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一种新型植物来源α-葡聚糖磷酸化酶及其应用制造技术

技术编号:41380342 阅读:39 留言:0更新日期:2024-05-20 10:22
本发明专利技术公开了一种新型植物来源α‑葡聚糖磷酸化酶及其应用,属于基因工程和现代酶技术工程领域。本发明专利技术提供了来自Nicotiana attenuata的α‑葡聚糖磷酸化酶,对其催化可溶性淀粉磷酸解的最适pH、温度以及合成葡萄糖‑1‑磷酸的比酶活进行了研究,其比酶活达到了7U/mg;并对其在与纤维二糖磷酸化酶组成的级联反应体系中催化纤维二糖合成直链淀粉的性能进行了研究,催化30h时底物转化率达到28.9%。本发明专利技术筛选得到的α‑葡聚糖磷酸化酶在实际工业化生产中具备良好的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新型植物来源α-葡聚糖磷酸化酶及其应用,属于基因工程和现代酶技术工程领域。


技术介绍

1、α-葡聚糖磷酸化酶(ec 2.4.1.1)广泛存在于动物、植物和微生物中,催化α-1,4-葡聚糖的可逆磷酸化。其可以以直链淀粉为底物通过磷酸解的方式生成葡萄糖-1-磷酸;也可以在麦芽低聚糖存在的条件下以其作为引物,利用葡萄糖-1-磷酸合成直链淀粉。

2、在磷酸解生成葡萄糖-1-磷酸方向上,α-葡聚糖磷酸化酶能够以廉价的淀粉质、糊精等原料为底物,催化形成葡萄糖-1-磷酸。葡萄糖-1-磷酸通常由酶介导的生物催化产生,如蔗糖和蔗糖磷酸化酶,纤维二糖和纤维二糖磷酸化酶,纤维糊精和纤维糊精磷酸化酶,麦芽糖糊精或可溶性淀粉和α-葡聚糖磷酸化酶。然而,双糖(如蔗糖和纤维二糖)通常比淀粉更昂贵,每个双糖只生产一个葡萄糖-1-磷酸,导致理论产量仅有50%,因此以淀粉为底物的α-葡聚糖磷酸化酶具有更好的应用前景。目前针对α-葡聚糖磷酸化酶的筛选鉴定的研究主要集中在细菌来源,对于植物来源的研究较少。仅在2007年,陆婷婷等从马铃薯中提取马铃薯α-葡聚糖磷酸化酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种葡萄糖-1-磷酸的制备方法,其特征在于,所述方法为,将α-葡聚糖磷酸化酶酶制剂、固定化α-葡聚糖磷酸化酶、表达α-葡聚糖磷酸化酶的重组菌或采用表达α-葡聚糖磷酸化酶的重组菌制备得到的重组α-葡聚糖磷酸化酶,添加至含有底物可溶性淀粉的体系中进行反应,制备得到葡萄糖-1-磷酸;所述α-葡聚糖磷酸化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述可溶性淀粉为:由葡萄糖以α-1,4-糖苷键连接而成的无分支的均一性α-1,4-葡聚糖。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述反应条件为:pH为3.5~8.5,反应...

【技术特征摘要】

1.一种葡萄糖-1-磷酸的制备方法,其特征在于,所述方法为,将α-葡聚糖磷酸化酶酶制剂、固定化α-葡聚糖磷酸化酶、表达α-葡聚糖磷酸化酶的重组菌或采用表达α-葡聚糖磷酸化酶的重组菌制备得到的重组α-葡聚糖磷酸化酶,添加至含有底物可溶性淀粉的体系中进行反应,制备得到葡萄糖-1-磷酸;所述α-葡聚糖磷酸化酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述可溶性淀粉为:由葡萄糖以α-1,4-糖苷键连接而成的无分支的均一性α-1,4-葡聚糖。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述反应条件为:ph为3.5~8.5,反应温度为:25~50℃,底物可溶性淀粉的浓度为0.1~2.5%(w/v),反应时间为:10~30min。

4.一种合成直链淀粉的方法,其特征在于,所述方法为,将α-葡聚糖磷酸化酶酶制剂、固定化α-葡聚糖磷酸化酶、表达α-葡聚糖磷酸化酶的重组菌或采用表达α-葡聚糖磷酸化酶的重组菌制备得到的重组α-葡聚糖磷酸化酶,以及纤维二糖磷酸化酶酶制剂、固定化纤维二糖磷酸化酶、表达纤维二糖磷酸化酶的重组菌或采用表达纤维二糖磷酸化酶的重组菌制备得到的重组纤维二糖磷酸化酶,同时添加至含有底物纤维二糖和麦芽四糖的反应体系中,进行反应,制备得...

【专利技术属性】
技术研发人员:张涛高巍李梦丽江波
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:

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