【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及干细胞扩增，具体涉及一种人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基及制备方法和应用。
技术介绍
1、间充质干细胞来源于多种组织(如骨髓组织、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织等)，是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞。间充质干细胞可以不断地自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。间充质干细胞临床应用于解决多种血液系统疾病，如在心血管疾病、肝硬化、神经系统疾病、膝关节半月板部分切除损伤修复，自身免疫性疾病等方面取得了重大突破，挽救了更多病患的生命。此外，间充质干细胞在神经系统修复及更多方面也具有长远的发展前景。
2、骨髓原始间充质干细胞是骨髓基质干细胞，是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞(hsc)不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子(如il-6，il-11，lif，m-csf及scf等)来支持造血；然而，在实际应用中，现有培养基对骨髓间充质干细胞在体外扩增能力较差，无法满足临床实验需求。
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基及制备方法和应用，本专利技术人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基通过各组分的添加能够大幅提高人源骨髓间充质干细胞的扩增效率，为临床试验提供了保障。
2、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
3、本专利技术第
4、氨酰胺10～20mg/ml、rhg-csf 10～20ng/ml、bfgf 20～40ng/ml、vegf 40～60ng/ml、转铁蛋白30～60μg/ml、维生素c 2～8mg/ml和血小板裂解物2％～4％。
5、优选地，所述培养基中由基础培养基和添加剂组成，以最终浓度计，所述添加剂包括如下组分：
6、氨酰胺12～18mg/ml、rhg-csf 12～18ng/ml、bfgf 25～35ng/ml、vegf 45～55ng/ml、转铁蛋白40～50μg/ml、维生素c 4～6mg/ml和血小板裂解物3％～4％。
7、优选地，所述培养基中由基础培养基和添加剂组成，以最终浓度计，所述添加剂包括如下组分：
8、氨酰胺15mg/ml、rhg-csf 15ng/ml、bfgf 30ng/ml、vegf 50ng/ml、转铁蛋白45μg/ml、维生素c 5mg/ml和血小板裂解物3.5％。
9、优选地，所述基础培养基为dmem培养基、dmem/f12培养基或α-mem培养基。
10、本专利技术第二方面提供了一种上述人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
11、(a)称取各原料；
12、(b)将血小板裂解液与基础培养基进行混合，得到混合物；
13、(c)将剩余组分添加至混合物中并即兴过滤除菌，即得所述人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基。
14、优选地，所述过滤除菌采用的滤膜孔径为0.22μm。
15、本专利技术第三方面提供了一种上述人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基在人源骨髓间充质干细胞扩增培养中的应用。
16、本专利技术第四方面提供了一种人源骨髓间充质干细胞的扩增培养方法，所述人源骨髓间充质干细胞的扩增培养方法包括如下步骤：
17、(1)从骨髓组织中获取骨髓间充质干细胞；
18、(2)将骨髓间充质干细胞接种于上述人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基中进行扩大培养。
19、优选地，所述人源骨髓间充质干细胞的接种浓度为(1～5)×105cfu/ml。
20、优选地，所述扩大培养温度为37℃，co2浓度为5％。
21、与现有技术相比，本专利技术的有益效果至少包括：
22、本专利技术人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基以基础培养基和血小板裂解物为主要成分，并辅以各种生长因子以及氨酰胺、转铁蛋白和维生素c能够提高人源骨髓间充质干细胞的增值效率；本专利技术人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基在各组分协同作用下大幅提高人源骨髓间充质干细胞的扩增效率，进而为临床或科研的大规模生产提供了保障。
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1.一种人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基，其特征在于，所述培养基中由基础培养基和添加剂组成，以最终浓度计，所述添加剂包括如下组分：
2.根据权利要求1所述的人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基，其特征在于，所述培养基中由基础培养基和添加剂组成，以最终浓度计，所述添加剂包括如下组分：
3.根据权利要求1所述的人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基，其特征在于，所述培养基中由基础培养基和添加剂组成，以最终浓度计，所述添加剂包括如下组分：
4.根据权利要求1所述的人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM培养基、DMEM/F12培养基或α-MEM培养基。
5.权利要求1～4中任一所述的人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述过滤除菌采用的滤膜孔径为0.22μm。
7.权利要求1～4中任一所述的人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基在人源骨髓间充质干细胞扩增培养中的应用。
8.一种人源骨髓间充质干细胞
9.根据权利要求8所述的扩增培养方法，其特征在于，所述人源骨髓间充质干细胞的接种浓度为(1～5)×105cfu/mL。
10.根据权利要求8所述的扩增培养方法，其特征在于，所述扩大培养温度为37℃，CO2浓度为5％。
...【技术特征摘要】
1.一种人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基，其特征在于，所述培养基中由基础培养基和添加剂组成，以最终浓度计，所述添加剂包括如下组分：
2.根据权利要求1所述的人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基，其特征在于，所述培养基中由基础培养基和添加剂组成，以最终浓度计，所述添加剂包括如下组分：
3.根据权利要求1所述的人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基，其特征在于，所述培养基中由基础培养基和添加剂组成，以最终浓度计，所述添加剂包括如下组分：
4.根据权利要求1所述的人源骨髓间充质干细胞扩增用培养基，其特征在于，所述基础培养基为dmem培养基、dmem/f12培养基或α-mem培养基。
5.权利要求1～4...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘保池，高雄，高飞，蔡得阳，黄中俊，郑儒平，
申请(专利权)人：湖南省华启生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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