【技术实现步骤摘要】
本申请涉及疾病诊治和分子生物学，具体涉及血清lncrna和hotair在肝癌患者预后中的价值。
技术介绍
1、肝癌可能是由多种危险因素引起的，包括慢性感染乙型肝炎病毒(hepatitis bvirus，hbv)或丙型肝炎病毒、肝硬化(liver cirrhosis，lc)、酒精性肝病和接触黄曲霉毒素等。原发性肝癌(primary liver cancer，plc)病理类型包括肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，hcc)、肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma，icc)和hcc-icc混合型三种，而最常见的hcc占比约为85％～90％。根据国内外肝癌诊疗治疗指南说明，外科根治性手术是hcc患者治疗选择的基石，肝移植为继发于肝硬化的肝功能受损患者提供了最佳的长期结局。但由于肝癌起病隐匿，大多缺乏早期症状，许多患者在诊断时已为中晚期，失去了手术的机会。而即使接受肝癌根治性切除术的患者术后5年复发率也高达70％。选择性肝动脉造影+栓塞化疗术(transcatheter arterial chemoembolization，tace)、射频消融(radiofrequency ablation，rfa)等肝癌局部治疗方法常用于肝癌中晚期姑息治疗或作为肝移植的桥梁，可延长患者生存期；然而研究表明tace治疗仅仅能使25％的肿瘤完全坏死，且术后复发、转移概率均较高。因此，早期诊断已经成为提高plc患者生存率的关键；而识别有潜在复发的术后患者，并据此决定谁应该接受辅助治疗，也对患者的预后至
2、血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein，afp)是目前肝癌临床筛查和预后动态监测最常用方法，但此方法敏感度较差易漏诊。一些良性肝病(如肝炎和肝硬化)也可出现afp升高，即使使用低水平的临界值(即10-20ng/ml)，afp诊断的敏感性也仅为40-60％，特异性为80-90％。此外，许多肝癌患者afp为阴性，据报道15％-30％的晚期肝癌患者血清afp水平保持正常，因此afp对肝癌患者术后疗效评估、复发监测等方面存在不足。超声、ct等检查对肝癌诊断有重要价值，但两者不易发现微小癌灶，且超声易受患者肥胖、胀气等因素干扰。超声造影、增强ct、磁共振等检查对于微小癌灶的诊断具有一定优势，但也存在着创伤性大、费用高、患者依从性差等不足，故不适于人群早期大规模筛查。因此，寻找能够早期诊断并且可术后监测肝癌预后的敏感特异高、创伤小的血液肿瘤生物标志物十分重要，可尽早诊断或评估复发风险及时进行治疗，有利于提高plc患者预后生存质量。
3、长链非编码rna(long noncoding rna，lncrna)是长度超过200个核苷酸的非蛋白质编码rna。越来越多的研究表明，lncrna参与了广泛的生物学过程，并与癌症等多种疾病相关。在各种实体肿瘤或者血液系统恶性肿瘤中，大量的lncrna被定义为癌基因和抑癌基因，参与到肿瘤发生和转移的细胞生物学进程中。lncrnas在多种肿瘤组织和体液(如血液、唾液和尿液等)中存在异常表达，且已应用于部分肿瘤的早期诊断，可较好地预测疾病的复发和转移，有望在疾病的临床诊治当中起到重要作用。例如，血清lncrna-atb可用作乳腺癌早期非侵入性诊断标志物的并且具有监测乳腺癌进展和分期的潜在能力。血清lncrnasnhg5可成为胃癌患者短期不良事件的生存预测因子。
4、hox反义转录rna(hox transcript antisense rna,hotair)是一种在多种肿瘤中起到致癌基因的lncrna，在肿瘤的发生、转移、耐药中具有重要作用。gupta等报告hotair在转移性乳腺癌中高表达，其在原发乳腺肿瘤中的高表达是预测后续转移和死亡率的重要指标。此外，在上皮性卵巢癌和结肠癌中，hotair的高表达也可能预示着不良的预后和促进转移。研究表明，hotair与肝癌的发生发展也密切相关，hotair高表达可以促进肝癌细胞的增殖、存活和侵袭。zhong等研究发现沉默hotair可促进肝癌细胞的凋亡，抑制细胞增殖。gao等发现hotair在肝癌组织中高表达，其对hcc的复发和转移的机制一部分是通过wnt/β-catenin信号通路实现的。yasuyuki等发现hcc的肿瘤大小与hotair高表达相关，高表达的hotair是通过加强atg7和atg3表达使肝癌细胞的自噬能力增加，从而促进癌细胞增殖、扩散。
5、目前文献中关于hotair在肝癌诊断及预后的临床研究多集中于肝癌组织学，且尚无对肝癌术后患者进行动态随访监测的研究，因此hotair在肝癌患者血清中的表达能否在临床诊断及预后判断值得我们关注。在本部分研究中，我们通过将70位肝癌患者的血清hotair表达与其临床病理特征之间的关系进行分析，以评估其是否参与恶性肿瘤的发展。再通过受试者工作特征(roc)曲线、kaplan-meier和cox回归分析评估潜在的诊断和预后价值。最后跟踪随访了37位肝癌术后患者，分别拥有预后良好、复发、死亡三种不同生存结局，动态监测其者血清hotair变化，判断血清hotair能否作为肝癌患者术后进展及复发的指标。这对肝癌的早期诊断及预后判断，以及实现对肝癌的早发现、早干预、早治疗具有重要临床价值。
技术实现思路
1、本研究中，我们发现肝癌患者术前血清hotair表达水平明显高于肝硬化及健康组，这与先前研究结果一致。随后，我们利用roc曲线评估了血清hotair的诊断能力，结果提示hotair与afp联合检测对肝癌的诊断效能最佳，其auc为0.942，敏感性和特异性分别为84.3％、90.8％，优于hotair或afp作为单一生物标志物检测肝癌的性能。此外，hotair与afp的联合检测对肝癌分期的鉴别诊断能力也有一定意义，其auc为0.782，敏感性和特异性分别为86.7％、65.0％。
2、而在临床病理特征方面，本研究结果显示高hotair表达水平与cnlc分期、肝外转移、血管侵犯、癌栓形成、肿瘤大小显著相关，也证明hotair参与了plc的发展。而以上这些临床病理特征是影响肝癌诊断和预后的重要因素，与肝癌的侵袭和进展有关，往往提示预后不良。而肿瘤大小在一定程度上反映了肿瘤的负荷量，肿瘤越大，合成和释放的lncrna越多，hotair也越多；相反，肿瘤破坏后，肿瘤体积缩小，因此表达水平降低。在本研究中我们发现，相比术前，肝癌患者术后1月的血清hotair表达水平明显下降，提示血清hotair可能能够评估手术或非手术治疗的有效性，并监测随访期间的复发。根据以上信息我们推测hotair可能是肝癌患者预后不良的预测指标，其血清表达水平可能有助于肝癌的临床诊断和复发预测。
3、因此，我们跟踪随访了51例肝癌术后患者的3年内的预后生存结局，通过cox回归多因素分析发现hotair、cnlc分期、血管侵犯、癌栓形成是影响肝癌术后患者生存的独立因素，hotair还是影响肝癌术后患者复发转移的独立因素；再通过kap本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种诊断、检测、监测、预测肝癌预后的计算机系统，其特征在于，所述系统包括：
2.一种用于辅助诊断肝癌的试剂盒，其采用血清lncRNA HOTAIR作为辅助诊断肝癌的标志物，包括检测血清lncRNA HOTAIR的物质。
3.检测血清lncRNA HOTAIR的物质在制备用于诊断、检测、监测或预测肝癌预后的产品中的应用。
4.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述肝癌为肝细胞癌。
5.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，所述的检测lncRNA HOTAIR的物质包括核酸提取、逆转录和荧光测量所使用的物质。
6.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，所述的检测lncRNA HOTAIR的物质包括采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)使用的物质。
7.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，所述的检测血清lncRNA HOTAIR的物质包括SYBR Green Realtime P
8.权利要求1所述的系统，其中所述的评估模块通过受试者工作特征(ROC)曲线、Kaplan-Meier和Cox回归分析评估潜在的诊断和预后价值。
9.权利要求6所述的系统、试剂盒或应用，其中检测lncRNA HOTAIR的物质包括引物序列：
10.权利要求6所述的系统、试剂盒或应用，其中检测lncRNA HOTAIR的物质包括按下列组份配制PCR反应液：
...【技术特征摘要】
1.一种诊断、检测、监测、预测肝癌预后的计算机系统，其特征在于，所述系统包括：
2.一种用于辅助诊断肝癌的试剂盒，其采用血清lncrna hotair作为辅助诊断肝癌的标志物，包括检测血清lncrna hotair的物质。
3.检测血清lncrna hotair的物质在制备用于诊断、检测、监测或预测肝癌预后的产品中的应用。
4.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，其中所述肝癌为肝细胞癌。
5.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，所述的检测lncrna hotair的物质包括核酸提取、逆转录和荧光测量所使用的物质。
6.权利要求1所述的系统、权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的应用，所述的检测lncrna hotair的物质包括采用定量实时聚合酶链反应(qr...
【专利技术属性】
技术研发人员：包剑锋，刘寿荣，刘芳，李儿，王聪聪，李兆翌，史婷婷，缪梁斌，余吉仙，张玉娟，邵华国，潘万能，
申请(专利权)人：杭州市西溪医院，
类型：发明
国别省市：
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