【技术实现步骤摘要】
本申请属于基因工程，涉及一种蛋白酶突变体，具体涉及蛋白酶突变体及其在洗护肤品、化妆品中的应用。
技术介绍
1、皮肤表皮层的角质形成细胞在自身新陈代谢的作用下，从基底层细胞角化形成扁平、复层、无细胞核的角质层细胞。角质层是皮肤屏障最重要的组成部分，能保护皮下组织并减少水分流失。在正常情况下，旧的角质细胞会自然脱落，保持皮肤不断生长的动力，但是由于新陈代谢减慢、清洁不当和废物堆积等多种因素的影响，皮肤的新陈代谢速度会随着年龄的增长而逐渐减缓，致使老化、死亡细胞脱落的过程缓慢，这些坏死细胞在皮肤表面堆积使肌肤变得暗黄、粗糙，没有光泽。因此，可以采用一定方法去除皮肤表面角质层的老化、死亡细胞，加速新陈代谢，从而改善肤色、肤质，帮助皮肤恢复光泽、白皙和细腻。
2、去角质的方法大致可以分为物理法、化学法和生物酶法三种。物理法是指用面部磨砂膏、泥膜等去除角质，化学法是指使用果酸、水杨酸等酸类物质剥脱角质，生物酶法是指利用蛋白酶(如木瓜蛋白酶)水解角质蛋白。其中，物理和化学法存在对肌肤刺激性强、皮肤屏障受损等问题，而生物酶法相对温和、高效，不容易刺激皮肤。
3、目前在日化用品中使用的蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等，但存在稳定性较差的问题。因此，需一种稳定性较好、功效显著且安全的蛋白酶应用于日化用品领域。
技术实现思路
1、为了克服现有技术存在的不足，本申请提供了一种蛋白酶突变体，本申请的蛋白酶突变体具有安全性高、稳定性较好的特点，包含该蛋白
2、一方面，本申请提供一种蛋白酶突变体。
3、在一些实施方案中，所述突变体与氨基酸序列如seq id no：2所示的野生型蛋白酶相比，含有以下位点上的氨基酸取代：第135位。在一些实施方案中，所述突变体与氨基酸序列如seq id no：2所示的野生型蛋白酶相比，含有以下位点上的氨基酸取代：第184位。在一些实施方案中，所述突变体与氨基酸序列如seq id no：2所示的野生型蛋白酶相比，含有以下位点上的氨基酸取代：第215位。在一些实施方案中，所述突变体与氨基酸序列如seqid no：2所示的野生型蛋白酶相比，含有以下位点上的氨基酸取代组合：第135位、第184和第215位。
4、在一些实施方案中，所述突变体与氨基酸序列如seq id no：2所示的野生型蛋白酶相比，包含d135m取代。在一些实施方案中，所述突变体与氨基酸序列如seq id no：2所示的野生型蛋白酶相比，包含q184a取代。在一些实施方案中，所述突变体与氨基酸序列如seqid no：2所示的野生型蛋白酶相比，包含d215y取代。在一些实施方案中，所述突变体与氨基酸序列如seq id no：2所示的野生型蛋白酶相比，包含d135m、q184a和d215y取代。在一些实施方案中，所述突变体的序列如seq id no：4所示。
5、一方面，本申请提供了一种多核苷酸，其编码本申请的蛋白酶突变体。在一些实施方案中，所述多核苷酸的序列如seq id no：3所示。
6、一方面，本申请提供一种表达载体，其掺入本申请的多核苷酸。在一些实施方案中，所述表达载体掺入有如seq id no：3所示的多核苷酸。在一些实施方案中，所述表达载体是pp43nmk。
7、一方面，本申请还提供一种宿主细胞，其用本申请所述的多核苷酸转化并表达所述多核苷酸。在一些实施方案中，所述宿主细胞用包含如seq id no：3所示的多核苷酸转化并表达所述多核苷酸。本申请还提供一种宿主细胞，其被用本申请所述的表达载体转化。在一些实施方案中，所述宿主细胞被用掺入有包含seq id no：3所示的多核苷酸的表达载体转化。在一些实施方案中，所述宿主细胞是枯草芽孢杆菌wb600感受态细胞。本申请还提供一种在宿主细胞中生产本申请的蛋白酶突变体的方法，所述方法包括在使得产生本申请的突变体的培养条件下培养本申请所述的宿主细胞。
8、一方面，本申请提供了一种蛋白酶的生产工艺，包括：
9、(1)对基因工程菌进行菌种活化培养；
10、(2)利用活化菌种进行发酵；
11、(3)干燥发酵后粗酶液。
12、在一些实施方案中，步骤(1)所述的基因工程菌包含本申请所述的多核苷酸，其编码本申请所述的蛋白酶突变体。
13、在一些实施方案中，所述步骤(2)发酵培养基为：蛋白胨、精制豆粕粉、葡萄糖、kh2po4、na2hpo4和mgso4，在一些实施方案中，所述发酵培养基中蛋白胨、精制豆粕粉、葡萄糖、kh2po4、na2hpo4和mgso4各组分的浓度比为2：1：4：0.3：0.6：0.03。在一些实施方案中，所述种子液与发酵培养基的质量比为0.05：1。
14、在一些实施方案中，所述步骤(2)发酵温度是35-40℃，优选37℃。在一些实施方案中，所述步骤(2)发酵ph是6.5-7.5，优选7。
15、在一些实施方案中，步骤(3)所述粗酶液干燥是经喷塔喷干成粉制剂。
16、一方面，本申请提供一种本申请所述的蛋白酶突变体在促进角质细胞剥脱中的应用。
17、一方面，本申请提供一种本申请所述的蛋白酶突变体在洗护肤品或化妆品中的应用。
18、在一些实施方案中，所述洗护肤品为护肤水、乳液、霜、精华、眼霜、身体乳等。在一些实施方案中，所述洗护肤品为洗面奶、沐浴露等，在一些实施方案中，所述化妆品为粉底、隔离霜、妆前乳、bb霜、cc霜、唇膏、睫毛膏等。
19、在一些实施方案中，所述洗护肤品或化妆品中蛋白酶突变体浓度的质量百分含量为0.001％-0.007％，优选0.001％-0.006％，最优选0.001％-0.005％，具体可选自0.001％、0.002％、0.0021％、0.0022％、0.0023％、0.0024％、0.0025％、0.0026％、0.0027％、0.0028％、0.0029％、0.003％、0.0031％、0.0032％、0.0033％、0.0034％、0.0035％、0.0036％、0.0037％、0.0038％、0.0039％、0.004％、0.0041％、0.0042％、0.0043％、0.0044％、0.0045％、0.0046％、0.0047％、0.0048％、0.0049％、0.005％、0.0051％、0.0052％、0.0053％、0.0054％、0.0055％、0.0056％、0.0057％、0.0058％、0.0059％、0.006％、0.0061％、0.0062％、0.0063％、0.0064％、0.0065％、0.0066％、0.0067％、0.068％、0.0069％、0.007％。
20、在一些实施方案中，所述洗护肤品或化妆品中蛋白酶突变体浓度为0.1-70μg/ml，优选10-60μg/ml，最优选10-50μg/ml，具体可选本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蛋白酶突变体，其特征在于，与氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的亲本蛋白酶相比，含有下列位点上的氨基酸取代组合：第135位、第184位、第215位。
2.根据权利要求1所述的突变体，所述序列如SEQ ID NO：4所示。
3.一种多核苷酸，其编码权利要求1或2所述的突变体。
4.一种表达载体，其掺入有权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种宿主细胞，其用权利要求3所述的多核苷酸转化并表达所述多核苷酸。
6.权利要求1或2所述的蛋白酶突变体在促进角质细胞剥脱中的应用。
7.权利要求1或2所述的蛋白酶突变体在洗护肤品、化妆品中的应用。
8.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1或2所述的蛋白酶突变体。
9.根据权利要求8所述的组合物，所述组合物蛋白酶突变体的质量百分含量0.001％-0.007％，优选0.001％-0.006％，最优选0.001％-0.005％。
10.根据权利要求8所述的组合物，所述组合物进一步包含色素、表面活性剂、乳化剂、粘性剂、保湿剂、螯合剂、芳香
11.根据权利要求10所述的组合物，所述组合物中辅料的质量百分含量为10％-20％，优选10％-15％，优选自11-13％。
12.权利要求7-11任一项所述的组合物在去除皮肤老化角质层中的应用。
13.权利要求7-11任一项所述的组合物在改善肤色光泽中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白酶突变体，其特征在于，与氨基酸序列如seq id no：2所示的亲本蛋白酶相比，含有下列位点上的氨基酸取代组合：第135位、第184位、第215位。
2.根据权利要求1所述的突变体，所述序列如seq id no：4所示。
3.一种多核苷酸，其编码权利要求1或2所述的突变体。
4.一种表达载体，其掺入有权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种宿主细胞，其用权利要求3所述的多核苷酸转化并表达所述多核苷酸。
6.权利要求1或2所述的蛋白酶突变体在促进角质细胞剥脱中的应用。
7.权利要求1或2所述的蛋白酶突变体在洗护肤品、化妆品中的应用。
8.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1或2所述的蛋白酶突...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹林，孙璞，李靖，刘哲民，马鹏程，朱莉，吴冕，魏静，王朝玉，赵炳玉，
申请(专利权)人：南京迪诺薇华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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