一种血清中N末端B型利钠肽前体NT-proBNP的定值方法技术

本发明专利技术公开了一种血清中N末端B型利钠肽前体NT‑proBNP的定值方法，包括如下步骤：(1)合成NT‑proBNP特征肽段并测定其纯度；(2)重量法制备肽段工作溶液；(3)制备加标血清；(4)血清预处理；(5)血清净化；(6)蛋白质酶解；(7)高效液相色谱‑三重四极杆质谱检测特征肽段；(8)建立标准曲线定量血清中的NT‑proBNP含量。本发明专利技术方法能够在不使用抗体的前提下完成NT‑proBNP的非靶向定量，与传统靶向富集分析方法相比具有更高的分析效率和检测灵敏度，从而提高了定量结果的准确度。由于特征肽段的纯度定值结果可溯源至氨基酸国家有证标准物质，因此本方法得到的血清NT‑proBNP的定值结果同样具备计量学溯源性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及临床诊断标志物含量测定，特别是涉及一种血清中n末端b型利钠肽前体nt-probnp的定值方法。

技术介绍

1、n末端b型利钠肽前体(amino-terminal pro-b-type natriuretic peptide，nt-probnp)由76个氨基酸组成，平均分子量为8457.5da，同位素分子量为8452.4da。由于不含半胱氨酸，因此无二硫键形成，整体呈线性结构。在人体内，当心室肌细胞遭受外力刺激时，如充血高负荷、肺动脉压升高等，心室肌细胞会发生牵扯、变形、损伤，此刻nt-probnp的前体分子肽(probnp)会被大量翻译、表达出来。在弗林蛋白酶、柯林蛋白酶的共同作用下，probnp被降解为两段多肽分子，分别为bnp和nt-probnp；其中bnp是probnp的羧基端序列，nt-probnp是probnp的氨基端序列。nt-probnp在肌细胞中表达后会穿过细胞膜进入细胞间质，随后释放到外周血中参与循环。由于血液中nt-probnp含量与心力衰竭等心肌损伤疾病呈正相关，因此nt-probnp成为非常重要的心力衰竭诊断、分级、预本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种血清中N末端B型利钠肽前体NT-proBNP的定值方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)合成NT-proBNP特征肽段并测定其纯度；(2)重量法制备肽段工作溶液；

2.根据权利要求1所述的血清中N末端B型利钠肽前体NT-proBNP的定值方法，其特征在于：所述步骤(1)具体为，通过固相合成手段获取NT-proBNP特征肽段QE、SE以及同位素标记的L-QE、L-SE；

3.根据权利要求2所述的血清中N末端B型利钠肽前体NT-proBNP的定值方法，其特征在于：所述步骤(2)具体为，使用校准后的精密天平准确称量特征肽段粉末和溶剂，所述溶剂为含0.1％甲酸的纯...

【技术特征摘要】

1.一种血清中n末端b型利钠肽前体nt-probnp的定值方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)合成nt-probnp特征肽段并测定其纯度；(2)重量法制备肽段工作溶液；

2.根据权利要求1所述的血清中n末端b型利钠肽前体nt-probnp的定值方法，其特征在于：所述步骤(1)具体为，通过固相合成手段获取nt-probnp特征肽段qe、se以及同位素标记的l-qe、l-se；

3.根据权利要求2所述的血清中n末端b型利钠肽前体nt-probnp的定值方法，其特征在于：所述步骤(2)具体为，使用校准后的精密天平准确称量特征肽段粉末和溶剂，所述溶剂为含0.1％甲酸的纯水；溶解后形成已知质量浓度的母液，并进行稀释，形成qe、se标准工作液；以同样方式获取l-qe、l-se标准工作液。

4.根据权利要求3所述的血清中n末端b型利钠肽前体nt-probnp的定值方法，其特征在于：所述步骤(3)具体为，使用精密天平分别称量qe、se、l-qe、l-se工作液和健康人血清样本，随后混合，根据所添加qe、l-qe，se、l-se的质量比，将健康血清定义为低标、等标、高标血清；

5.根据权利要求4所述的血清中n末端b型利钠肽前体nt-probnp的定值方法，其特征在于：所述步骤(4)具体为，首先配制1％脱氧胆酸钠水溶液，与1ml血清样本等体积混匀后超声5min，随后室温下振荡10min；加入2ml乙腈进行变性沉淀，充分混匀后置于振荡器中10min，最后在15000rpm下离心15min，使用移液器吸取上清后待用。

6.根据权利要求5所述的血清中n末端b型利钠...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖鹏，陈金超，李红梅，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：