System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法技术_技高网

一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法技术

技术编号:41192245 阅读:3 留言:0更新日期:2024-05-07 22:22
本发明专利技术涉及细胞培养基技术领域,尤其涉及一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法,一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,在DMEM/F12基础培养基中,添加以下浓度的组分:血小板裂解液10‑30μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠8‑20μg/ml,丝素蛋白7‑10μg/L、羧甲基纤维素钠8‑12μg/L、亚硒酸钠8‑12μg/L、纤连蛋白15‑30mg/L、大豆低聚肽8‑12μg/L、3‑吡啶甲酸4‑6μg/L、肌醇12‑18μg/L、碳酸二辛酯12‑22μg/L、多聚磷酸钠10‑15μg/L和酸碱指示剂3‑6μg/L。本发明专利技术的间充质干细胞培养基,其干细胞培养耗时短,培养效率高,能够高效快速的培养出目标细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及干细胞培养基,尤其涉及一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法


技术介绍

1、间充质干细胞(mesenchymalstemcells,mscs)是一种多能干细胞,它具有干细胞的所有共性,即自我复制能力和多向分化能力,并且来源广泛,例如可来源于骨髓、脐带血、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织等。间充质干细胞属于多能干细胞,在体内或体外特定的诱导条件下,可分化为胰岛、神经、血管内皮、骨、软骨、肌肉、肝脏、心肌等多种组织细胞。mscs因其相对缺少免疫源性,培养技术简单,并可冷冻保存,因此已成为细胞及基因治疗研究的种子细胞,具有潜在的临床应用价值,已成为干细胞研究的热点。

2、现有的间充质干细胞扩增技术存在以下缺点:

3、1、目前常规的间充质干细胞培养基,随着细胞培养时间的增加会产生毒害物质,对细胞产生毒副作用,造成细胞成活率低;

4、2、间充质干细胞的体外培养耗时长和占用空间较大,原代培养目标细胞效率较低;

5、3、原代间充质干细胞在培养扩增过程中,培养基中可能受到微生物的污染,筛选出污染的培养基需要耗费一定的时间。

6、针对以上问题,我们提出了一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法。


技术实现思路

1、本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,而提出的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基及其工作方法。

2、为了实现上述目的,本专利技术采用了如下技术方案:

3、一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,在dmem/f12基础培养基中,添加以下浓度的组分:血小板裂解液10-30μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠8-20μg/ml,丝素蛋白7-10μg/l、羧甲基纤维素钠8-12μg/l、亚硒酸钠8-12μg/l、纤连蛋白15-30mg/l、大豆低聚肽8-12μg/l、3-吡啶甲酸4-6μg/l、肌醇12-18μg/l、碳酸二辛酯12-22μg/l、多聚磷酸钠10-15μg/l和酸碱指示剂3-6μg/l。

4、优选的,在dmem/f12基础培养基中,添加以下浓度的组分:血小板裂解液15μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠12μg/ml,丝素蛋白8μg/l、羧甲基纤维素钠10μg/l、亚硒酸钠10μg/l、纤连蛋白20mg/l、大豆低聚肽10μg/l、3-吡啶甲酸5μg/l、肌醇16μg/l、碳酸二辛酯20μg/l、多聚磷酸钠12μg/l和酸碱指示剂4μg/l。

5、优选的,所述大豆低聚肽的平均分子量小于500。

6、优选的,其制备方法包括以下步骤:

7、a1、将dmem/f12基础培养基、血小板裂解液、抗坏血酸磷酸酯钠,丝素蛋白、羧甲基纤维素钠、亚硒酸钠、纤连蛋白、大豆低聚肽、3-吡啶甲酸、肌醇、碳酸二辛酯、多聚磷酸钠相混合;

8、a2、加入酸碱指示剂,并调节混合物的ph值;

9、a3、将a2步骤得到的混合物进行灭菌处理,得到间充质干细胞培养基。

10、优选的,所述a2步骤中,调节完毕后,混合物的ph值为7.5-8。

11、优选的,一种具有比对功能的间充质干细胞培养基的工作方法,采用如上述的间充质干细胞培养基,包括以下步骤:

12、b1、将培养瓶铺基底胶,得到铺好基底胶的培养瓶;

13、b2、将间充质干细胞加入到间充质干细胞培养基中,得到含有间充质干细胞的培养基;

14、b3、将含有间充质干细胞的培养基转移到铺好基底胶的培养瓶中,于37℃,5%co2饱和湿度培养箱中培养,每隔3-4d进行全量换液,至细胞充分融合传代。

15、优选的,所述b3步骤中,培养过程中,每隔12h,对比培养基中各个区域的色泽,筛除出出现异常颜色的培养基。

16、本专利技术的有益效果是:

17、1、本专利技术提出的间充质干细胞培养基,其在培养过程中,培养基稳定,不易产生有毒有害的物质,细胞的成活率高。

18、2、本专利技术提出的间充质干细胞培养基,其干细胞培养耗时短,培养效率高,能够高效快速的培养出目标细胞。

19、3、本专利技术提出的间充质干细胞培养基,其内部添加有酸碱指示剂,当培养基中出现菌落污染时,通过指示剂的颜色变化,能够进行快速的对比,将污染的培养基进行筛除;另一方面,碳酸二辛酯和多聚磷酸钠在促进细胞增值的同时,碳酸二辛酯和多聚磷酸钠还能够提高培养基的稳定性,当培养基中出现局部菌落污染时,污染源不易扩散,使得污染处的颜色变化相对明显,便于与培养基的其它区域进行对比。

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【技术保护点】

1.一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,其特征在于,在DMEM/F12基础培养基中,添加以下浓度的组分:血小板裂解液10-30μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠8-20μg/ml,丝素蛋白7-10μg/L、羧甲基纤维素钠8-12μg/L、亚硒酸钠8-12μg/L、纤连蛋白15-30mg/L、大豆低聚肽8-12μg/L、3-吡啶甲酸4-6μg/L、肌醇12-18μg/L、碳酸二辛酯12-22μg/L、多聚磷酸钠10-15μg/L和酸碱指示剂3-6μg/L。

2.根据权利要求1所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,其特征在于,在DMEM/F12基础培养基中,添加以下浓度的组分:血小板裂解液15μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠12μg/ml,丝素蛋白8μg/L、羧甲基纤维素钠10μg/L、亚硒酸钠10μg/L、纤连蛋白20mg/L、大豆低聚肽10μg/L、3-吡啶甲酸5μg/L、肌醇16μg/L、碳酸二辛酯20μg/L、多聚磷酸钠12μg/L和酸碱指示剂4μg/L。

3.根据权利要求1所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,其特征在于,所述大豆低聚肽的平均分子量小于500。

4.根据权利要求1所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,其特征在于,其制备方法包括以下步骤:

5.根据权利要求4所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,其特征在于,所述A2步骤中,调节完毕后,混合物的pH值为7.5-8。

6.一种具有比对功能的间充质干细胞培养基的工作方法,其特征在于,采用如权利要求1-5任一所述的间充质干细胞培养基,包括以下步骤:

7.根据权利要求6所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基的工作方法,其特征在于,所述B3步骤中,培养过程中,每隔12h,对比培养基中各个区域的色泽,筛除出出现异常颜色的培养基。

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【技术特征摘要】

1.一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,其特征在于,在dmem/f12基础培养基中,添加以下浓度的组分:血小板裂解液10-30μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠8-20μg/ml,丝素蛋白7-10μg/l、羧甲基纤维素钠8-12μg/l、亚硒酸钠8-12μg/l、纤连蛋白15-30mg/l、大豆低聚肽8-12μg/l、3-吡啶甲酸4-6μg/l、肌醇12-18μg/l、碳酸二辛酯12-22μg/l、多聚磷酸钠10-15μg/l和酸碱指示剂3-6μg/l。

2.根据权利要求1所述的一种具有比对功能的间充质干细胞培养基,其特征在于,在dmem/f12基础培养基中,添加以下浓度的组分:血小板裂解液15μl/ml、抗坏血酸磷酸酯钠12μg/ml,丝素蛋白8μg/l、羧甲基纤维素钠10μg/l、亚硒酸钠10μg/l、纤连蛋白20mg/l、大豆低聚肽10μg/l、3-吡啶甲酸5μg/l、肌醇1...

【专利技术属性】
技术研发人员:张曼玲金永
申请(专利权)人:内蒙古医科大学附属医院内蒙古自治区心血管研究所
类型:发明
国别省市:

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