【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外检测，尤其是涉及一种用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合及其试剂盒和检测方法。
技术介绍
1、随着干细胞和再生医学的兴起，针对干细胞的基础研究和应用实践层出不穷。从胚胎干细胞，骨髓干细胞，脐带干细胞，脂肪干细胞到诱导多功能干细胞，都被验证为潜在的临床应用理想材料。成体干细胞因其不涉及伦理问题，且无需加入外源基因，被认为是一种来源优于胚胎的干细胞和诱导多功能干细胞的替代物，其在多种疾病的细胞移植疗法中被广泛应用。
2、口腔干细胞在近几年开始兴起，科研学者陆续从人的口腔组织中分离得到多种成体干细胞，包括来源于成人牙齿的牙髓间充质干细胞(dpscs)，来自脱落乳牙的牙髓间充质干细胞(shed)，从牙周膜或者牙周韧带分离的牙周间充质干细胞(pdlscs)，来自牙龈组织的牙龈间充质干细胞(gmscs)等8种成体干细胞。间充质干细胞是良好的生物材料，目前被应用于糖尿病、阿尔茨海默病、帕金森病、脑卒中，肌萎缩性侧索硬化症、多发性硬化、肝硬化、肺纤维化和移植物抗宿主病等。间充质干细胞具有良好的生物学性能，具有高速增殖、多谱系分化、免疫调节、易得且无伦理问题等优点，是再生医学的优选材料，被广泛应用于组织再生工程之中。
3、国际细胞治疗协会(isct)规定间充质干细胞的鉴定包括形态学、流式表型和诱导分化能力三个方面。不同来源的干细胞都有着类似的生长以及分化特性，目前而言比较难以区分其特属的类别。
4、目前间充质干细胞的种类区分主要依据原代细胞取材来源，或根据生长因子与细胞因子的分泌
5、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、需要说明的是，本专利技术用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合、鉴别间充质干细胞来源的方法是以非疾病诊断为目的的，应用场景包括科学研究、基础技术研究、基础医学研究等。
2、本专利技术的第一目的在于提供一种用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合。基于不同间充质干细胞外泌体所含mirna存在的差异，该mirna生物标志物组合可以对间充质干细胞的来源进行鉴别。
3、本专利技术的第二目的在于提供一种用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒。
4、本专利技术的第三目的在于提供一种上述用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合，或用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒的应用。
5、本专利技术的第四目的在于提供一种非疾病诊断或治疗为目的的鉴别间充质干细胞来源的方法。
6、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
7、根据本专利技术的一个方面，一种用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合，所述mirna生物标志物组合包括：
8、hsa-let-7b-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-451a、hsa-mir-184、hsa-mir-146b-5p、hsa-mir-146a-5p、hsa-mir-381-3p、hsa-mir-619-5p、hsa-mir-196a-5p、hsa-mir-493-5p和hsa-mir-370-3p。
9、本专利技术提供的用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合，所述mirna生物标志物组合包括hsa-let-7b-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-451a、hsa-mir-184、hsa-mir-146b-5p、hsa-mir-146a-5p、hsa-mir-381-3p、hsa-mir-619-5p、hsa-mir-196a-5p、hsa-mir-493-5p和hsa-mir-370-3p。申请人经研究发现，不同间充质干细胞外泌体所含mirna存在很大差异，进而本申请提出了一个用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合，通过应用上述单个或多种mirna组合表达谱对不同间充质干细胞外泌体进行区分，从而可以高效快速鉴定所属间充质干细胞的类型。
10、在本专利技术的一种优选实施方式中，所述间充质干细胞来源包括：脱落乳牙牙髓间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙龈间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞、牙囊前体细胞、根尖牙乳头间充质干细胞等、脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞。
11、根据本专利技术的一个方面，一种用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，所述试剂盒包括：检测上述mirna生物标志物组合在间充质干细胞外泌体中表达量的试剂。所述试剂包括用于检测mirna生物标志物组合的检测引物。
12、本专利技术提供的用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，该试剂盒包括：检测上述mirna生物标志物组合在间充质干细胞外泌体中表达量的试剂，所述试剂包括用于检测mirna生物标志物组合的检测引物。进而本申请试剂盒依靠特异性表达的引物组对间充质干细胞的来源进行鉴别，具有特异性强、灵敏度高，结果稳定可靠的优势。
13、在本专利技术的一种优选实施方式中，所述试剂盒还包括rna提取试剂、逆转录试剂、qpcr试剂。
14、在上述优选实施方式中，所述检测引物的核苷酸序列包括：
15、检测hsa-let-7b-5p表达量的检测引物核苷酸序列如seq id no.1所示；具体seqid no:1序列如下：5’-cgtgaggtagtaggttgtgtggtt-3’。
16、检测hsa-mir-122-5p表达量的检测引物核苷酸序列如seq id no.2所示；具体seqid no:2序列如下：5’-cgtggagtgtgacaatggtgtttg-3’。
17、检测hsa-mir-451a表达量的检测引物核苷酸序列如seq id no.3所示；具体seqid no:3序列如下：5’-gcgaaaccgttaccattactgagtt-3’。
18、检测hsa-mir-184表达量的检测引物核苷酸序列如seq id no.4所示；具体seq idno:4序列如下：5’-tggacggagaactgataagggt-3’。
19、检测hsa-mir-146b-5p表达量的检测引物核苷酸序列如seq id no.5所示；具体seq id no:5序列如下：5’-cgtgagaactgaattccataggctg-3’。
20、检测hsa-mir-146a-5p表达量的检测引物核苷酸序列如seq id no.6所示；具体seq id no:6序列如下：5’-cgctgagaactgaattccatgggtt-3’。
21、检测hsa-mir-381-3p表达量的检测引物核苷酸序列如seq id no.7所示；具体seqid no:7序列如下本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于鉴别间充质干细胞来源的miRNA生物标志物组合，其特征在于，所述miRNA生物标志物组合包括：
2.根据权利要求1所述的用于鉴别间充质干细胞来源的miRNA生物标志物组合，其特征在于，所述间充质干细胞来源包括：脱落乳牙牙髓间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙龈间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞、牙囊前体细胞、根尖牙乳头间充质干细胞等、脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞。
3.一种用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
4.根据权利要求3所述的用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括：
5.根据权利要求4所述的用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，其特征在于，所述检测引物的核苷酸序列包括：
6.根据权利要求3所述的用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、逆转录试剂、qPCR试剂。
7.根据权利要求1或2所述的用于鉴别间充质干细胞来源的miRNA生物标志物组合，或根据权利要求3～6任一项所述的用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒在非疾
8.一种非疾病诊断或治疗为目的的鉴别间充质干细胞来源的方法，其特征在于，所述方法包括：
9.根据权利要求8所述的鉴别间充质干细胞来源的方法，其特征在于，所述步骤(C)中所述cDNA进行扩增的扩增方法为荧光定量PCR。
10.根据权利要求8所述的鉴别间充质干细胞来源的方法，其特征在于，所述步骤(C)扩增产物分析的方法为：
...【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合，其特征在于，所述mirna生物标志物组合包括：
2.根据权利要求1所述的用于鉴别间充质干细胞来源的mirna生物标志物组合，其特征在于，所述间充质干细胞来源包括：脱落乳牙牙髓间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙龈间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞、牙囊前体细胞、根尖牙乳头间充质干细胞等、脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞。
3.一种用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
4.根据权利要求3所述的用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括：
5.根据权利要求4所述的用于鉴别间充质干细胞来源的试剂盒，其特征在于，所述检测引物的核苷酸序列包括：
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【专利技术属性】
技术研发人员：马玉实，段茜男，倪苗，
申请(专利权)人：易韦斯北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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