一种锁阳细胞外囊泡在制备滋阴补阳产品中的应用制造技术

技术编号：41209941 阅读：3 留言：0更新日期：2024-05-09 23:32

本发明专利技术提供一种锁阳细胞外囊泡在制备滋阴补阳产品中的应用。本发明专利技术通过将锁阳与PBS溶液混合，浸泡，过滤，滤液依次经过粗滤、差速离心、精滤、超高速离心获得锁阳细胞外囊泡，通过精确的控制料液比、离心条件、温度等参数，制备得到的锁阳细胞外囊泡轮廓清晰，结构完整。进一步对提取得到的锁阳细胞外囊泡进行研究，发现其可以成功的转染至293T肾脏细胞中，能显著性抑制细胞凋亡并且清除细胞内活性氧，起到有效保护肾功能的效果。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物和医药，具体涉及一种锁阳细胞外囊泡在制备滋阴补阳产品中的应用。

技术介绍

1、锁阳为锁阳科植物锁阳cynomorium songaricum rupr的干燥肉质茎，《本草纲目》曾记载，“锁阳性温，补肾，益精血，润燥养精治痿弱”。现代药理研究表明，锁阳含有黄酮类、糖苷类、三萜类、甾体类有效成分，具有保护肾功能、清除自由基、提高免疫力等功效。在中医临床上，常用于治疗肾阴虚的中药材有石斛、黄精、枸杞等，治疗肾阳虚的中药材有鹿茸、锁阳、淫羊藿等等，通过滋阴壮阳的方式防治衰老、促进生殖机能。

2、目前，大多数关于锁阳药材的利用是将其和其它中药材进行混合、提取、制备成具有滋阴补阳功效的产品。中国专利cn103566139a公开了一种具有补肾强体作用的中药组合物，其方法采用原始煎服方法将包含锁阳等共计22种药材混合加水，经武火煮沸、文火煎熬、去药渣、取汤剂即得。该方法中组分过多、成本高，同时也无法得知锁阳中具体是何种活性成分起到关键性作用，对锁阳药材精细化产品制备、多药剂性生产也缺乏研究。

技术实现思路

1、鉴于此，本专利技术提供一种锁阳细胞外囊泡，该细胞外囊泡在抑制细胞凋亡和清除活性氧方面的效果显著优于普通的锁阳组织提取液，可以作为活性成分应用在多种类型及不同功能型滋阴补阳产品的制备中。

2、为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：

3、锁阳细胞外囊泡在制备滋阴补阳产品中的应用。

4、进一步地，所述锁阳细胞外囊泡制备方法如下：

5、按照料液比1：(3～5)向锁阳中加入pbs溶液，浸泡，过滤，将滤液进行粗滤，在4℃条件下，进行差速离心、精细过滤，再将滤液进行至少一次超高速离心，收集沉淀，即得锁阳细胞外囊泡，向沉淀中加入pbs溶液重悬收集，即为锁阳细胞外囊泡溶液；

6、所述pbs溶液含有5～15mm na2hpo4、135～145mm nacl、1～5mm nah2po4，ph为7.4；

7、所述粗滤采用包括但不限于筛网、纱布、滤纸，粗滤除去肉眼可见杂质即可；所述精细过滤采用孔径为0.2～0.5μm的滤膜；

8、所述差速离心步骤：以300～1000g离心5～15min，取上清液转移至新离心管中；以2000～5000g离心20～40min，取上清液转移至新离心管中；以10000～15000g离心60～90min，取上清液进入下一步骤；

9、所述超高速离心条件：以100000～150000g离心60～120min。

10、在一些具体实施例中，优选的，所述pbs溶液含有8mm na2hpo4、137mm nacl、2mmnah2po4；

11、所述差速离心步骤：以800g离心10min，取上清液转移至新离心管中；以3000g离心30min，取上清液转移至新离心管中；以12000g离心60min，取上清液进入下一步骤；

12、所述超高速离心条件：以100000g离心70min，所述超高速离心进行两次。

13、进一步地，所述浸泡时间为6-24h。

14、进一步地，所述锁阳包括但不限于新鲜植株、干燥植株、饮片、汤剂。

15、进一步地，所述滋阴补阳产品防治的疾病包括但不限于肾气不足、肾精亏虚、肾功能减退。

16、进一步地，所述滋阴补阳产品包括但不限于食品、保健品、药物；

17、所述滋阴补阳产品的剂型包括但不限于乳剂、胶囊剂、喷雾剂、软膏剂、注射剂；

18、所述滋阴补阳产品的辅料包括但不限于赋形剂、助溶剂、缓释剂、黏合剂。

19、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：

20、本专利技术提供的锁阳细胞外囊泡制备方法不仅操作简单，还能够保证细胞外囊泡的纯度高、结构完整、边缘清晰；采用本专利技术公开的方法制备获得的锁阳细胞外囊泡可以成功转染进入293t细胞，在抑制细胞凋亡(凋亡率小于2％)和清除活性氧(ros阳性率2％左右)方面的效果显著优于普通的锁阳组织提取液(凋亡率3％左右、ros阳性率6％左右)，未来可以作为一种新中药活性成分应用在制备滋阴补阳产品中。

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【技术保护点】

1.锁阳细胞外囊泡在制备滋阴补阳产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述锁阳细胞外囊泡制备方法如下：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述PBS溶液含有8mM Na2HPO4、137mMNaCl、2mM NaH2PO4；

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述浸泡时间为6-24h。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述锁阳包括但不限于新鲜植株、干燥植株、饮片、汤剂。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述滋阴补阳产品防治的疾病包括但不限于肾气不足、肾精亏虚、肾功能减退。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述滋阴补阳产品包括但不限于食品、保健品、药物；

【技术特征摘要】

1.锁阳细胞外囊泡在制备滋阴补阳产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述锁阳细胞外囊泡制备方法如下：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述pbs溶液含有8mm na2hpo4、137mmnacl、2mm nah2po4；

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述浸泡时间为6...

【专利技术属性】
技术研发人员：高洋，骆锟，詹雷雷，
申请(专利权)人：蕲泰和瑞生物科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：

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