【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于核酸疫苗，具体涉及一种猴痘病毒的mrna疫苗及其构建方法和应用。
技术介绍
1、猴痘病毒(mpox virus，mpxv)又称猴天花，是于1958年发现的与天花病毒(variolavirus，varv)、痘苗病毒(vacciniavirus，vacv)和牛痘病毒(cowpox virus，cpxv)同属痘病毒科的一种罕见的人畜共患痘病毒。
2、研究表明，mpxv蛋白a29l可与细胞表面硫酸乙酰肝素结合参与病毒颗粒的成熟和释放过程，a35r和m1r蛋白在病毒粒子入侵宿主细胞过程以及在细胞间的传播中起着至关重要的作用。这些蛋白是抗猴痘病毒药物开发的重要靶点。
3、干扰素(interferon，ifn)是机体细胞产生的一种细胞因子，其中ifn-α具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的特性，是一种常见的疫苗佐剂用以提高疫苗的保护效果。
4、依据传统疫苗研发策略和技术路线生产研发生产猴痘疫苗，具有周期长、成本高、有滞后性，很难适应防控猴痘大流行的需求等缺点。
5、mrna疫苗在对某些病毒显示出显著的疗效。它通过将含有编码抗原蛋白的mrna与递送系统组装成疫苗颗粒，在宿主中翻译形成相应的抗原蛋白，从而诱导机体产生特异性免疫应答，发挥预防免疫的作用。
技术实现思路
1、第一方面，本申请实施例提供了一种猴痘病毒的mrna疫苗，包含seq id no:1-2任意一项所示的rna序列。
2、在一些实施例中，rna序列由以下成分组成：
3、在一些实施例中，5’端非翻译区的rna序列如seq id no:5所示，信号肽的rna序列如seq id no:6所示，猴痘病毒抗原融合蛋白编码基因rna序列如seq id no:1-2所示，3’端非翻译区的rna序列如seq idno:7所示，3’端polya尾的rna序列如seq id no:8所示。
4、在一些实施例中，所述rna序列包含帽结构，所述rna序列经核苷酸类似物修饰。
5、在一些实施例中，mrna疫苗包括递送载体，所述递送载体包覆所述rna序列，所述递送载体包括可离子化脂质体、可离子化蛋白、可离子化聚合物、可离子化胶束和可离子化脂质纳米粒(lipid nanoparticle，lnp)中的任一种，优选可离子化脂质纳米颗粒。
6、在一些实施例中，所述可离子化脂质纳米颗粒组分包含阳离子脂质sm-102、磷脂酰胆碱、胆固醇和聚乙二醇脂质中的一种或几种。
7、在一些实施例中，所述可离子化脂质纳米颗粒组分中，阳离子脂质sm-102、磷脂酰胆碱、胆固醇和聚乙二醇脂质的摩尔比为50:10:38.5:1.5。
8、第二方面，本申请实施例提供了一种mrna疫苗的构建方法，所述制备方法包括：
9、(1)将rna序列溶解于水性溶液中，作为水相；所述rna序列如seq id no:1-2任意一项所示；
10、(2)将递送载体溶解于有机溶剂中，作为有机相；
11、(3)混合水相与有机相，自组装得到所述mrna疫苗。
12、所述水性溶液为柠檬酸缓冲液；所述有机溶剂为无水乙醇。
13、第三方面，本申请实施例提供了一种含有第一方面的mrna疫苗的dna分子的重组质粒在制备预防或治疗猴痘的mrna疫苗中的应用。
14、第四方面，本申请实施例提供了一种含有第一方面的mrna疫苗的重组微生物细胞在制备预防或治疗猴痘的mrna疫苗中的应用。
15、有益效果：
16、本申请实施例提供了一种针对猴痘病毒的mrna疫苗，seq id no:1-2所示的rna序列；本专利技术的针对猴痘病毒的mrna疫苗可以在细胞和个体水平被翻译成抗原融合蛋白，并诱发机体产生针对mpxv和针对vacv的高水平中和抗体，以及诱导机体产生针对mpxv的特异性细胞免疫应答，从而可有效地预防或治疗猴痘病毒感染性疾病。本专利技术的用于猴痘病毒mrna疫苗的制备方法简便，生产成本低，且生产周期短。鉴于上述，本专利技术的针对猴痘病毒的mrna疫苗具有临床应用价值和产业化前景。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种猴痘病毒的mRNA疫苗，其特征在于，包含SEQ ID NO:1-2任意一项所示的RNA序列。
2.根据权利要求1所述的mRNA疫苗，其特征在于，RNA序列由以下成分组成5’端非翻译区、信号肽序列、猴痘病毒A35R、A29L、M1R抗原融合蛋白AAM的编码RNA基因序列或AAM与干扰素-α(Interferon-α，IFN-α)组成的融合蛋白AAMI的编码RNA基因序列、3’端非翻译区和3’端PolyA尾。
3.根据权利要求2所述的mRNA疫苗，其特征在于，5’端非翻译区的RNA序列如SEQ IDNO:5所示，信号肽的RNA序列如SEQ ID NO:6所示，猴痘病毒抗原融合蛋白编码基因RNA序列如SEQ ID NO:1-2所示，3’端非翻译区的RNA序列如SEQ ID NO:7所示，3’端PolyA尾的RNA序列如SEQ ID NO:8所示。
4.根据权利要求2所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述RNA序列包含帽结构，所述RNA序列经核苷酸类似物修饰。
5.根据权利要求1所述的mRNA疫苗，其特征在于，mRNA疫苗包括递送载体
6.根据权利要求1所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述可离子化脂质纳米颗粒组分包含阳离子脂质SM-102、磷脂酰胆碱、胆固醇和聚乙二醇脂质中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述可离子化脂质纳米颗粒组分中，阳离子脂质SM-102、磷脂酰胆碱、胆固醇和聚乙二醇脂质的摩尔比为50:10:38.5:1.5。
8.一种mRNA疫苗的构建方法，其特征在于，所述制备方法包括：
9.含有权利要求1-7任意一项所述的mRNA疫苗的DNA分子的重组质粒在制备预防或治疗猴痘的mRNA疫苗中的应用。
10.含有权利要求1-7任意一项所述的mRNA疫苗的重组微生物细胞在制备预防或治疗猴痘的mRNA疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种猴痘病毒的mrna疫苗，其特征在于，包含seq id no:1-2任意一项所示的rna序列。
2.根据权利要求1所述的mrna疫苗，其特征在于，rna序列由以下成分组成5’端非翻译区、信号肽序列、猴痘病毒a35r、a29l、m1r抗原融合蛋白aam的编码rna基因序列或aam与干扰素-α(interferon-α，ifn-α)组成的融合蛋白aami的编码rna基因序列、3’端非翻译区和3’端polya尾。
3.根据权利要求2所述的mrna疫苗，其特征在于，5’端非翻译区的rna序列如seq idno:5所示，信号肽的rna序列如seq id no:6所示，猴痘病毒抗原融合蛋白编码基因rna序列如seq id no:1-2所示，3’端非翻译区的rna序列如seq id no:7所示，3’端polya尾的rna序列如seq id no:8所示。
4.根据权利要求2所述的mrna疫苗，其特征在于，所述rna序列包含帽结构，所述rna序列经核苷酸类似物修饰。
【专利技术属性】
技术研发人员：陈实，李延胜，王连荣，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院深圳市转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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