持续释放的白细胞介素的药物配方及其治疗学应用组成比例

本发明专利技术涉及新颖的、基于稳定的、流态溶液胶体悬浮物的持续释放的白细胞介素（ＩＬ）（和一种或多种其他可能的活性物质）的药物配方，本发明专利技术还涉及这些配方的应用，尤其在治疗学上的应用。本发明专利技术的目标在于提供一种持续释放白细胞介素（和一种或多种其他可能的活性成分）的液体药物配方，该配方在胃肠外注射后，可以显著地延长ＩＬ在体内的释放时间，同时减少ＩＬ的血浆浓度峰，而且，所述配方可以稳定存储，并且是生物相容的，可生物降解，无毒和非致免疫性的，并具有良好的局部耐受性。本发明专利技术配方是基于携带疏水基（ＨＧ）的水溶性可生物降解的聚合物的超微化颗粒的低粘度水溶胶体悬浮物，所述颗粒非共价地与至少一种白细胞介素（和一种或多种其他可能的活性成分）结合，并在注射位点形成胶凝体沉着物，该胶凝由存在于生理介质的蛋白质而引起。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】持续释放的白细胞介素的药物配方及其治疗学应用
本专利技术涉及新颖的、基于稳定的、流态溶液胶体悬浮物的持续释放的蛋白质活性成分的药物配方，即白细胞介素(IL)，本专利技术还涉及这些配方在治疗学上的应用。这些活性药物配方对人类和动物均有效。
技术介绍
白细胞介素是一组属于细胞因子家族的蛋白质。它们具有调节炎症反应和免疫反应的众多活性。然而，它们的主要作用是活化和诱导T淋巴细胞增殖。IL-1，IL-2，IL-11和IL-12是该家族的重要成员之一。例如，IL-2通过抗原激活T淋巴细胞而产生。IL-2的用途在于激活其他的T淋巴细胞，以启动它们的活化作用和分化作用，从而调节细胞介导的免疫反应。白细胞介素用于治疗学，但是它们为众人所熟知的毒性是中断治疗的主要原因。例如，就IL-2来说，在临床使用过程中，观察到的主要副作用为发烧，恶心，腹泻，皮肤反应，关节疼痛和情感淡漠。在一些病例中，患者需要住院治疗以得到特护，并且，有人指出，在这些罕有的病例中，IL-2注射剂和患者的死亡有关。撇开IL的毒性不谈，持续释放的治疗用蛋白质(白细胞介素为代表)的另一个需要考虑的因素是，要尽可能地确保患者的血浆蛋白质浓度，使之接近健康者的值。这个目标因为IL在血浆里存在的时间短而不能实现，因此必须重复注射IL，而这样的作法是很受限制的。于是，治疗用蛋白质的血浆浓度具有“锯齿”形，特点是具有高浓度的峰和极低浓缩的谷。由于治疗用蛋白质的如白细胞介素等等(更精确的说，是白细胞介素IL2)具有高毒性，浓度峰大大高于健康受试者的基础浓度，而具有非常显著的有害效应。另外，浓度谷又低于治疗所必需的浓度，所以患者得到的是不良的治疗效果，而承受的是严重的、长期的副作用。此外，为保证患者的血浆白细胞介素浓度接近治疗的理想值，所讨论-->的治疗用蛋白质的药物配方必须是持续释放的，以限制血浆浓度随着时间的变化。而且，这个活性配方优选应该符合以下为所属领域的技术人员所熟知的规范：1-持续释放一种或多种活性的和非变性的(未修饰的)白细胞介素，以使血浆浓度保持在治疗学水平，2-可充分流动的液态，用于容易地注射，并可在滤过器上通过滤过作用除菌，该滤过器的孔径小于或等于0.2微米，3-稳定的液态，4-生物适应性和生物可降解性，5-无毒，6-非致免疫性，7-优良的局部耐受性。现有技术已经建议了一些方法，力求实现这些目标。在第一个方法中，将天然的治疗用蛋白质与一个或多个聚合物链共价连接，或与蛋白质例如人血清白蛋白(HSA)共价连接。经过这样改性的蛋白质和它的受体具有弱的亲合力，并且它在总循环中的半衰期可观地提高了。从而，血浆蛋白质浓度峰和谷之间的变化幅度可观地降低了。因此，在它的专利US-B-4 766 106里，Cetus建议将聚氧乙烯链与白细胞介素2连接，以提高它在血浆中的溶解度和半衰期。同样地，Human GenomeScience建议(US-B-5876969)将白细胞介素与人血清白蛋白共价连接，以提高它们在血浆中的半衰期。这些对治疗用蛋白质的化学修饰的步骤通常具有两个主要的缺点。第一，从长远观点来看，这些蛋白质(如今不再是人类蛋白质)的不可逆转的改性可以导致毒性和致免疫问题。第二个缺点源于，白细胞介素IL2经这样改性后，生物活性的部分损失。第二个方法建议通过使用包含至少一种聚合物和一种活性成分的配方来提高活性周期，这种配方在室温和大气环境下为液体，是可注射的，并且在注射后变得更加粘稠，例如，在pH和/或温度改变的效果之下。在这种情况下，美国专利US-B-6 143 314公开了一种用于活性成分控释的有机聚合物溶液，该溶液在注射后形成一种固体植入物。该溶液包含：-->(A)重量百分比10到80％的热塑性聚合物基质，该基质是生物相容的，可生物降解的和不溶于水或生理液体(例如，一种聚乳和/或聚羟基聚合物)；(B)有机溶剂，例如N-甲基吡咯烷酮，其分散在生理液体中；(C)活性成分(AP)；(D)最后，重量百分比1到50％的控释剂，其由聚乳-羟基/聚乙二醇型的嵌段共聚物组成。经注射后，(B)散布或分散在生理液体中。(A)形成包封(C)的植入物，由于它不是共价结合到(A)或(D)上，因此有效成分在体内缓慢释放。这个方法的主要缺点是有机溶剂(B)的使用，它有可能使活性成分(C)(例如，治疗用蛋白质)变性以及对患者产生毒性。另外，聚合物(A)在体内水解产生的酸剂会引起局部耐受性的问题。PCT申请WO-A-99/18142和WO-A-00/18821涉及一种聚合物水溶液，其包含溶解状态或胶体形态的活性成分，可用于恒温动物，特别是以注射方式，并且，由于生理温度高于它们的胶凝点，它们在体内形成一种活性成分(例如，胰岛素)的胶凝体沉淀。以这种方法成形的胶凝体以持续方式释放活性成分。这些特殊的可生物降解的聚合物是ABA或BAB三嵌段，其中A＝聚乳-羟基共聚物体(PLAGA)或聚乳聚合物(PLA)，B＝聚乙二醇。这些三-嵌段共聚物的液体向胶凝体的转变温度例如为36，34，30和26℃。根据美国专利US-B-6 143 314的聚合物(A)，这些ABA或BAB三-嵌段共聚物在体内水解产生的酸剂不具有适当的局部耐受性。PCT申请WO-A-98/11874描述的药物配方包括一种脂性活性成分，一种胶凝聚合物(Gelrite＝脱乙酰基的洁冷胶或乙基羟基植物纤维质)和一种表面活性剂。聚合物/表面活性剂之间的相互影响，和以生理浓度存在的电解质，例如Ca++离子，就聚合物Gelrite来说，导致形成包含聚合物/表面活性剂聚结物，脂性活性成分非共价地与其结合。这个配方计划局部给药到目标器官上(例如眼睛)。聚结物/活性成分结合体在原位形成，使得活性成分缓慢释放到目标器官中。第三种方法力求在保留蛋白质的生物活性的同时延长它的活性时间，-->该方法使用一种非变性治疗用蛋白质，并将它加入到基于生物相容的聚合物的微球或植入物中。美国专利US-B-6 500 448和美国专利申请US-A-2003/0133980特别阐明了这种方法，其中描述了一种持续释放人生长激素(hGH)的组合物，该组合物中的激素蛋白质首先与一种金属络合而稳定，然后分散到一种生物相容的聚合母体中。这种生物相容的聚合物可以是聚交酯，聚乙醇酸交酯或聚(丙交酯-共聚-乙交酯)共聚体。该组合物可以以微球混悬物形式存在于羧甲基纤维素钠盐溶液中。这个方法有一些缺点：首先，在微球制备过程中，蛋白质接触到有可能使之变性的有机溶剂。其次，该微球很大(1到1000微米)，用它做成注射剂以及在滤过器上灭菌时均受到了限制。最后，当聚合物在原位水解时，会出现局部耐受性的问题。第四种方法发展了治疗用蛋白质(特别是白细胞介素)的形状，其由载有蛋白质的纳米微粒液体悬浊液组成。后者使在低粘度的液体溶剂中给药天然蛋白质成为可能。根据持续释放的第一种方法，持续释放的纳米微粒混悬物由脂质体混悬物组成，其中包封了未修饰的天然治疗用蛋白质。注射后，蛋白质从脂质体种缓慢释放，从而延长了蛋白质存在于总循环中的时间。例如，Frossen等人在Cancer Res.，43，P.546，1983的论文中描述了抗肿瘤剂包封在脂质体中，以提高它们的治疗作用。然而，药物的释放本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种持续释放白细胞介素的液体药物配方，该配方包括一种基于超微化颗粒的水可溶性可生物降解的聚合物（ＰＯ）低粘度的液态胶体悬浮物，所述的聚合物（ＰＯ）携带疏水基（ＨＧ），所述颗粒是非共价地与至少一个白细胞介素连接，并且可选择地与至少一个活性成分（ＡＰ）连接，其特征在于：　　　　◆混悬物的分散剂基本上由水组成，　　　　◆所述配方能够用于胃肠外能够，并在体内形成胶凝体沉着物，这种胶凝体沉着物的形成：　　　　○一方面，至少部分地由至少一个存在于体内的生理蛋白质所引起，　　　　○另一方面，使活性成分在给药２４小时之后在体内的释放时间得以延长和控制，　　　　◆它在注射条件下是液体，　　　　◆它在生理温度和／或生理ｐＨ和／在有下列物质存在情况下仍是液体：　　　　＊处于生理浓度的生理电解质，　　　　＊和／或至少一种表面活性剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】FR 2003-11-21 03508881.一种持续释放白细胞介素的液体药物配方，该配方包括一种基于超微化颗粒的水可溶性可生物降解的聚合物(PO)低粘度的液态胶体悬浮物，所述的聚合物(PO)携带疏水基(HG)，所述颗粒是非共价地与至少一个白细胞介素连接，并且可选择地与至少一个活性成分(AP)连接，其特征在于：◆混悬物的分散剂基本上由水组成，◆所述配方能够用于胃肠外能够，并在体内形成胶凝体沉着物，这种胶凝体沉着物的形成：○一方面，至少部分地由至少一个存在于体内的生理蛋白质所引起，○另一方面，使活性成分在给药24小时之后在体内的释放时间得以延长和控制，◆它在注射条件下是液体，◆它在生理温度和/或生理pH和/在有下列物质存在情况下仍是液体：*处于生理浓度的生理电解质，*和/或至少一种表面活性剂。2.如权利要求1所述的配方，其特征在于，[PO]的浓度定在足够的高位值，以使胃肠外注射后，在至少一种蛋白质存在的情况下，胶凝体沉着物在体内形成。3.持续释放白细胞介素和可选的其他活性成分(AP)的液体药物配方，该配方：○在大气环境下是液体，○在生理温度和/或生理pH和/或有下列物质存在情况下也是液体：*处于生理浓度的生理电解质，*和/或至少一种表面活性剂。○和包括一种基于超微化颗粒的水可溶性可生物降解的聚合物PO的低粘度的液态胶体悬浮物，所述聚合物携带疏水基HG，所述颗粒-->非共价地与至少一种白细胞介素(和可选的至少一种其他活性成分)连接，混悬物的分散剂基本上由水组成。其特征在于，[PO]浓度定在足够的高位值，以使胃肠外注射后，在至少一种蛋白质存在的情况下，胶凝体沉着物在体外形成。4.如前任一权利要求所述的配方，其特征在于，[PO]的浓度是：■[PO]≥0.9.C1，■优选20.C1≥[PO]≥C1，■更优选10.C1≥[PO]≥C1，其中，C1是聚合物颗粒的“诱导胶凝”浓度，以IG测试测量。5.如前任一权利要求所述的配方，其特征在于，它的粘度在25℃时小于或等于5Pa.S。6.如前任一权利要求所述的配方，其特征在于，该聚合物PO是由天冬氨酸单元和/或谷氨酸单元形成的聚胺酸，至少一部分这些单元携带包含至少一个疏水基(HG)。7.如权利要求6所述的配方，其特征在于，该PO可以由下列通式(I)定义：■其中，R1是H，C2到C10的直链烷基或C3到C10的支链烷基，苯基，末端氨基酸单元或-R4-[HG]；■R2是H，C2到C10的直链酰基或C3到C10的支链酰基基团，聚谷氨酸或-R4-[HG]；-->■R3是H或阳离子单元，优选选自：-金属阳离子，优选自包括钠，碳酸氢钾，谷氨酸钙和镁的亚群，-有机阳离子，优选自亚群：●基于胺的阳离子，●基于低胺的阳离子，●基于聚胺的阳离子(优选聚氮丙啶)，●基于氨基酸的阳离子，优选选自包括基于赖胺酸或胍基戊氨酸的阳离子类。-以及阳离子聚胺酸，优选选自包括聚赖胺酸和低赖胺酸的亚群；■R4是基于1到4个氨基酸单元的直接键或“间隔基”；■单独地，A是基团-CH2-(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-(谷氨酸单元)；■n/(n+m)为摩尔连接率，在0.5到100mol％之间■n/(n+m)为摩尔连接率，pH为7，25℃时溶于水中的PO的摩尔连接率值是足够低的，从而形成PO超微化颗粒的胶体悬浮物，n/(n+m)优选在1和25mol％之间，更优选在1和15mol％之间；■n+m为聚合度，其在10到1000之间，优选在50和300之间；■HG是疏水基。8.如权利要求6所述的配方，其特征在于，该PO是以下通式(II)，(III)和(IV)中的一种：-->其中：■HG是疏水基；■R30是C2到C6的直链烷基；■R3’是H或阳离子单元，优选自：-金属阳离子，优选选自包括钠，碳酸氢钾，谷氨酸钙和镁的亚群，亚群，-有机阳离子，优选自：●基于胺的阳离子，●基于低胺的阳离子，●基于聚胺的阳离子(优选聚氮丙啶)，●基于氨基酸的阳离子，优选选自包括基于赖胺酸或胍基戊氨酸的阳离子类。-以及阳离子聚胺酸，优选选自包括聚赖胺酸和低赖胺酸的亚群；■R50是C2到C6的烷基，二烷基或二胺基；■R4是基于1到4个氨基酸单元的直接键或“间隔基”；■单独地，A是基团-CH2-(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-(谷氨酸单元)；■n’+m’或n”为聚合度，其在10到1000之间，优选在50和300之间。9.如权利要求7或8所述的配方，其特征在于，该PO的nHG基团彼此独立，为下式的单价基团：其中，-R5是甲基(丙胺酸)，异丙基(缬氨酸)，异丁基(亮氨酸)，仲丁基(异亮氨酸基)或苯基(苯基丙氨酸)；-->-R6是含6到30个碳原子的疏水基团；-1为0到6。10.如权利要求9所述的配方，其特征在于，该PO的所有或部分疏水基R6是独立的，选自基团包括：■含6到30个碳原子的直链或支链烷氧基，可选地，含至少一个杂原子(优选O和/或N和/或S)和/或至少一个不饱和单元，■含6到30个碳原子的烷氧基，其具有一个或多个融合碳环，可选地，含至少一个不饱和单元和/或至少一个杂原子(优选O和/或N和/或S)，■含7到30个碳原子的芳氧基芳烷氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：索菲比尼翁，雷米梅吕埃克斯，奥利维耶苏拉，
申请(专利权)人：弗拉梅技术公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]