【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物细胞工程领域，具体涉及含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基及组培方法。
技术介绍
1、兰属(cymbidium)是兰科(orchidaceae)五大观赏属之一，至2023年12月20日，世界植物在线(https://powo.science.kew.org)中记录了全世界兰属植物共105个原生种，中国生物物种名录(http://www.sp2000.org.cn/)记录了中国分布了58个原生种。兰属的地生兰种类如春兰(c.goeringii)、墨兰(c.sinense)、蕙兰(c.faberi)、建兰(c.ensifolium)、寒兰(c.kanran)、墨兰(c.sinense)和莲瓣兰(c.tortisepalum)等被称为中国兰花，简称国兰(徐婉，兰属植物资源与育种研究进展，园艺学报，2022)。春兰是我国国兰中资源最丰富、分布最广的种类之一(陈心启，国兰及其品种全书，北京:中国林业出版社，2011)，因在春季(1-3月)开花而得名，开花后具有清幽的香气，是中国传统名花之一。春兰因花色淡雅、花香馥郁、叶姿飘逸及悠久的国兰文化而备受国人喜爱，栽培历史悠久，兼具审美、文化和经济价值，因此市场需求不断增加。近年来，由于过度采挖、生境破坏等问题，春兰野生资源急剧减少，出现了供不应求的现象。
2、为了保护春兰野生资源，满足市场空前的需求，进行春兰组培快繁体系研究显得尤其重要。春兰和其他兰科植物一样，种子缺少胚乳，自然状态下难以萌发，常用分株方式进行繁殖，所需时间较长且繁殖效率低，难以满足市场需求。采用组
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基和含抗褐化剂的春兰根状茎组织培养基，克服了现有春兰组培体系的繁殖系数低、褐化率较高和培养周期较长的技术问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术技术方案如下：
3、含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，包括增殖培养基；所述增殖培养基为添加有动物源添加物的基础增殖培养基；所述动物源添加物的原料包括花甲肉、皮蛋蛋黄、虾仁和鱿鱼中的至少一种。
4、采用上述技术方案，技术原理以及有益效果如下：腐烂动物添加物含有丰富的腐胺，腐胺(putrescine)又称丁二胺，属于脂肪族直链多胺类生物胺，其在调节植物生长发育、延迟衰老和提高抗逆性等方面发挥重要作用，目前已报道的相关文献中，腐胺常被用来处理诱导黄瓜、番茄、甜橙、杏等果实的采后抗冷性，显著维持果实品质。而目前植物组培实验中，使用腐胺来提升植株(例如兰科的根状茎)的增殖效果，还比较少见。并且腐胺对有机体产生一定的毒害作用故限制了应用推广(周凌聿等，水产品中生物胺的检测技术研究进展，肉类研究,2022)。
5、由于腐胺普遍存在于水产和畜禽类食品中，本技术方案向培养基中直接添加一定量的腐烂动物源添加物(经密封放置处理的动物组织等)，提高组培快繁效率，既避免药品毒害问题，同时也发挥了循环经济的效用。腐烂动物源添加物在植物组培快繁中未见应用，属于待开发的新型的添加物。专利技术人在本研究中发现，向培养基中添加腐烂鱿鱼可以显著促进根状茎的增殖，相对于其他腐烂动物源添加物，腐烂鱿鱼对于根状茎的增殖产生了更优的技术效果。另外，腐烂动物源添加物鱿鱼等安全无毒，方便获取，添加少量即可明显促进外植体增殖生长，显著高于不添加腐烂动物源添加物的对照处理。
6、进一步，所述基础增殖培养基为含有6-ba、naa、蔗糖、琼脂(ag)、活性炭(ac)的1/2ms培养基。
7、进一步，所述动物源添加物由如下方法制备：将原料密封放置后，经匀浆处理后获得。
8、进一步，以固体物质计，所述动物源添加物的原料为花甲肉时，所述动物源添加物的添加量为0.5-10.0g/l；所述动物源添加物的原料为皮蛋蛋黄，所述动物源添加物的添加量为0.1-5.0g/l；所述动物源添加物的原料为虾仁时，所述动物源添加物的添加量为0.2-5.0g/l；所述动物源添加物的原料为鱿鱼时，所述动物源添加物的添加量为0.05-1.0g/l。
9、其中，0.1g/l和0.5g/l皮蛋蛋黄均促进增殖。1.0g/l花甲肉和0.5g/l虾仁对根状茎的增殖有非常显著的促进作用。
10、进一步，所述动物源添加物的原料为鱿鱼；所述动物源添加物的添加量为0.1g/l。经过对四种腐烂动物源添加物的筛选研究，发现鱿鱼对春兰根状茎的增殖具有显著的促进作用，可将鱿鱼添加至春兰根状茎的增殖培养基中，促进组织增殖，加速春兰培育进程。
11、进一步，含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，还包括分化培养基；所述分化培养基为添加有抗褐化剂的基础分化培养基；所述抗褐化剂包括二硫苏糖醇(dtt)、半胱氨酸、谷胱甘肽(gsh)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、柠檬酸(ca)、琥珀酸中的至少一种。
12、进一步，所述基础分化培养基为含有6-ba、naa、蔗糖、琼脂的1/2ms培养基。
13、进一步，聚乙烯吡咯烷酮在分化培养基中的浓度为1.0-5.0g/l，ca和dtt在分化培养基中的浓度分别为0.25-3.0g/l，琥珀酸和半胱氨酸在分化培养基中的浓度为0.05-0.25g/l，gsh在分化培养基中的浓度为0.1-0.5g/l。
14、进一步，所述抗褐化剂为琥珀酸，其工作浓度为0.05-0.25g/l。
15、经过对六种抗褐化剂的筛选研究，发现琥珀酸对春本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：包括增殖培养基；所述增殖培养基为添加有动物源添加物的基础增殖培养基；所述动物源添加物的原料包括花甲肉、皮蛋蛋黄、虾仁和鱿鱼中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：所述基础增殖培养基为含有6-BA、NAA、蔗糖、琼脂、活性炭的1/2MS培养基。
3.根据权利要求2所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：所述动物源添加物由如下方法制备：将原料密封放置后，经匀浆处理后获得。
4.根据权利要求3所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：以固体物质计，所述动物源添加物的原料为花甲肉时，所述动物源添加物的添加量为0.5-10.0g/L；所述动物源添加物的原料为皮蛋蛋黄，所述动物源添加物的添加量为0.1-5.0g/L；所述动物源添加物的原料为虾仁时，所述动物源添加物的添加量为0.2-5.0g/L；所述动物源添加物的原料为鱿鱼时，所述动物源添加物的添加量为0.05-1.0g/L。
5.根据权利要求4所述的含动物源添加
6.根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：还包括分化培养基；所述分化培养基为添加有抗褐化剂的基础分化培养基；所述抗褐化剂包括二硫苏糖醇、半胱氨酸、谷胱甘肽、聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、琥珀酸中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：所述基础分化培养基为含有6-BA、NAA、蔗糖、琼脂的1/2MS培养基。
8.根据权利要求7所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：聚乙烯吡咯烷酮在分化培养基中的浓度为1.0-5.0g/L，柠檬酸和二硫苏糖醇在分化培养基中的浓度分别为0.25-3.0g/L，琥珀酸和半胱氨酸在分化培养基中的浓度为0.05-0.25g/L，谷胱甘肽在分化培养基中的浓度为0.1-0.5g/L。
9.根据权利要求8所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：所述抗褐化剂为琥珀酸，其工作浓度为0.05-0.25g/L。
10.一种春兰根状茎组织培养的方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：
...【技术特征摘要】
1.含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：包括增殖培养基；所述增殖培养基为添加有动物源添加物的基础增殖培养基；所述动物源添加物的原料包括花甲肉、皮蛋蛋黄、虾仁和鱿鱼中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：所述基础增殖培养基为含有6-ba、naa、蔗糖、琼脂、活性炭的1/2ms培养基。
3.根据权利要求2所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：所述动物源添加物由如下方法制备：将原料密封放置后，经匀浆处理后获得。
4.根据权利要求3所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：以固体物质计，所述动物源添加物的原料为花甲肉时，所述动物源添加物的添加量为0.5-10.0g/l；所述动物源添加物的原料为皮蛋蛋黄，所述动物源添加物的添加量为0.1-5.0g/l；所述动物源添加物的原料为虾仁时，所述动物源添加物的添加量为0.2-5.0g/l；所述动物源添加物的原料为鱿鱼时，所述动物源添加物的添加量为0.05-1.0g/l。
5.根据权利要求4所述的含动物源添加物的春兰根状茎组织培养基，其特征在于：所述动物源添加物...
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