【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及干细胞培养基，尤其涉及一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法。
技术介绍
1、间充质干细胞(mesenchymalstemcells，mscs)是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我复制能力和多向分化能力，并且来源广泛，例如可来源于骨髓、脐带血、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织等。间充质干细胞属于多能干细胞，在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为胰岛、神经、血管内皮、骨、软骨、肌肉、肝脏、心肌等多种组织细胞。mscs因其相对缺少免疫源性，培养技术简单，并可冷冻保存，因此已成为细胞及基因治疗研究的种子细胞，具有潜在的临床应用价值，已成为干细胞研究的热点。
2、现有的间充质干细胞扩增技术存在以下缺点：
3、1、目前常规的间充质干细胞培养基，随着细胞培养时间的增加会产生毒害物质，对细胞产生毒副作用，造成细胞成活率低；
4、2、间充质干细胞的体外培养耗时长和占用空间较大，原代培养目标细胞效率较低；
5、3、原代间充质干细胞在培养扩增过程中，培养基中可能受到微生物的污染，筛选出污染的培养基需要耗费一定的时间。
6、针对以上问题，我们提出了一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、一种具有比
4、优选的，在dmem/f12基础培养基中，添加以下浓度的组分：血小板裂解液15μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠12μg/ml，丝素蛋白8μg/l、羧甲基纤维素钠10μg/l、亚硒酸钠10μg/l、纤连蛋白20mg/l、大豆低聚肽10μg/l、3-吡啶甲酸5μg/l、肌醇16μg/l、碳酸二辛酯20μg/l、多聚磷酸钠12μg/l和酸碱指示剂4μg/l。
5、优选的，所述大豆低聚肽的平均分子量小于500。
6、优选的，其制备方法包括以下步骤：
7、a1、将dmem/f12基础培养基、血小板裂解液、抗坏血酸磷酸酯钠，丝素蛋白、羧甲基纤维素钠、亚硒酸钠、纤连蛋白、大豆低聚肽、3-吡啶甲酸、肌醇、碳酸二辛酯、多聚磷酸钠相混合；
8、a2、加入酸碱指示剂，并调节混合物的ph值；
9、a3、将a2步骤得到的混合物进行灭菌处理，得到间充质干细胞培养基。
10、优选的，所述a2步骤中，调节完毕后，混合物的ph值为7.5-8。
11、优选的，一种具有比对功能的间充质干细胞培养基的工作方法，采用如上述的间充质干细胞培养基，包括以下步骤：
12、b1、将培养瓶铺基底胶，得到铺好基底胶的培养瓶；
13、b2、将间充质干细胞加入到间充质干细胞培养基中，得到含有间充质干细胞的培养基；
14、b3、将含有间充质干细胞的培养基转移到铺好基底胶的培养瓶中，于37℃，5％co2饱和湿度培养箱中培养，每隔3-4d进行全量换液，至细胞充分融合传代。
15、优选的，所述b3步骤中，培养过程中，每隔12h，对比培养基中各个区域的色泽，筛除出出现异常颜色的培养基。
16、本专利技术的有益效果是：
17、1、本专利技术提出的间充质干细胞培养基，其在培养过程中，培养基稳定，不易产生有毒有害的物质，细胞的成活率高。
18、2、本专利技术提出的间充质干细胞培养基，其干细胞培养耗时短，培养效率高，能够高效快速的培养出目标细胞。
19、3、本专利技术提出的间充质干细胞培养基，其内部添加有酸碱指示剂，当培养基中出现菌落污染时，通过指示剂的颜色变化，能够进行快速的对比，将污染的培养基进行筛除；另一方面，碳酸二辛酯和多聚磷酸钠在促进细胞增值的同时，碳酸二辛酯和多聚磷酸钠还能够提高培养基的稳定性，当培养基中出现局部菌落污染时，污染源不易扩散，使得污染处的颜色变化相对明显，便于与培养基的其它区域进行对比。
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1.一种具有比对功能的间充质干细胞培养基，其特征在于，在DMEM/F12基础培养基中，添加以下浓度的组分：血小板裂解液10-30μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠8-20μg/ml，丝素蛋白7-10μg/L、羧甲基纤维素钠8-12μg/L、亚硒酸钠8-12μg/L、纤连蛋白15-30mg/L、大豆低聚肽8-12μg/L、3-吡啶甲酸4-6μg/L、肌醇12-18μg/L、碳酸二辛酯12-22μg/L、多聚磷酸钠10-15μg/L和酸碱指示剂3-6μg/L。
2.根据权利要求1所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基，其特征在于，在DMEM/F12基础培养基中，添加以下浓度的组分：血小板裂解液15μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠12μg/ml，丝素蛋白8μg/L、羧甲基纤维素钠10μg/L、亚硒酸钠10μg/L、纤连蛋白20mg/L、大豆低聚肽10μg/L、3-吡啶甲酸5μg/L、肌醇16μg/L、碳酸二辛酯20μg/L、多聚磷酸钠12μg/L和酸碱指示剂4μg/L。
3.根据权利要求1所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基，其特征在于，所述大豆低聚肽的平均分子
4.根据权利要求1所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基，其特征在于，所述A2步骤中，调节完毕后，混合物的pH值为7.5-8。
6.一种具有比对功能的间充质干细胞培养基的工作方法，其特征在于，采用如权利要求1-5任一所述的间充质干细胞培养基，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基的工作方法，其特征在于，所述B3步骤中，培养过程中，每隔12h，对比培养基中各个区域的色泽，筛除出出现异常颜色的培养基。
...【技术特征摘要】
1.一种具有比对功能的间充质干细胞培养基，其特征在于，在dmem/f12基础培养基中，添加以下浓度的组分：血小板裂解液10-30μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠8-20μg/ml，丝素蛋白7-10μg/l、羧甲基纤维素钠8-12μg/l、亚硒酸钠8-12μg/l、纤连蛋白15-30mg/l、大豆低聚肽8-12μg/l、3-吡啶甲酸4-6μg/l、肌醇12-18μg/l、碳酸二辛酯12-22μg/l、多聚磷酸钠10-15μg/l和酸碱指示剂3-6μg/l。
2.根据权利要求1所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基，其特征在于，在dmem/f12基础培养基中，添加以下浓度的组分：血小板裂解液15μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠12μg/ml，丝素蛋白8μg/l、羧甲基纤维素钠10μg/l、亚硒酸钠10μg/l、纤连蛋白20mg/l、大豆低聚肽10μg/l、3-吡啶甲酸5μg/l、肌醇1...
【专利技术属性】
技术研发人员：张曼玲，金永，
申请(专利权)人：内蒙古医科大学附属医院内蒙古自治区心血管研究所，
类型：发明
国别省市：
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