【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于在双层基底上生产真皮或皮肤或表皮等同物的方法，该双层基底包括通过静电纺丝包含至少一种聚合物的组合物而形成的厚度为至少200nm且孔隙率小于或等于5μm的层，以及通过静电书写包含至少一种聚合物的组合物而形成的厚度为至少20μm且孔隙率大于或等于20μm的层。本申请还涉及通过所述方法能够获得的皮肤或真皮或表皮等同物，真皮等同物或皮肤等同物或表皮等同物用于筛选化合物的用途，以及最后其在伤口敷料或皮肤移植中的用途。
技术介绍
1、静电纺丝(es)是用于生产纤维的方法，其使用电力来设计带有聚合物溶液或熔融聚合物的纺线。这使得能够生产直径可低至50nm的纤维。然而，随机的沉积会导致形成非织造纤维网。静电书写(electrowriting)是一种新兴的技术，其通过电纺纤维的受控沉积来使用聚合物，并使得能够在原位构建或组装复杂结构。
2、这些技术可用于生产用于组织工程，尤其用于重建皮肤组织的真皮部分和可选的皮下部分的多孔基底。
3、目前，点阵模型是用于获取新认识和评估研究最常用的体外模型。然而，由于高含水量，点阵模型表现出较差的细胞外基质新合成(neosynthesis)和较差的机械特性。
4、多孔基底具有的优势在于使细胞外基质新合成产生动态真皮隔室，并且还能够容纳多种细胞类型。然而，对于皮肤组织重建，孔隙率也是一个限制因素，因为真皮隔室必须被基质完全填充，以使得能够在顶部沉积表皮细胞，并进行令人满意的表皮重建，而不会使真皮中的角质细胞内陷。这通常通过添加高浓度的维生素c以刺激真皮成纤维细胞
5、此外，传统的多孔基底因制造限制而具有较差的模仿皮肤纳米结构的能力。
6、单独的静电纺丝是能够制造多孔基底的方案，其中该多孔基底包括直径接近或类似于细胞外基质纤维的纤维。它们将有助于增强细胞粘附、生长和分化。然而，由于不受控制且较低的孔隙率，基底内部的细胞渗透是复杂且中度(mediocre)的。
技术实现思路
1、根据本专利技术的双层基底相对于已知基底具有许多优点：
2、-厚度为至少200nm且孔隙率小于或等于5μm的层是阻止细胞通过的界面，这使得能够独立于真皮基质的组成和数量来重建表皮(即，可以在空的或几乎空的真皮隔室上重建)。这可以阻止角质细胞内陷，同时允许营养物质和蛋白质通过，以及真皮和表皮之间的沟通。
3、-厚度为至少20μm且孔隙率大于或等于20μm的层是非常多孔的，因此能够进行细胞外基质的新合成和重塑。其设计影响细胞行为、细胞外基质组成和组织化，以及基底的机械特性。
4、已经产生了各种双层基底，其中根据各种设计通过静电书写来印刷形成了最多孔的层。专利技术人观察到，在这些基底上能够进行表皮重建，并且能够表达主要的表皮标志物，而不依赖于真皮隔室填充和最多孔的层的设计。此外，专利技术人观察到基底的设计对细胞外基质含量和组织以及对维生素c的应答有影响。
5、这些基底还具有生物相容性和高度可定制的优点，为获取新认识、体外测试、敷料制备和移植的皮肤模型开辟了新途径。
6、因此，本专利技术涉及一种用于生产真皮等同物的方法，包括：
7、a.通过静电纺丝(es)或静电书写(ew)包含至少一种聚合物的组合物来形成厚度为至少200nm且孔隙率小于5μm的层(i)，
8、b.通过静电书写(ew)包含至少一种聚合物的组合物来形成厚度为至少20μm且孔隙率大于或等于20μm的层(ii)，
9、c.用真皮和/或皮下细胞接种层(ii)，
10、其中步骤a和步骤b按此顺序(a后接b)或相反顺序(b后接a)依次进行，且其中第二静电纺丝步骤沿着由第一静电纺丝步骤产生的层纵向进行。
11、本专利技术还涉及一种用于生产皮肤等同物的方法，包括上述用于生产真皮等同物的方法，且进一步包括在步骤c)和/或在步骤a)和b)之后，用表皮细胞接种层(i)。
12、本专利技术还涉及一种用于生产表皮等同物的方法，包括：
13、a.通过静电纺丝(es)或静电书写(ew)包含至少一种聚合物的组合物来形成厚度为至少200nm且孔隙率小于或等于5μm的层(i)，
14、b.通过静电书写(ew)包含至少一种聚合物的组合物来形成厚度为至少20μm且孔隙率大于或等于20μm的层(ii)，
15、c.用表皮细胞接种层(i)，
16、其中步骤a和步骤b按此顺序(a后接b)或相反顺序(b后接a)依次进行，并且其中第二静电纺丝步骤沿着由第一静电纺丝步骤产生的层纵向进行。
17、本专利技术还涉及通过本专利技术的制备方法能够获得的真皮等同物和皮肤等同物或表皮等同物。
18、本专利技术还涉及基底用于形成皮肤等同物或真皮等同物或表皮等同物的用途，所述基底包括：
19、a.通过静电纺丝(es)或静电书写(ew)包含至少一种聚合物的组合物而获得的厚度为至少200nm且孔隙率小于或等于5μm的层，
20、纵向叠加在
21、b.通过静电书写(ew)包含至少一种聚合物的组合物而获得的厚度为至少20μm且孔隙率大于或等于20μm的层上。
22、本专利技术还涉及本专利技术的真皮等同物或皮肤等同物或表皮等同物用于筛选化合物的用途，优选用于筛选能够对皮肤具有美容、皮肤病学或药物活性的化合物的用途，优选用于筛选局部施用在皮肤上或注射到皮肤后具有美容或皮肤病学活性的化合物的用途。
23、本专利技术的另一目的进一步涉及用于筛选具有活性的化合物，优选能够对皮肤具有美容、皮肤病学或药物活性的化合物，优选局部施用在皮肤上或注射到皮肤后具有美容或皮肤病学活性的化合物的方法，所述筛选方法包括将候选化合物施用在根据本专利技术的真皮等同物或根据本专利技术的皮肤等同物或根据本专利技术的表皮等同物上。
24、本专利技术还涉及根据本专利技术的真皮等同物、根据本专利技术的皮肤等同物或根据本专利技术的表皮等同物，它们用于伤口敷料或皮肤移植。
25、本专利技术的详细描述
26、用于生产真皮等同物的方法
27、本专利技术涉及一种用于生产真皮等同物的方法，包括：
28、a.通过静电纺丝(es)或静电书写(ew)包含至少一种聚合物的组合来形成厚度为至少200nm且孔隙率小于或等于5μm的层(i)，
29、b.通过静电书写(ew)包含至少一种聚合物的组合物来形成厚度为至少20μm且孔隙率大于或等于20μm的层(ii)，
30、c本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于真皮等同物的生产方法，包括：
2.一种用于皮肤等同物的生产方法，包括根据权利要求1所述的用于真皮等同物的生产方法，并且进一步包括在步骤c)和/或在两个步骤a)和b)之后，用表皮细胞接种所述层(i)。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的生产方法，其中所述层(i)填充或涂覆有可选地为模拟真皮-表皮连接处基质的水凝胶形式的一种或多种生物活性剂，和/或其中所述层(ii)填充或涂覆有可选地为模拟真皮基质的水凝胶形式的一种或多种生物活性剂。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的生产方法，其中所述真皮和/或皮下细胞在合适的培养基中浸没培养或在气-液界面处培养。
5.一种用于表皮等同物的生产方法，包括：
6.根据权利要求1至5中任一项所述的生产方法，其中所述层(ii)通过静电书写包含至少一种熔融聚合物(熔体静电书写MEW)或包含至少一种溶液中聚合物的组合物来形成。
7.根据权利要求2至6所述的生产方法，其中所述表皮细胞在合适的培养基中浸没培养或在气-液界面处培养。
8.通过权利要求1、3至4和6中任
9.通过权利要求2至4和6至7中任一项所述的方法能够获得的皮肤等同物。
10.通过权利要求5至7中任一项所述的方法能够获得的表皮等同物。
11.基底用于形成皮肤等同物或真皮等同物或表皮等同物的用途，所述基底包括：
12.根据权利要求11所述的基底的用途，其中所述厚度为至少20μm且孔隙率大于或等于20μm的层通过静电书写(EW)包含至少一种熔融聚合物(熔体静电书写MEW)或在溶液中的聚合物的组合物来形成。
13.根据权利要求8所述的真皮等同物或根据权利要求9所述的皮肤等同物或根据权利要求10所述的表皮等同物用于筛选化合物的用途，所述化合物优选为能够对皮肤具有美容、皮肤病学或药物活性的化合物，优选局部施用在皮肤上或注射到皮肤后具有美容或皮肤病学活性的化合物。
14.一种用于具有活性的化合物的筛选方法，所述化合物优选为能够对皮肤具有美容、皮肤病学或药物活性的化合物，优选在局部施用在皮肤上或注射到皮肤后具有美容或皮肤病学活性的化合物，所述筛选方法包括将候选化合物施用在根据权利要求8所述的真皮等同物或根据权利要求9所述的皮肤等同物上或根据权利要求10所述的表皮等同物上。
15.根据权利要求8所述的真皮等同物，所述真皮等同物用于伤口敷料或皮肤移植。
16.根据权利要求9所述的皮肤等同物，所述皮肤等同物用于伤口敷料或皮肤移植。
17.根据权利要求10所述的表皮等同物，所述表皮等同物用于伤口敷料或皮肤移植。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于真皮等同物的生产方法，包括：
2.一种用于皮肤等同物的生产方法，包括根据权利要求1所述的用于真皮等同物的生产方法，并且进一步包括在步骤c)和/或在两个步骤a)和b)之后，用表皮细胞接种所述层(i)。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的生产方法，其中所述层(i)填充或涂覆有可选地为模拟真皮-表皮连接处基质的水凝胶形式的一种或多种生物活性剂，和/或其中所述层(ii)填充或涂覆有可选地为模拟真皮基质的水凝胶形式的一种或多种生物活性剂。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的生产方法，其中所述真皮和/或皮下细胞在合适的培养基中浸没培养或在气-液界面处培养。
5.一种用于表皮等同物的生产方法，包括：
6.根据权利要求1至5中任一项所述的生产方法，其中所述层(ii)通过静电书写包含至少一种熔融聚合物(熔体静电书写mew)或包含至少一种溶液中聚合物的组合物来形成。
7.根据权利要求2至6所述的生产方法，其中所述表皮细胞在合适的培养基中浸没培养或在气-液界面处培养。
8.通过权利要求1、3至4和6中任一项所述的方法能够获得的真皮等同物。
9.通过权利要求2至4和6至7中任一项所述的方法能够获得的皮肤等同物。
10.通过权利要求5至7中任一项所述的方法能够获...
【专利技术属性】
技术研发人员：麦特·瑞尔兰德，芭芭拉·林奇，法比安·吉拉德，娜塔莉·博耶拉，
申请(专利权)人：欧莱雅，
类型：发明
国别省市：
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