【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程的，涉及一种高品质人血清纯化方法。
技术介绍
1、人体血清指的是血液凝固后在血浆中除去纤维蛋白原，分离出的淡黄色透明液体或者说是除去了纤维蛋白原的血浆，人体血液的成分由有形成分和无形成分构成，白细胞、红细胞、血小板是有形成分，血清是血液的无形成分，血清的基本的成分是水，里面有蛋白质、脂肪、葡萄糖、无机盐、维生素等营养成分以及人体的代谢产物。血清具有维持血液正常的黏度、酸碱度、渗透压的作用，为人体提供基本的营养物质，提供激素和各种生长因子等。
2、人血清白蛋白是目前产量和用量均最多的蛋白质药物，其非糖基化的单链多肽包含585个氨基酸，分子量为66.5kd。在临床上人血清白蛋白可用于治疗休克与烧伤，用于补充因手术、意外事故或大出血所致的血液丢失，也可以作为血浆增容剂。目前人血清白蛋白的分离纯化主要采用醋酸铵沉淀法、凝胶层析法、离子交换层析法、疏水层析法、亲和层析法等，但是分离纯化效果有待提高。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种高品质人血清的纯化方法，通过两次离心、两次过滤过的人血清品质高，为后期人血清白蛋白的分离纯化提供了保障。
2、本专利技术为实现其目的采用的技术方案：
3、一种高品质人血清纯化方法，包括血清的制备和白蛋白分离纯化，所述血清的制备包括以下步骤：
4、s1.一次离心：取血液，4℃，3000-4000rpm条件下离心处理20min，得上清液；
5、s2.二次离心：取步骤s1的上清液，
6、s3.一次过滤：取步骤s2的上清液过0.22μm过滤器，得滤液；
7、s4.二次过滤：取步骤s3的滤液过0.1μm过滤器，得滤液；
8、s5.灭活：将步骤s4所得滤液进行病毒灭活，得到高品质血清；
9、所述白蛋白分离纯化包括以下步骤：
10、a.盐析：用50％饱和度的硫酸铵溶液沉淀血清中的球蛋白，4℃，4000rpm条件下离心处理15min，得上清液；
11、调ph至4.5，加入饱和硫酸铵，4℃静置2h以上，然后4℃，4000rpm条件下离心处理15min，沉淀即为白蛋白初产物；
12、b.除盐：将步骤a得到的沉淀用柠檬酸-na2hpo4缓冲液溶解，透析至无nh4+；
13、c.纯化：将步骤b脱盐后的样品，移液至deae-纤维素层析柱表面，待样品进入柱床后，先用0.06mol/l的醋酸铵缓冲液洗脱，摒弃该部分洗脱液，然后用0.3mol/l的醋酸铵缓冲液洗脱，收集流出的蛋白，得到纯化后的白蛋白。
14、进一步地，步骤b中柠檬酸-na2hpo4缓冲液的ph值为7.4。
15、进一步地，步骤c的deae-纤维素层析柱中cdeae-纤维素先用0.5mol/l的氢氧化钠溶液处理，然后用0.5mol/l的盐酸溶液处理，再用0.5mol/l的氢氧化钠溶液处理，最后用0.06mol/l的醋酸铵缓冲液浸泡处理，用0.06mol/l的醋酸铵缓冲液洗涤平衡。
16、进一步地，步骤c的洗脱速度为0.8ml/min。
17、本专利技术的有益效果是：
18、本专利技术通过两次离心、两次过滤，是前期获得血清品质相较于现有一次离心的更好，第一次离心采用4℃，3000-4000rpm条件下离心处理20min，除去血液中的红细胞和血凝块；第二次离心采用4℃，8000rpm条件下离心处理3-5min，可进一步除去红细胞，但必须严格控制为“4℃，8000rpm3-5min”，时间过长会对血清造成损伤。通过两次过滤，分别是0.22μm过滤器和0.1μm过滤器，可以去除细菌、病毒和其他微生物，过滤所得血清更好，确保制备的血清是无菌的。
19、本专利技术在血清白蛋白分离纯化过程中，先用50％饱和度的硫酸铵将球蛋白沉淀除去，然后再结合后文中0.06mol/l的醋酸铵缓冲液再次洗脱除去球蛋白，提高了最终血清白蛋白的纯度；在洗脱纯化时，控制流速为0.8ml/min，相比于现在采用的1ml/min的流速，所得白蛋白的纯度更高。
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1.一种高品质人血清纯化方法，包括血清的制备和白蛋白分离纯化，其特征在于，所述血清的制备包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种高品质人血清纯化方法，其特征在于，步骤B中柠檬酸-Na2HPO4缓冲液的pH值为7.4。
3.根据权利要求1所述的一种高品质人血清纯化方法，其特征在于，步骤C的DEAE-纤维素层析柱中CDEAE-纤维素先用0.5mol/L的氢氧化钠溶液处理，然后用0.5mol/L的盐酸溶液处理，再用0.5mol/L的氢氧化钠溶液处理，最后用0.06mol/L的醋酸铵缓冲液浸泡处理，用0.06mol/L的醋酸铵缓冲液洗涤平衡。
4.根据权利要求1所述的一种高品质人血清纯化方法，其特征在于，步骤C的洗脱速度为0.8ml/min。
【技术特征摘要】
1.一种高品质人血清纯化方法，包括血清的制备和白蛋白分离纯化，其特征在于，所述血清的制备包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种高品质人血清纯化方法，其特征在于，步骤b中柠檬酸-na2hpo4缓冲液的ph值为7.4。
3.根据权利要求1所述的一种高品质人血清纯化方法，其特征在于，步骤c的deae-纤维素层析柱中c...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏少博，李亚男，黄茹龙，
申请(专利权)人：山西瑞亚力生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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