【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及亚氨基酸特异性内切蛋白酶，特别是涉及一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂及制备方法。
技术介绍
1、羟脯氨酸(hydroxyproline，hyp)是亚氨基酸之一，是一种非必需氨基酸，是胶原组织的主要成分之一，且为胶原中特有的氨基酸，约占胶原氨基酸总量的13％。胶原蛋白是体内含量最多的蛋白质，约占人体蛋白质总量1/3。利用羟脯氨酸在胶原蛋白中含量最高这一特点，通过血液和尿液对羟脯氨酸的测定，可了解体内胶原蛋白分解代谢情况，即可作为结缔组织分解情况指标。
2、hyp不是合成胶原蛋白的底物，但其对维持胶原蛋白的三维螺旋结构是必需的，且能够增强胶原蛋白的热稳定性，并抑制蛋白质凝集和纤维化的发生。许多研究表明，外源添加脯氨酸(pro)、羟脯氨酸(hyp)、维生素c、谷氨酰胺和α-酮戊二酸对动物机体胶原蛋白沉积具有一定影响。
3、羟脯氨酸特异性内切酶是一类特异性降解羟脯氨酸残基羧基端肽键的裂解酶，能够特异性的识别和水解位于多肽内的脯氨酸残基的羧基端肽键，对脯氨酸进行降解。目前，羟脯氨酸特异性内切酶在保藏过程中，前期存在失活情况，严重影响羟脯氨酸特异性内切酶的应用。因此，需要研究如何提高羟脯氨酸特异性内切酶的储存时间和酶活性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂及制备方法，羟脯氨酸特异性蛋白酶保存时间长，活力保留率高。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，各组
3、优选的，填充剂包括甘露醇、甘氨酸、羟甲基纤维素、明胶中的一种或多种。
4、优选的，ph缓冲调节剂包括tris-hcl、磷酸二氢钠-柠檬酸、磷酸二氢钾、柠檬酸-柠檬酸钠和组氨酸中的一种或多种。
5、优选的，糖类包括海藻糖、蔗糖、葡萄糖、菊糖和透明质酸钠中的一种或多种。
6、优选的，表面活性剂包括吐温-80、吐温-20、十二烷基硫酸钠、triton x-100、蔗糖脂肪酸脂中的一种或多种。
7、优选的，复配锰盐包括硫酸锰、氯化锰、磷酸锰、醋酸锰、硅酸锰中的一种或多种。
8、优选的，复配锰盐的浓度为0.5-6mmol/l。
9、优选的，ph缓冲调节剂调节的ph范围为6.0-8.2。
10、优选的，亚氨基酸特异性内切蛋白酶为羟脯氨酸特异性内切蛋白酶，羟脯氨酸特异性内切蛋白酶来源于黄曲霉。
11、上述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂的制备方法：包括以下步骤，
12、s1、由黄曲霉中提取羟脯氨酸特异性蛋白酶，纯化后浓缩，得到羟脯氨酸特异性蛋白酶溶液；
13、s2、按质量比称取ph缓冲调节剂0.1-3份、填充剂0.1-3份、糖类0.1-2.5份、表面活性剂0.1-1.5份和山梨酸钾0.01-0.5份，混合均匀后溶于纯水中，得到冻干保护剂；
14、s3、将s1中的羟脯氨酸特异性蛋白酶溶液和s2中的冻干保护剂，混合后预冻，在-25～-15℃保持1.5-4.5h、真空度0mbar，在-35～-15℃保持5-10h、真空度0.3-0.5mbar，在-5～5℃保持3-5h、真空度0.3-0.5mbar，在0-10℃保持0.5～3h、真空度0.3-0.5mbar，在5～15℃保持0.5-3.5h、真空度0.3-0.5mbar，在10～20℃保持7～10h、真空度0.3-0.5mbar；
15、结束后冻干完成，得到羟脯氨酸特异性内切蛋白酶冻干粉；
16、s4、惰性气氛下，向s3中的羟脯氨酸特异性内切蛋白酶冻干粉中加入复配锰盐2-8份、积雪草皂苷2-5份，混合后得到羟脯氨酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，放入玻璃瓶中包装，质检后入库。
17、因此，本专利技术采用上述成分的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其有益效果为：羟脯氨酸特异性内切蛋白酶的保存时间长，长时间保存后羟脯氨酸特异性蛋白酶的活性保留率高，复配锰盐提高羟脯氨酸特异性蛋白酶的活性，在应用时具有优秀表现。
18、下面通过实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
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1.一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：各组分按质量份数计包括，亚氨基酸特异性内切蛋白酶20-35份、复配锰盐2-8份、积雪草皂苷2-5份、pH缓冲调节剂0.1-3份、填充剂0.1-3份、糖类0.1-2.5份、表面活性剂0.1-1.5份和山梨酸钾0.01-0.5份。
2.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：填充剂包括甘露醇、甘氨酸、羟甲基纤维素、明胶中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：pH缓冲调节剂包括Tris-HCl、磷酸二氢钠-柠檬酸、磷酸二氢钾、柠檬酸-柠檬酸钠和组氨酸中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：糖类包括海藻糖、蔗糖、葡萄糖、菊糖和透明质酸钠中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：表面活性剂包括吐温-80、吐温-20、十二烷基硫酸钠、Triton X-100、蔗糖脂肪酸脂中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：复配锰盐的浓度为0.5-6mmol/L。
8.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：pH缓冲调节剂调节的pH范围为6.0-8.2。
9.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：亚氨基酸特异性内切蛋白酶为羟脯氨酸特异性内切蛋白酶，羟脯氨酸特异性内切蛋白酶来源于黄曲霉。
10.根据权利要求1-9任一项所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，
...【技术特征摘要】
1.一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：各组分按质量份数计包括，亚氨基酸特异性内切蛋白酶20-35份、复配锰盐2-8份、积雪草皂苷2-5份、ph缓冲调节剂0.1-3份、填充剂0.1-3份、糖类0.1-2.5份、表面活性剂0.1-1.5份和山梨酸钾0.01-0.5份。
2.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：填充剂包括甘露醇、甘氨酸、羟甲基纤维素、明胶中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：ph缓冲调节剂包括tris-hcl、磷酸二氢钠-柠檬酸、磷酸二氢钾、柠檬酸-柠檬酸钠和组氨酸中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，其特征在于：糖类包括海藻糖、蔗糖、葡萄糖、菊糖和透明质酸钠中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的一种亚氨基酸特异性内切蛋白酶复配酶...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵子方，郭红星，刘赛赛，李立，周尽学，
申请(专利权)人：海南华研胶原科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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