【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及黑暗链霉菌生产，具体为一种黑暗链霉菌菌种生产工艺。
技术介绍
1、黑暗链霉菌(aspergillus parasiticus)是一种真菌，属于曲霉属(aspergillus)，它是一种产生黄曲霉毒素的菌种。黑暗链霉菌广泛存在于自然环境中，尤其是在土壤、植物残渣、谷物、坚果等食品和饲料中常能够找到它的踪迹。当条件适宜时，黑暗链霉菌会繁殖并产生黄曲霉毒素，可以用于制备多种化合物，如青霉素等。
2、由于黑暗链霉菌菌株的稳定性差，导致黑暗链霉菌菌株在长期培养过程中容易出现变异和突变，导致菌株的稳定性受到影响。为此本专利技术提出一种黑暗链霉菌菌种生产工艺。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，解决了黑暗链霉菌菌株在长期培养过程中容易出现变异和突变，导致菌株的稳定性受到影响的问题。
2、为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，包括以下步骤：
3、步骤一、菌株筛选和保存：从已知来源或自然环境中收集黑暗链霉菌样品，进行初步筛选，并选择出具有高产毒素和稳定性的优良菌株；
4、步骤二、菌种扩增和预培养：将选好的菌株接种到适当的培养基中进行扩增和预培养；
5、步骤三、菌种培养和发酵：将预培养的菌种接种到大规模发酵罐或槽中，进行液态发酵，通过结合pid控制算法，结合检测的结果，对发酵罐或槽内的生长环境进行自动化的调整；
6、步骤四、提取
7、步骤五、对步骤四中的提取物，通过进一步的纯化和分离，可以得到高纯度的黑暗链霉菌菌种和黄曲霉毒素；
8、步骤六、菌种保存和质量控制：将生产得到的黑暗链霉菌菌种进行保存，同时进行菌种的质量控制。
9、优选的，所述步骤一中初步筛选包括：
10、采样：从不同来源中采集黑暗链霉菌样品；
11、菌株分离：将采集的样品分离出黑暗链霉菌单菌株，并进行初步鉴定；
12、毒素检测：对分离得到的黑暗链霉菌菌株进行黄曲霉毒素检测，筛选出产生黄曲霉毒素较高的菌株；
13、稳定性评估：对产毒能力较高的菌株进行长期培养和传代，观察其稳定性和生长特性。
14、优选的，所述步骤二中培养基内包括：
15、特定营养条件：调整培养基的成分，增加特定碳源、氮源，提供有利于黄曲霉毒素合成的特定营养物质；
16、特定培养基成分：添加维生素作为培养基的次要成分，以促进黄曲霉毒素的合成；
17、产物诱导：通过添加微量的腺嘌呤、胞嘧啶诱导黄曲霉菌产生更多的毒素。
18、优选的，所述步骤二中扩增和预培养具体步骤如下：
19、初始培养基：将选好的菌株接种到含有基础培养基的培养瓶或培养皿中；
20、初步培养：在调节好温度和湿度下进行初步培养，以促进菌株的生长和繁殖；
21、选择性压力培养：在特定的诱导环境下进行连续培养，逐步引入选择性压力；
22、毒素检测：在选择性压力培养过程中，定期采集培养液样品进行黄曲霉毒素的检测；
23、菌种保存和质量控制：将产毒能力更高的菌株进行保存，并进行菌种的质量控制。
24、优选的，所述步骤三中液态发酵过程具体包括：
25、根据生产规模和工艺要求选择合适的发酵罐或槽，以保证培养和发酵条件的控制和稳定性；
26、根据生产规模，依据步骤二中的培养基组分比例的进行培养液的调配；
27、对发酵过程进行实时监测和记录，包括菌株的生长曲线、培养液的溶解氧、温度和ph值；
28、基于监测的数据，对发酵罐或槽进行自动化的环境控制。
29、优选的，所述步骤三中控制发酵罐或槽的生长温度为28～30℃，ph值为6.5～7.0，供氧充足。
30、优选的，所述步骤三中的控制算法公式为：
31、u＝kp*e+ki*∫e dt+kd*de/dt
32、其中，kp、ki、kd分别为比例、积分、微分系数，e为误差值，de/dt为误差变化率，∫edt为误差的积分值。
33、优选的，所述步骤四中预处理包括以下步骤：
34、将发酵液进行ph值和温度的调整；
35、将装有发酵液的离心瓶放入离心机中进行离心分离；
36、将离心分离后的上清液缓慢倒入过滤器中；
37、将通过过滤器的溶液收集到容器中，即得到含有黄曲霉毒素和黑暗链霉菌的提取物。
38、优选的，所述步骤五中纯化和分离具体步骤如下：
39、选择十八烷基硅胶作为固相的载体，同时调节提取物的溶剂、ph值条件，使其适应固相萃取的操作；
40、将提取物缓慢地通过固相萃取柱，使黄曲霉毒素与固相载体发生相互作用，并被吸附到固相材料上；
41、使用洗脱剂，将非目标成分从固相载体上洗脱下来，之后便可从载体上获得分离出的黄曲霉毒素；
42、固相载体在经过洗脱取出之后，对剩下的溶剂进行挥发，便可将黑暗链霉菌菌种分离。
43、优选的，所述步骤六中保存和质量控制包括：
44、将步骤五中得到的黑暗链霉菌菌种进行鉴定，确认其菌种的正确性和纯度；
45、将鉴定之后得到的黑暗链霉菌菌种分装到冷冻管中，添加甘油作为保护剂，然后放置在液氮罐中进行保存；
46、定期对保存的黑暗链霉菌菌种进行黄曲霉毒素含量检测、菌种活力；
47、对保存的黑暗链霉菌菌种进行传承和使用，以满足实际生产需要。
48、本专利技术提供了一种黑暗链霉菌菌种生产工艺。具备以下有益效果：
49、1、本专利技术通过在选取菌种的过程中，通过添加腺嘌呤、胞嘧啶诱导黑暗链霉菌产生更多的毒素，结合选择性压力培养，能够不断地获得产毒能力更强或更稳定的菌种，进而减少长期培养过程中出现变异和突变的情况，生产更加稳定。
50、2、本专利技术通过在不断地生产过程中，逐渐对经过诱导选择的菌株进行鉴别和不断的传承使用，从而使得生产过程中能够始终获得足够多的高产毒和高稳定的优良菌种，大幅的提供了生产的效率和产量。
51、3、本专利技术通过自动化的控制液态发酵培养的生长环境，配合检测的结果能够实时且准确的调整生产设备内的环境数据，确保环境数据处于黑暗链霉菌的最佳生长环境下，进一步的提高菌种和黄曲霉毒素的产量，同时减少人工的干预，降低劳动力的投入。
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1.一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤一中初步筛选包括：
3.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤二中培养基内包括：
4.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤二中扩增和预培养具体步骤如下：
5.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤三中液态发酵过程具体包括：
6.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤三中控制发酵罐或槽的生长温度为28～30℃，pH值为6.5～7.0，供氧充足。
7.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤三中的控制算法公式为：
8.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤四中预处理包括以下步骤：
9.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤五中纯化和分离具体步骤如下：p>
10.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤六中保存和质量控制包括：
...【技术特征摘要】
1.一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤一中初步筛选包括：
3.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤二中培养基内包括：
4.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤二中扩增和预培养具体步骤如下：
5.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生产工艺，其特征在于，所述步骤三中液态发酵过程具体包括：
6.根据权利要求1所述的一种黑暗链霉菌菌种生...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈文成，韩振国，封秀丽，张桂芳，朱明杰，周志霞，种利红，万宗坦，张丽娜，冯雷，
申请(专利权)人：濮阳泓天威药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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