铝，使其沉积在二氧化锰纳米粒表面，氢氧化铝带正电，而大多数蛋白质类抗原在中性条件下带负电，通过氢氧化铝和抗原蛋白之间的静电吸附作用负载抗原蛋白，同时还能有效限制氢氧化铝过度增长，从而得到纳米级别的基于锰佐剂和铝佐剂的疫苗递送系统。
6、本专利技术的目的之一在于提供了一种基于锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，所述抗原优选为水溶性抗原，所述水溶性抗原可选自蛋白、多肽、肿瘤细胞裂解液抗原、肿瘤细胞膜抗原、肿瘤细胞全抗原、细菌裂解液抗原、细菌细胞膜抗原、病毒裂解抗原、外泌体的一种或两种以上的组合。
7、作为优选实验方案，本专利技术优选的水溶性抗原蛋白为模型抗原ova、bsa或pcrvnh的一种或多种。
8、本专利技术的目的之一在于提供了一种基于锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，优选的，所述锰佐剂为二氧化锰纳米粒，所述铝佐剂为氢氧化铝佐剂。进一步优选的，所述氢氧化铝佐剂为可溶性铝盐在中性或偏碱性条件下形成，所述可溶性铝盐优选为可溶性的硫酸铝。基于重量份计，二氧化锰：硫酸铝为100:1-1:1，硫酸铝：抗原为1:50-1:0.1，优选的二氧化锰：硫酸铝为50:1-5:1，硫酸铝：抗原为1:20-1:0.5，进一步优选二氧化锰：硫酸铝为20:1-5:1，硫酸铝：抗原为1:10-1:1。
9、本专利技术的目的之一在于提供了一种基于锰铝佐剂的纳米疫苗制剂，所述制剂粒径在10-1000nm，优选的50-500nm，进一步优选80-250nm，再进一步优选为100-200本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，其包括锰佐剂、铝佐剂和抗原。
2.根据权利要求1所述的含铝锰佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述锰佐剂为二氧化锰纳米粒，其中二氧化锰纳米粒表面同时吸附铝佐剂和抗原。
3.根据权利要求1或2任一所述的含铝锰佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述铝佐剂为氢氧化铝佐剂，其通过铝盐在中性或偏碱性条件下形成，所述铝盐为可溶性铝盐，所述铝盐优选为可溶性的硫酸铝，二氧化锰：硫酸铝为100:1-1:1，硫酸铝：抗原为1:50-1:0.1，优选的二氧化锰：硫酸铝为50:1-5:1，硫酸铝：抗原为1:20-1:0.5，进一步优选优选的二氧化锰：硫酸铝为20:1-5:1，硫酸铝：抗原为1:10-1:1。
4.根据权利要求1-2任一所述的含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述抗原为水溶性抗原，所述水溶性抗原选自蛋白、多肽、肿瘤细胞裂解液抗原、肿瘤细胞膜抗原、肿瘤细胞裂解全抗原、细菌裂解液抗原、细菌细胞膜抗原、病毒裂解抗原、外泌体的一种或两种以上的组合。
5.根据
6.根据权利要求1-2任一所述的含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述纳米疫苗递送系统的粒径在10-1000nm，优选的50-500nm，进一步优选80-200nm，再进一步优选为100-200nm。
7.根据权利要求1-2任一所述的含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于其pH值为5.5-8.5，优选为6-8，更优选为7-8。
8.根据权利要求1-2任一所述的含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述纳米疫苗递送系统还含有其他附加剂，所述附加剂包括pH调节剂、缓冲液、冻干保护剂的一种或多种。
9.根据权利要求1-7任一所述的含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统的制备方法，其特征在于，所述锰佐剂为二氧化锰纳米粒，所述二氧化锰纳米粒通过软模板法制备，再通过超声将铝佐剂和抗原负载到二氧化锰表面。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
11.根据权利要求1-7任一所述的含锰铝佐剂的纳米疫苗递送系统或根据权利要求8-9任一所述的制备方法制备的疫苗递送系统在制备预防性和/或治疗性疫苗组合物、免疫原性组合物或抗肿瘤药物组合物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，其包括锰佐剂、铝佐剂和抗原。
2.根据权利要求1所述的含铝锰佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述锰佐剂为二氧化锰纳米粒，其中二氧化锰纳米粒表面同时吸附铝佐剂和抗原。
3.根据权利要求1或2任一所述的含铝锰佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述铝佐剂为氢氧化铝佐剂，其通过铝盐在中性或偏碱性条件下形成，所述铝盐为可溶性铝盐，所述铝盐优选为可溶性的硫酸铝，二氧化锰：硫酸铝为100:1-1:1，硫酸铝：抗原为1:50-1:0.1，优选的二氧化锰：硫酸铝为50:1-5:1，硫酸铝：抗原为1:20-1:0.5，进一步优选优选的二氧化锰：硫酸铝为20:1-5:1，硫酸铝：抗原为1:10-1:1。
4.根据权利要求1-2任一所述的含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述抗原为水溶性抗原，所述水溶性抗原选自蛋白、多肽、肿瘤细胞裂解液抗原、肿瘤细胞膜抗原、肿瘤细胞裂解全抗原、细菌裂解液抗原、细菌细胞膜抗原、病毒裂解抗原、外泌体的一种或两种以上的组合。
5.根据权利要求1-2任一所述的含锰铝佐剂的淋巴靶向纳米疫苗递送系统，其特征在于，所述纳米疫苗递送系统还可包载其他类型的佐剂，所述佐剂包括：toll样受体激动剂：cpg-odn、单磷酰脂质a、polyi:c、脂多糖、细菌鞭毛蛋白、咪喹莫特；细胞因子：gm-csf、...
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