【技术实现步骤摘要】
本申请涉及疾病诊治和分子生物学，具体涉及血清lncbrm在hbv相关性肝癌中的诊断。
技术介绍
1、肿瘤标志物是多由恶性肿瘤细胞异常产生或由肿瘤不断刺激机体后产生，其广泛存在于恶性肿瘤的组织、血液及体液中，可作为诊断疾病、评估预后、监测疗效及疾病进展的重要指标。血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，afp)是目前世界上应用最为广泛的诊断肝癌的标志物，已普及了数十年之久。其不仅在肝癌中异常升高，也可能在某些良性疾病中升高。有研究指出，afp对早期肝癌筛查的敏感度为58.13％，特异度为29.0％。如此的敏感性、特异性均差强人意。虽然afp是当前临床筛查肝癌最常用的指标，但仍然无法满足临床上对全部肝癌的诊断，特别是无法满足对肝癌早期诊断的临床需求。尽管超声、ct、核磁共振在临床对于诊断肝癌具有一定优势，但是此类检查对于诊断微小癌灶仍有所欠缺，并且也无法作为初筛肝癌的一个常规手段，也无法进行动态的追踪监测。因此找到一个既能在肝癌早期提示且能将肝癌与肝炎、肝硬化等肝脏疾病区分开来，又能方便临床持续监测的高特异性，同时还具有高敏感性的理想血清学指标，具有重要的临床价值。
2、长链非编码rna(long non-coding rna，lncrna)作为人体内一项重要的调控因子，参与了恶性肿瘤的发生、发展及转移等多种细胞生物学的进程。近年来，通过多项研究发现，血清lncrna在肝细胞癌中存在诸多的调控机制，例如lncrna tslnc8通过调控il-6/stat3通路抑制了肝癌的进程；又如lncrna hoxd-as1
3、lncbrm(lncrna for association with brahma)是一种碱基对不超过200nt的长链非编码rna，有研究发现，血清lncbrm在肝癌干细胞(cancer stem cells,cscs)和hcc肿瘤中高表达。具有促进肝癌瘤体成型及cscs增殖的作用，是cscs自我更新、维持肿瘤发生所必需的一种rna。cscs作为肿瘤体内一小部分的癌细胞，具有自我更新和自我分化的能力。已有研究表明，cscs很有可能助于肿瘤的发生、发展、转移、复发以及提高机体的耐药性，以致肝细胞癌高复发率以及肝细胞癌的异质性。然而，肝癌干细胞的生物学机制仍不明确。因此，我们后期开展了细胞学研究，通过lncbrm干扰慢病毒感染细胞，进行干扰效率的测定和表达，再沉默lncbrm观察细胞存活率的变化，来探究血清lncbrm在肝癌细胞中的作用价值，可侧重于肝癌的早期诊断与进展。另外，肝癌好发于男性，探索血清lncbrm与肝癌患者性别的相关性，或可为男性肝癌患者的复发提供新的客观指标。
4、肝癌起病较为隐匿，被发现时患者大多已处于肿瘤的中晚期，错失了最佳治疗时机，因此，在肝癌的不同时期选择适合的治疗方案以及及时进行预后评估对肝癌患者极为重要。当前在国际上最为常用的肝癌分期标准是巴塞罗那分期(bclc)，但由于肝癌在各个国家的发病背景不同、人种差异以及个体差别等多方面的原因，中国的肝癌患者并非适合巴塞罗那分期标准。中国根据长期经验积累，同时根据患者的身体素质情况，肝功情况，肿瘤大小，肿瘤数目，是否存在肝外转移、血管侵犯等不同的临床指征，我国于2017年出台了《原发性肝癌诊疗规范(2017年版)》，其中将肝癌明确分为7期：ⅰa期、ⅰb期、ⅱa期、ⅱb期、ⅲa期、ⅲb期及ⅳ期。《原发性肝癌诊疗规范》相比巴塞罗那分期更贴近我国肝癌患者的实际情况，因此本研究采用了国内诊断标准，对肝癌患者进行分期，研究血清学临床指标与原发性肝癌临床分期的相关性，或可有益于监测血清学指标在肝癌发生发展过程中的动态表达情况，及时警示，以便早干预、早治疗。
5、故本研究在前期实验的基础上扩大样本量，测定血清lncbrm在hbv相关性肝癌患者、肝硬化患者及健康人群血清中的表达水平，分析血清lncbrm在不同性别hbv相关性肝癌患者中是否存在表达差异，对肝癌早期的诊断以及对肝癌进行早干预、早治疗具有重要的临床研究价值。临床需要特异性、敏感性的肝癌指标来动态观察肝癌进展，探索血清lncbrm在肝癌治疗后疗效动态监测中的应用价值极为重要。
技术实现思路
1、lncbrm在调控多种肿瘤发展进展中占据重要地位，然而lncbrm在hbv相关性肝癌中的作用尚不明晰。本专利技术旨在从临床角度探究lncbrm在不同人群血清中的表达情况，并进一步探究hbv相关性肝癌不同临床特征对lncbrm表达的影响；同时对lncbrm在hbv相关性肝癌患者治疗后复发中的诊断和动态监测价值进行评估。
2、按照纳入排除标准入组2020年2月至2021年12月杭州市西溪医院及玉环中医院的hbv相关性肝癌患者共69例，肝硬化患者34例，健康体检者30例。根据2019年版肝癌诊疗规范进行分期，分为ⅰa期、ⅰb期、ⅱa期、ⅱb期、ⅲa期、ⅲb期、ⅳ期。随访肝癌患者58例，其中治疗后复发28例，进行治疗后1个月、治疗后3个月的随访。参照第9版《中医内科学》将肝癌组患者按照中医辨证分型分为：肝郁脾虚型、气滞血瘀型、湿热内蕴型、肝肾阴虚型。收集所有入组志愿者入院时及随访患者治疗后的血清，采用化学发光酶免疫法(cleia)测定afp值，采用定量反转录聚合酶连锁反应(qrt-pcr)法测定血清lncbrm的表达量。
3、结果：1、hbv相关性肝癌患者血清lncbrm表达量显著高于肝硬化组和健康组(p<0.001)。在肝癌组中，临床分期晚的血清表达量显著高于分期早的患者(p<0.001)；有肝外转移的患者高于无肝外转移患者(p＝0.002)；有血管侵犯的患者显著高于无血管侵犯的患者(p＝0.004)；有癌栓形成的患者显著高于无癌栓形成的患者(p＝0.001)；肿瘤直径>5cm组高于直径≤5cm组(p＝0.021)。根据血清lncbrm水平对肝癌诊断绘制roc曲线，roc曲线显示血清lncbrm表达量诊断hbv相关性肝癌患者的灵敏度和特异度分别为98.6％和96.7％。追踪患者治疗后康复情况发现肝癌治疗后复发患者的lncbrm表达水平在治疗后3个月开始不同程度地升高，根据血清lncbrm和afp对肝癌复发监测价值绘制roc曲线，auc分别为0.598和0.527(p＝0.00)，治疗后3个月复发组患者血清ast与alt的表达量均较稳定组表达水平高(p<0.05)。此外，血清lncbrm表达水平与血清alt、ast及中医证型分布并无明显相关性。
4、本研究发现血清lncbrm在hbv相关性肝癌患者血清中显著高表达(p<0.05)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种诊断、检测、监测、预测HBV相关性肝癌预后的计算机系统，其特征在于，所述系统包括：
2.一种用于辅助诊断HBV相关性肝癌的试剂盒，其采用血清LncBRM作为辅助诊断肝癌的标志物，包括检测LncBRM的物质。
3.检测LncBRM的物质在制备用于诊断、检测、监测或预测HBV相关性肝癌预后的产品中的应用。
4.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测LncBRM的物质包括核酸提取、逆转录和荧光测量所使用的物质。
5.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测LncBRM的物质包括采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)使用的物质。
6.权利要求5所述的系统、试剂盒或应用，其中所述的qRT-PCR以S18基因为内参，RNA18S上游引物序号为：5'-CAGCCACCCGAGATTGAGCA-3'，下游引物序号为：5'-TAGTAGCGACGGGCGGTGTG-3'；LncBRM上游引物序号为：5'-GAGGAGAGAAGTCACTGAA
7.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测LncBRM的物质包括SYBR Green Realtime PCR Master Kit、RNA提取分离试剂盒、ReverTra Ace qPCR RT Kit、氯仿、无水乙醇、Deionized Water、DEPC水、18s RNA引物、目的基因引物。
8.权利要求1所述的系统，其中所述的评估模块用双变量进行变量间的相关性分析，用受试者工作特征曲线评价LncBRM的诊断效能。
9.一种联合标志物，所述联合标志物由LncBRM和AFP组成。
10.联合标志物在制备用于HBV相关性肝癌手术预后风险评估的试剂盒中的应用，所述的联合标志物由LncBRM和AFP组成。
...【技术特征摘要】
1.一种诊断、检测、监测、预测hbv相关性肝癌预后的计算机系统，其特征在于，所述系统包括：
2.一种用于辅助诊断hbv相关性肝癌的试剂盒，其采用血清lncbrm作为辅助诊断肝癌的标志物，包括检测lncbrm的物质。
3.检测lncbrm的物质在制备用于诊断、检测、监测或预测hbv相关性肝癌预后的产品中的应用。
4.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测lncbrm的物质包括核酸提取、逆转录和荧光测量所使用的物质。
5.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述的检测lncbrm的物质包括采用定量实时聚合酶链反应(qrt-pcr)使用的物质。
6.权利要求5所述的系统、试剂盒或应用，其中所述的qrt-pcr以s18基因为内参，rna18s上游引物序号为：5'-cagccacccgagattgagca-3'，下游引物序号为：5'-tagtagcgacg...
【专利技术属性】
技术研发人员：包剑锋，叶坚虹，张凤英，张清华，沈明海，臧倩，史婷婷，傅爱，缪梁斌，邵华国，陈金标，
申请(专利权)人：杭州市西溪医院，
类型：发明
国别省市：
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