【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微藻培植，具体涉及一种硒蛋白类胡萝卜素及其培养和制备方法。
技术介绍
1、硒(se)被定为21世纪继碘、锌后必补的第三大微量营养保健元素，它对人体具有抗氧化、防癌变、排毒、提高免疫力等作用。
2、类胡萝卜素可分为两大类，一类是胡萝卜素类，另一类是叶黄素类，是呈橘黄色脂溶性化合物。在胡萝卜素的三种异构体中，以β-胡萝卜素含量最高。类胡萝卜素仅在植物和微生物中可以自行合成，动物自身不能生物合成类胡萝卜素。因此，人体主要从植物性食品中获取类胡萝卜素。人体每天摄入的类胡萝卜素大约为6mg/d。β-胡萝卜素具有抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力、保护视觉系统、保护肾脏和肝脏等作用。
3、普通β-胡萝卜素是没有蛋白质合成体。藻类β-胡萝卜素浓度是胡萝卜的10倍。通过藻类对硒元素的富集并将其与类胡萝卜素结合，能够形成具有较好生理活性的硒蛋白类胡萝卜素，将其提取出来，在生物医药以及食品领域将有重大的意义。
4、但是，目前利用微藻生产硒蛋白类胡萝卜素的产率较低，成本较高，如何提高微藻的硒蛋白类胡萝卜素含量是现阶段面临的重要问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提出一种硒蛋白类胡萝卜素及其培养和制备方法，通过简单的培养方法获得的藻泥含有丰富的硒蛋白类胡萝卜素，成本较低，且硒蛋白类胡萝卜素含量明显提高，经过有效的提取制备方法，获得生理活性较高的硒蛋白类胡萝卜素，进一步与锌离子、铜离子进行螯合得到的硒蛋白-铜/锌螯合胡萝卜素，具有极好的抗氧化活性，明显提高
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、本专利技术提供一种富硒蛋白类胡萝卜素微藻的培养方法，包括以下步骤：
4、s1. 富硒原料的制备：将富硒酵母、红酵母接种于富硒培养基中，进行发酵培养，加入蜗牛提取物酶解，冷冻干燥，球磨，收集发酵破壁产物；
5、s2. 培养基的制备：将步骤s1制得的发酵破壁产物、无机盐组合物、维生素组合物、柠檬酸、柠檬酸铁铵、edta二钠加入水中，灭菌，搅拌混合均匀，制得培养基；
6、s3. 富硒蛋白类胡萝卜素微藻的培养：将钝顶螺旋藻菌种或盐泽螺旋藻菌种接种于步骤s2中的培养基中，接种量为3-5%，通氧气量控制在3-5l/min，培养光强为5000-7000lux，培养温度为28-35℃，培养5-7天，采收，清洗、过滤、去杂质、晾干，获得富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥。
7、作为本专利技术的进一步改进，步骤s1中所述富硒酵母、红酵母的接种量分别为3-5%和1-2%，所述富硒培养基的配方如下：碳酸氢钠0.3wt‰，碳酸钠0.35wt‰，硫酸钾0.5wt‰，硫酸镁0.5wt‰，氧化钙0.5wt‰，红糖5-7wt%，硒代蛋氨酸3-5wt%，亚硒酸钠0.5-2wt%，葡萄糖3-5wt%，尿素10-12wt%，余量为水；所述发酵培养的条件为45-50℃，100-120r/min，发酵培养48-56h，所述蜗牛提取物的添加量为体系总质量的3-5wt%，所述酶解的温度为35-40℃，时间为2-4h，所述球磨的时间为1-2h。
8、作为本专利技术的进一步改进，步骤s2中所述培养基的配方如下：发酵破壁产物：5-7g/l；edta二钠：0.5-1.5mg/l；维生素b1：1-3mg/l；维生素b6：2-4mg/l；维生素c：5-10mg/l，cacl2·2h2o：8-12mg/l；mgso4·7h2o：15-25mg/l；k2hpo4·3h2o：70-80mg/l；na2co3：30-50mg/l；mncl2·4h2o：1.5-2g/l；znso4·7h2o：200-220mg/l；na2moo4·2h2o：35-42mg/l；cuso4·5h2o：75-85mg/l；co(no3)2·6h2o，40-55mg/l；柠檬酸：4-7mg/l；柠檬酸铁铵：4-7mg/l。
9、本专利技术进一步保护一种上述培养方法获得的富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥。
10、本专利技术进一步保护一种从上述富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥中制备富硒蛋白类胡萝卜素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
11、t1. 将富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥加入水中，加入蜗牛提取物和复合酶酶解，过滤，收集滤液；
12、t2. 向步骤t1中的滤液中加入有机溶剂，超声波加热萃取，重复2-3次，收集和合并有机相，减压除去溶剂，获得粗产物；
13、t3. 将步骤t2制得的粗产物加入碱液中，加热进行皂化反应，透析，收集透析液，冷冻干燥，制得富硒蛋白类胡萝卜素。
14、作为本专利技术的进一步改进，步骤t1中所述富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥、蜗牛提取物和复合酶的质量比为100:5-7:3-5，所述复合酶包括纤维素酶和中性蛋白酶，质量比为10-12:3-5，所述酶解的温度为45-50℃，时间为2-4h。
15、作为本专利技术的进一步改进，步骤t2中所述滤液和有机溶剂的体积比为1:0.5-1.5，所述有机溶剂为石油醚和乙醚的混合物，体积比为10-15:5-7，所述超声波加热萃取中，超声波功率为700-1000w，所述加热的温度为50-55℃，时间为1-3h。
16、作为本专利技术的进一步改进，步骤t3中所述粗产物和碱液的质量比为10-15:100，所述碱液为10-15wt%的naoh或koh溶液，所述皂化反应的温度为90-100℃，时间为2-4h，所述透析采用的透析袋孔径为3-5kda，透析的时间为5-7h。
17、本专利技术进一步保护一种由上述的方法制得的富硒蛋白类胡萝卜素。
18、本专利技术进一步保护一种富硒蛋白类胡萝卜素螯合物，将上述富硒蛋白类胡萝卜素加入水中，加入氯化锌和氯化铜，搅拌反应，透析，透析液冷冻干燥，制得富硒蛋白类胡萝卜素螯合物。
19、优选地，一种富硒蛋白类胡萝卜素螯合物的制备方法为将10重量份富硒蛋白类胡萝卜素加入100重量份水中，加入0.5-1重量份氯化锌和0.3-0.6重量份氯化铜，搅拌反应20-40min，采用孔径为3-5kda的透析袋透析2-4h，透析液冷冻干燥，制得富硒蛋白类胡萝卜素螯合物。
20、优选地，蜗牛提取物的制备方法如下：将30-50重量份蜗牛去壳，绞碎，液氮冷冻，融解，重复2-3次，加入100重量份水中，1000-1200w超声波提取1-2h，过滤，滤液冷冻干燥，制得蜗牛提取物。
21、本专利技术具有如下有益效果：
22、本专利技术利用硒蛋白、无机硒源在富硒酵母和红酵母的转化作用下，产生了含量丰富的有机硒原料，经过蜗牛提取物酶解破壁，富硒酵母和红酵母菌体破裂，细胞内容物溶出，与培养基中的原料混合，获得了含有丰富营养物质（包括碳源、氮源和有机硒源）的发酵破壁产物，为后续微藻的诱导繁殖提供了充分的营养物质。
23、然后，本专利技术配制了含有丰富无机盐组分、维生素组分的培养基，在维生素的作用下，能快速本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种富硒蛋白类胡萝卜素微藻的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述富硒蛋白类胡萝卜素微藻的培养方法，其特征在于，步骤S1中所述富硒酵母、红酵母的接种量分别为3-5%和1-2%，所述富硒培养基的配方如下：碳酸氢钠0.3wt‰，碳酸钠0.35wt‰，硫酸钾0.5wt‰，硫酸镁0.5wt‰，氧化钙0.5wt‰，红糖5-7wt%，硒代蛋氨酸3-5wt%，亚硒酸钠0.5-2wt%，葡萄糖3-5wt%，尿素10-12wt%，余量为水；所述发酵培养的条件为45-50℃，100-120r/min，发酵培养48-56h，所述蜗牛提取物的添加量为体系总质量的3-5wt%，所述酶解的温度为35-40℃，时间为2-4h，所述球磨的时间为1-2h。
3.根据权利要求1所述富硒蛋白类胡萝卜素微藻的培养方法，其特征在于，步骤S2中所述培养基的配方如下：发酵破壁产物：5-7g/L；EDTA二钠：0.5-1.5mg/L；维生素B1：1-3mg/L；维生素B6：2-4mg/L；维生素C：5-10mg/L，CaCl2·2H2O：8-12mg/L；MgSO4·7H2O：
4.一种如权利要求1-3任一项所述培养方法获得的富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥。
5.一种从权利要求4中所述富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥中制备富硒蛋白类胡萝卜素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述从富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥中制备富硒蛋白类胡萝卜素的方法，其特征在于，步骤T1中所述富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥、蜗牛提取物和复合酶的质量比为100:5-7:3-5，所述复合酶包括纤维素酶和中性蛋白酶，质量比为10-12:3-5，所述酶解的温度为45-50℃，时间为2-4h。
7.根据权利要求5所述从富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥中制备富硒蛋白类胡萝卜素的方法，其特征在于，步骤T2中所述滤液和有机溶剂的体积比为1:0.5-1.5，所述有机溶剂为石油醚和乙醚的混合物，体积比为10-15:5-7，所述超声波加热萃取中，超声波功率为700-1000W，所述加热的温度为50-55℃，时间为1-3h。
8.根据权利要求5所述从富硒蛋白类胡萝卜素微藻泥中制备富硒蛋白类胡萝卜素的方法，其特征在于，步骤T3中所述粗产物和碱液的质量比为10-15:100，所述碱液为10-15wt%的NaOH或KOH溶液，所述皂化反应的温度为90-100℃，时间为2-4h，所述透析采用的透析袋孔径为3-5kDa，透析的时间为5-7h。
9.一种由权利要求5-8任一项所述的方法制得的富硒蛋白类胡萝卜素。
10.一种富硒蛋白类胡萝卜素螯合物，其特征在于，将权利要求9所述富硒蛋白类胡萝卜素加入水中，加入氯化锌和氯化铜，搅拌反应，透析，透析液冷冻干燥，制得富硒蛋白类胡萝卜素螯合物。
...【技术特征摘要】
1.一种富硒蛋白类胡萝卜素微藻的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述富硒蛋白类胡萝卜素微藻的培养方法，其特征在于，步骤s1中所述富硒酵母、红酵母的接种量分别为3-5%和1-2%，所述富硒培养基的配方如下：碳酸氢钠0.3wt‰，碳酸钠0.35wt‰，硫酸钾0.5wt‰，硫酸镁0.5wt‰，氧化钙0.5wt‰，红糖5-7wt%，硒代蛋氨酸3-5wt%，亚硒酸钠0.5-2wt%，葡萄糖3-5wt%，尿素10-12wt%，余量为水；所述发酵培养的条件为45-50℃，100-120r/min，发酵培养48-56h，所述蜗牛提取物的添加量为体系总质量的3-5wt%，所述酶解的温度为35-40℃，时间为2-4h，所述球磨的时间为1-2h。
3.根据权利要求1所述富硒蛋白类胡萝卜素微藻的培养方法，其特征在于，步骤s2中所述培养基的配方如下：发酵破壁产物：5-7g/l；edta二钠：0.5-1.5mg/l；维生素b1：1-3mg/l；维生素b6：2-4mg/l；维生素c：5-10mg/l，cacl2·2h2o：8-12mg/l；mgso4·7h2o：15-25mg/l；k2hpo4·3h2o：70-80mg/l；na2co3：30-50mg/l；mncl2·4h2o：1.5-2g/l；znso4·7h2o：200-220mg/l；na2moo4·2h2o：35-42mg/l；cuso4·5h2o：75-85mg/l；co(no3)2·6h2o，40-55mg/l；柠檬酸：4-7mg/l；柠檬酸铁铵：4-7mg/l。
4.一种如权利要求1-3...
【专利技术属性】
技术研发人员：屈金跃，赵铁光，赵昱恺，胡夏一，
申请(专利权)人：湖南硒宝宝健康产业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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