【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因检测服务，具体涉及一种弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的多重数字pcr检测方法。
技术介绍
1、近些年来，各种病原微生物和寄生虫，在畜禽屠宰加工和消费环节感染人所引发的安全事件，已成为影响公共健康的重要因素。
2、弯曲菌引起的食源性胃肠道疾病是21世纪人类面临的一项严重的经济和公共卫生负担。由于报告数据的缺乏，很难估计世界范围内该疾病的整体规模。但据推测，弯曲菌病在世界所有腹泻疾病中占8.4％。欧盟每年报告的病例数超过20万，但实际病例数可能高达每年900万，因为很多人并未到医院就医。每年弯曲菌病带来的包括医疗费用和生产力在内的经济损失估计超过20亿欧元。弯曲菌分子生物学检测方法包括普通pcr、实时荧光定量pcr等方法。
3、沙门菌是一种常见的重要人畜共患病原菌，它不仅能导致鸡白痢、仔猪副伤寒、流产等动物疾病，还能使人类发生伤寒、败血症、食物中毒和胃肠炎。在世界各地的食物中毒中，沙门菌引起的中毒病多例占首位。沙门菌作为致病菌检测的一项重要指标，在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要意义。因此，建立一种快速的沙门菌检测方法尤为重要。目前，沙门菌检测方法有培养法、免疫法和pcr方法等，国家标准规定的沙门菌检测方法为微生物培养法，该方法存在操作时间长、特异性和灵敏度低等缺点，免疫学方法由于非特异性吸附易出现假阳性，普通pcr方法不能对样品进行定量分析。因此，有必要建立针对沙门菌的定量pcr方法。
4、金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是一种常见的食源性致病菌，食用了被
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的多重数字pcr检测方法，从而更方便、快捷、准确的通过一次检测反应来检测三种致病菌。
2、本专利技术首先提供用于检测弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的多重数字pcr检测用引物和探针组，其中用于检测弯曲菌的引物对和探针的序列信息如下：
3、上游引物：5′-acacacgtgctacaatggcata-3′(seq id no:1)、
4、下游引物：5′-tgggacatattttatagatttgct-3′(seq id no:2)、
5、探针：5′-tacaatgagacgcaataccgcgaggt-3′(seq id no:3)；
6、用于检测沙门菌的引物对和探针的序列信息如下：
7、上游引物：5′-cgaacggcgaagcgtactggaa-3′(seq id no:4)、
8、下游引物：5′-cggcaatggcgtcacctttgat-3′(seq id no:5)、
9、探针：5′-ctttacggytcctttgacggtgcgatgaag-3′(seq id no:6)；
10、用于检测金黄色葡萄球菌的引物对和探针的序列信息如下：
11、上游引物：5′-agttcgtcaaggctgggctaaagt-3′(seq id no:7)、
12、下游引物：5′-gaatcagcgttgtcttcgctccaa-3′(seq id no:8)、
13、探针：5′-tataaacctaacaatacacatgaacaactt-3′(seq id no:9)；
14、更进一步的，所述的探针的5′端或3′端偶联有荧光素；
15、作为实施例的具体记载，其中检测弯曲菌的探针5′端连接有荧光素vic，3′端连接有荧光素mgb；
16、检测沙门菌的探针5′端连接有荧光素fam，3′端连接有荧光素bhq1；
17、检测金黄色葡萄球菌的探针5′端连接有荧光素cy5，3′端连接有荧光素mgb；
18、本专利技术所提供的引物和探针组可用于制备用于检测弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的制品；
19、所述的制品，作为实施例的具体记载，为多重数字pcr检测制品。
20、本专利技术再一个方面还提供一种检测弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的多重数字pcr检测方法，是使用上述的引物和探针组进行检测。
21、所述的方法，其中引物的用量为17μmol/15μl，探针的用量为6μmol/15μl。
22、更进一步的，所述的方法的pcr的扩增程序条件为95℃10min；95℃30s，60℃1min，40个循环；25℃10min。
23、本专利技术建立的多重数字pcr检测方法，可以一次反应，同时对弯曲菌、沙门菌和金葡菌进行直接定量；相对一般的数字pcr方法，节省了试剂及人工成本；相对荧光定量pcr方法的间接定量，测量的更为准确。
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1.一种用于检测弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的引物和探针组，其特征在于，所述的引物和探针组，其中用于检测弯曲菌的引物对，其上下游引物的序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，探针的序列为SEQ ID NO:3；
2.如权利要求1所述的引物和探针组，其特征在于，所述的探针的5′端或3′端偶联有荧光素。
3.如权利要求1所述的引物和探针组，其特征在于，所述的检测弯曲菌的探针的5′端连接有荧光素VIC，3′端连接有荧光素MGB。
4.如权利要求1所述的引物和探针组，其特征在于，所述的检测沙门菌的探针的5′端连接有荧光素FAM，3′端连接有荧光素BHQ1。
5.如权利要求1所述的引物和探针组，其特征在于，所述的检测金黄色葡萄球菌的探针5′端连接有荧光素CY5，3′端连接有荧光素MGB。
6.权利要求1所述的引物和探针组在制备用于检测弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的制品中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的制品为多重数字PCR检测制品。
8.一种多重数字PCR检测制品，其
9.一种检测弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的多重数字PCR检测方法，其特征在于，所述的方法是使用权利要求1所述的引物和探针组进行检测。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的方法中引物的用量为17μmol/15μL，探针的用量为6μmol/15μL；PCR的扩增程序条件为95℃10min；95℃30s，60℃1min，40个循环；25℃10min。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测弯曲菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的引物和探针组，其特征在于，所述的引物和探针组，其中用于检测弯曲菌的引物对，其上下游引物的序列为seq id no:1和seq id no:2，探针的序列为seq id no:3；
2.如权利要求1所述的引物和探针组，其特征在于，所述的探针的5′端或3′端偶联有荧光素。
3.如权利要求1所述的引物和探针组，其特征在于，所述的检测弯曲菌的探针的5′端连接有荧光素vic，3′端连接有荧光素mgb。
4.如权利要求1所述的引物和探针组，其特征在于，所述的检测沙门菌的探针的5′端连接有荧光素fam，3′端连接有荧光素bhq1。
5.如权利要求1所述的引物和探针组，其特征在于，所述的检测金黄色葡萄球菌的探针5′端连接有荧光素cy5，3′...
【专利技术属性】
技术研发人员：王君玮，张喜悦，赵建梅，曲志娜，赵格，李昕，
申请(专利权)人：中国动物卫生与流行病学中心，
类型：发明
国别省市：
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