本发明专利技术属于免疫细胞技术领域，具体涉及一种用于T细胞的培养基及培养方法。本发明专利技术提供的用于T细胞的培养基包括：X‑VIVO 15培养基、IL‑2、IL‑15、CD3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素。培养基中添加的杜拉鲁肽、丁香脂素协同作用能够提升T细胞的增殖能力；培养基中添加的聚苯乙烯磺酸钠能够显著提升T细胞的纯度；培养基中未添加血清，能够降低实验成本。细胞因子含量测试结果也证明了本发明专利技术提供的培养基还能够促进T细胞分泌细胞因子，从而能够提升T细胞的活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫细胞，具体涉及一种用于t细胞的培养基及培养方法。
技术介绍
1、淋巴细胞主要包括t淋巴细胞、b淋巴细胞、nk细胞。t淋巴细胞又称t细胞，是由胸腺内的淋巴干细胞分化而来。在淋巴细胞中，t细胞的占比较高，且功能也较为复杂。根据免疫应答功能，t细胞被划分为：细胞毒性t细胞、辅助性t细胞以及抑制性t细胞等亚群。t细胞的免疫应答功能主要包含两种形式：一种是释放淋巴因子，淋巴因子通过刺激b细胞分泌抗体，抗体与靶细胞的相互作用，从而杀伤靶细胞；另一种是通过与靶细胞的特异性结合，直接接触靶细胞，导致靶细胞膜破损，从而杀伤靶细胞。t细胞的细胞膜上存在多种不同的表面标志物，包括：cd3、cd4、cd8等。表面标志物是t细胞识别抗原，接受信号刺激的分子基因，同时也能够依据表面标志物的含量来区别t细胞的类型以及所属的亚群。
2、人体内存在t细胞，但是t细胞数量较少。因此，为了满足临床需求，通常需要将t细胞进行体外培养、扩增后再输回体内。细胞的体外培养需要添加培养基来维持细胞的生命活动，培养基也会影响细胞的性能。随着技术的日益成熟，对于体外培养后t细胞的性能也产生了新的要求。因此，需要对培养基的成分进行改进，使其不仅仅满足维持细胞基本生命活动的需求，更能够满足临床对于t细胞活性的需求。现有技术中的t细胞培养基，大多添加了胎牛血清成分，胎牛血清价格昂贵，会增加实验成本；还存在获得的t细胞纯度低、增殖速度慢等问题。因此，本专利技术提供了一种新的t培养基，该培养基既能够改善t细胞的纯度，增殖速度，还能够降低实验成本。
/>技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种用于t细胞的培养基，该培养基中未添加血清成分，能够有效降低实验成本，且t细胞纯度高、增殖速度快。
2、本专利技术的第二目的在于提供一种t细胞的培养方法，该方法简单易操作。
3、为了实现本专利技术的目的之一，本专利技术采用如下技术方案：
4、用于t细胞的培养基，包括x-vivo 15培养基、il-2、il-15、cd3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素。
5、优选地，所述il-2、il-15、cd3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素在x-vivo 15培养基中的含量为：100~200u/ml il-2、62~85μg/l il-15、15~37μg/l cd3单抗、105~120μg/l聚苯乙烯磺酸钠、4~18μg/l杜拉鲁肽、25~46μg/l丁香脂素。
6、优选地，所述il-2、il-15、cd3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素在x-vivo 15培养基中的含量为：150u/ml il-2、73μg/l il-15、28μg/l cd3单抗、112μg/l聚苯乙烯磺酸钠、9μg/l杜拉鲁肽、31μg/l丁香脂素。
7、为了实现本专利技术的目的之二，本专利技术采用如下技术方案：
8、t细胞的培养方法，包括以下步骤：将外周血单个核细胞接种于上述培养基中进行培养12~14天，获得t细胞。
9、优选地，所述外周血单个核细胞的获取方式为：使用添加了肝素钠的采血管收集新鲜外周血，离心后获得血浆，在血浆中加入等体积的生理盐水稀释，再加入淋巴细胞分离液，经离心、清洗后获得外周血单个核细胞。
10、优选地，所述外周血单个核细胞在培养基中接种的密度为0.5×106～3×106个/ml。
11、优选地，所述培养所需条件是：温度为37℃、二氧化碳浓度为5%。
12、优选地，所述培养中需要每2~3天更换一次培养基，维持细胞密度在0.5×106～3×106个/ml。
13、与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要在于：
14、本专利技术提供的用于t细胞的培养基包括：x-vivo 15培养基、il-2、il-15、cd3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素。培养基中添加的杜拉鲁肽、丁香脂素协同作用能够提升t细胞的增殖能力；培养基中添加的聚苯乙烯磺酸钠能够显著提升t细胞的纯度；培养基中未添加血清，能够降低实验成本。细胞因子含量测试结果也证明了本专利技术提供的培养基还能够促进t细胞分泌细胞因子，从而能够提升t细胞的活性。
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【技术保护点】
1.用于T细胞的培养基，其特征在于，包括X-VIVO 15培养基、IL-2、IL-15、CD3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素。
2. 如权利要求1所述用于T细胞的培养基，其特征在于，所述IL-2、IL-15、CD3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素在X-VIVO 15培养基中的含量为：100~200U/mL IL-2、62~85μg/L IL-15、15~37μg/L CD3单抗、105~120μg/L聚苯乙烯磺酸钠、4~18μg/L杜拉鲁肽、25~46μg/L丁香脂素。
3. 如权利要求1所述用于T细胞的培养基，其特征在于，所述IL-2、IL-15、CD3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素在X-VIVO 15培养基中的含量为：150U/mL IL-2、73μg/LIL-15、28μg/L CD3单抗、112μg/L聚苯乙烯磺酸钠、9μg/L杜拉鲁肽、31μg/L丁香脂素。
4.T细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将外周血单个核细胞接种于权利要求1~3任一项所述的培养基中进行培养12~14天，获得T细胞。
<p>5.如权利要求4所述T细胞的培养方法，其特征在于，所述外周血单个核细胞的获取方式为：使用添加了肝素钠的采血管收集新鲜外周血，离心后获得血浆，在血浆中加入等体积的生理盐水稀释，再加入淋巴细胞分离液，经离心、清洗后获得外周血单个核细胞。6.如权利要求4所述T细胞的培养方法，其特征在于，所述外周血单个核细胞在培养基中接种的密度为0.5×106～3×106个/mL。
7.如权利要求4所述T细胞的培养方法，其特征在于，所述培养所需条件是：温度为37℃、二氧化碳浓度为5%。
8.如权利要求4所述T细胞的培养方法，其特征在于，所述培养中需要每2~3天更换一次培养基，维持细胞密度在0.5×106～3×106个/mL。
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【技术特征摘要】
1.用于t细胞的培养基，其特征在于，包括x-vivo 15培养基、il-2、il-15、cd3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素。
2. 如权利要求1所述用于t细胞的培养基，其特征在于，所述il-2、il-15、cd3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素在x-vivo 15培养基中的含量为：100~200u/ml il-2、62~85μg/l il-15、15~37μg/l cd3单抗、105~120μg/l聚苯乙烯磺酸钠、4~18μg/l杜拉鲁肽、25~46μg/l丁香脂素。
3. 如权利要求1所述用于t细胞的培养基，其特征在于，所述il-2、il-15、cd3单抗、聚苯乙烯磺酸钠、杜拉鲁肽、丁香脂素在x-vivo 15培养基中的含量为：150u/ml il-2、73μg/lil-15、28μg/l cd3单抗、112μg/l聚苯乙烯磺酸钠、9μg/l杜拉鲁肽、31μg/l丁...
【专利技术属性】
技术研发人员：过凯，杨振宗，
申请(专利权)人：清泽医疗科技广东有限公司，
类型：发明
国别省市：
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