【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及一种sparc蛋白作为bp-3靶点在骨关节炎中的应用。
技术介绍
1、骨关节炎(osteoarthritis，oa)是一种慢性退行性关节疾病，通常系由于关节长期的机械应力、年龄增长、肥胖、代谢异常、炎症和氧化应激等原因引起关节软骨的退化和骨质增生，最终导致关节疼痛、肿胀和运动障碍。随着全球人口老龄化和肥胖问题的日益突显，骨关节炎患病率逐年上升，由此带来的社会、经济负担不断加重，目前已成为全球第四大致残性疾病。2020年，全球有5.95亿人患有骨关节炎，相当于全球人口的7.6％，预计到2050年，膝关节骨关节炎病例将增加74.9％。近年来，环境污染物的危害备受关注，有研究发现环境中广泛存在的多种内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals，edcs)在紊乱雌激素、诱导炎症反应以及干扰脂肪因子等方面起着重要作用，并且通过多种作用途径影响骨骼健康，我们通过横断面研究发现二苯甲酮-3(bp-3)暴露可能与人群中骨关节炎风险增加相关，但由于横断面研究设计存在局限性，且bp-3如何作用于人体并进而诱导oa仍需进一步明确。对此，通过组学测序、人群研究、质谱分析和体外实验，确定bp-3在人体中的毒性作用靶点，进而确定其在诱导oa中的作用，为bp-3的人体接触剂量及危害提供参考价值，筛选出的靶点也将为精准预防或延缓oa进程及实施针对性预防治疗提供新思路新依据。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的问题，本专利技术设计的目的在于提供一种spa
2、sparc蛋白作为bp-3靶点在骨关节炎中的应用，bp-3(cas:131-57-7)，或其在化学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体物质、或其代谢产物。
3、进一步地，sparc蛋白作为bp-3靶点在骨关节炎的前期筛查预警及延缓骨关节炎进程中的应用。
4、进一步地，sparc为富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白，也称作骨结合素和bm40，geneid:6678。
5、进一步地，所述sparc蛋白通过以下步骤进行筛选：
6、1)通过网络预测获取bp-3的潜在人体靶标；
7、2)再利用小分子蛋白位点质谱分析，进行bp-3与靶蛋白重组反应及质谱检测；
8、3)将骨关节炎患者软骨组织进行蛋白组学分析，筛选差异表达蛋白，与bp-3预测的人体靶点进行匹配；
9、4)采用分子实验对靶点进行验证靶点。
10、进一步地，步骤1)的具体方法为：使用pubchem数据库检索bp-3并下载其sdf格式文件，打开pharmmapper，点击submit job提交之前得到的sdf文件，在select targets set中选择预测范围为人类的靶点，点击submit发送任务，即会得到一个job id，预测完成后pharmmapper将结果发回.
11、进一步地，步骤2)的具体方法为：首先进行小分子质谱检测，确认小分子是否有碎裂，解析碎裂的元素组成；bp-3与靶蛋白重组反应及质谱检测，分为对照组和sm处理组，orbitrap系列质谱检测，鉴定sm在靶蛋白上的结合位点，ip免疫沉淀质谱检测，构建ptarget，转染细胞后用sm处理，ip富集target蛋白，orbitrap系列质谱检测，鉴定sm在靶蛋白上的结合位点。
12、进一步地，步骤3)的具体方法为：骨关节炎患者血液样品中加入sdt缓冲液，煮沸离心后上清液bca蛋白测定试剂盒定量，再进行sds-page电泳，每个样品取20μg蛋白分别与6x上样缓冲液混匀并煮沸5分钟，在12.5％sds-page凝胶上分离蛋白再通过考马斯蓝r-250染色观察蛋白质条带，fasp酶解后，进行反相色谱分离肽、dda质谱建库、dia质谱分析，最后将得到的蛋白数据进行分析。
13、进一步地，煮沸离心具体为沸15min，14000g离心40min。
14、本专利技术通过筛选环境污染物二苯甲酮-3在诱导骨关节炎中的人体靶标蛋白，进一步证实二苯甲酮-3通过作用于靶标蛋白sparc后，引起细胞死亡，进而诱导骨关节炎，同时，其中预测出来的二苯甲酮-3的靶点可用于骨关节炎的防治，具有广阔的应用前景。
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1.SPARC蛋白作为BP-3靶点在骨关节炎中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于SPARC蛋白作为BP-3靶点在骨关节炎的前期筛查预警及延缓骨关节炎进程中的应用。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于SPARC蛋白为富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述SPARC蛋白通过以下步骤进行筛选：
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于步骤1)的具体方法为：使用PubChem数据库检索BP-3并下载其SDF格式文件，打开PharmMapper，点击Submit Job提交之前得到的SDF文件，在Select Targets Set中选择预测范围为人类的靶点，点击Submit发送任务，即会得到一个Job ID，预测完成后PharmMapper将结果发回。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于步骤2)的具体方法为：首先进行小分子质谱检测，确认小分子是否有碎裂，解析碎裂的元素组成；BP-3与靶蛋白重组反应及质谱检测，分为对照组和SM处理组，Orbitrap系列质谱检测，鉴定SM在靶蛋
7.如权利要求4所述的应用，其特征在于步骤3)的具体方法为：骨关节炎患者血液样品中加入SDT缓冲液，煮沸离心后上清液BCA蛋白测定试剂盒定量，再进行SDS-PAGE电泳，每个样品取20μg蛋白分别与6X上样缓冲液混匀并煮沸5分钟，在12.5％SDS-PAGE凝胶上分离蛋白再通过考马斯蓝R-250染色观察蛋白质条带，FASP酶解后，进行反相色谱分离肽、DDA质谱建库、DIA质谱分析，最后将得到的蛋白数据进行分析。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于煮沸离心具体为沸15min，14000g离心40min。
...【技术特征摘要】
1.sparc蛋白作为bp-3靶点在骨关节炎中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于sparc蛋白作为bp-3靶点在骨关节炎的前期筛查预警及延缓骨关节炎进程中的应用。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于sparc蛋白为富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述sparc蛋白通过以下步骤进行筛选：
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于步骤1)的具体方法为：使用pubchem数据库检索bp-3并下载其sdf格式文件，打开pharmmapper，点击submit job提交之前得到的sdf文件，在select targets set中选择预测范围为人类的靶点，点击submit发送任务，即会得到一个job id，预测完成后pharmmapper将结果发回。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于步骤2)的具体方法为：首先进行小分子质谱检测，...
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