【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体而言，涉及一种促进移植物体外内皮化组合物及方法。
技术介绍
1、心血管疾病是包含心脏和血管的结构和功能紊乱的一系列疾病。包括人工心脏瓣膜、血管支架、血管移植物、人工心脏和心室辅助装置在内的各种心血管装置是严重心血管疾病患者的生命线。这些装置由各种生物材料组成，如聚乙烯、膨胀聚四氟乙烯、硅树脂、钛或钴铬，通常不会引起宿主的任何炎症或免疫反应。然而，这些生物材料的血液相容性仍旧是值得关注的问题。因为由这些生物材料制成的装置在与血液接触时很可能会激活凝血级联，产生凝血反应，血液凝固后可能出现血流动力学不稳定、出血并发症和器官损伤等后续问题，最终可能危及患者的生命。遍布人体心血管系统的天然内皮层提供了抗凝血表面，且内皮层还能防止由于平滑肌细胞迁移和过度增殖导致的内膜增生。因此在心血管装置的血液接触表面构建单层内皮细胞——内皮化被认为是解决这种移植物植入后阻塞风险的最有效手段。
2、任何心血管装置的内皮层在植入后都不会立即形成，人工移植物在移植后常会伴随血栓形成、内膜增生和管腔闭塞，从而导致其他健康并发症的临床现象。物理、化学和生物学等多种生物材料表面修饰策略均试图改善血液相容性和内皮化。目前的内皮化策略主要分为体外内皮化和原位内皮化。1)体外内皮化：在静态或动态环境下的体外细胞培养方法实现内皮细胞的全覆盖，能够直观展现内皮化修饰后的结果。体外研究使用来自不同来源的内皮细胞，包括各种心血管器官和脐带血、外周血源性内皮祖细胞及其继发性血液生长细胞和各种干细胞。2)原位内皮化：细胞工程方法包括细胞治疗、
3、然而，目前尚未有公认的用于评估内皮化程度的科学表征手段，常用cd31免疫荧光染色检验内皮细胞的覆盖率来代表内皮化的成果。但纵使某处有内皮细胞的覆盖，也无法评估其存在的空隙和间隔，仍旧可能激活凝血或是导致内膜增生等使管腔狭窄甚至闭塞的风险。目前临床常用的血管移植物仍旧存在顺应性差、通畅率低、需要长期服用抗血小板药物、抗凝药物等问题，为患者带来较为严重的安全隐患。若能解决内皮化难题，可极大提高心血管患者移植后的预后效果，为心血管疾病的临床治疗提供更优的解决方案。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种促进移植物体外内皮化组合物及方法。通过本专利技术的组合物的诱导能够使人脐静脉内皮细胞在体外更好的、均匀地铺展，为心血管疾病的临床治疗提供更优的解决方案。
2、本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
3、本专利技术的一个方面提供了一种促进移植物体外内皮化组合物，所述组合物主要由以下物质组成：
4、1)组分i，所述组分i为no供体化合物及其等效类似物、制品、前体或其组合；
5、2)组分ii，所述组分ii为具有激活环3’,5’-腺苷单磷酸依赖性蛋白激酶的分子及其等效类似物、制品、前体或其组合；
6、3)组分iii，所述组分iii为具有促进内皮细胞功能和no释放功能的小分子及其等效类似物、制品、前体或其组合。
7、在本专利技术的一个优选实施例中，所述组分i包括有机硝酸盐类、n-二氮烯鎓二醇或具有二醇基的二醇二氮烯鎓盐、s-亚硝基硫醇、亚硝胺类或其前体物质亚硝酸盐、硝酸盐供体、盐酸盐和金属-no络合物。
8、在本专利技术的一个优选实施例中，所述有机硝酸盐类，包括但不限于硝酸甘油、三硝酸甘油酯、异山梨醇一硝酸酯。
9、在本专利技术的一个优选实施例中，所述n-二氮烯鎓二醇或具有二醇基的二醇二氮烯鎓盐，包括但不限于2-(n，n-二乙基氨基)-二氮杂烯酸酯-2-氧化物。
10、在本专利技术的一个优选实施例中，所述s-亚硝基硫醇，包括但不限于s-亚硝基谷胱甘肽、s-亚硝基-n-乙酰青霉胺、有机盐硝普钠。
11、在本专利技术的一个优选实施例中，所述亚硝胺类或其前体物质亚硝酸盐，包括但不限于亚硝酸戊酯、亚硝酸盐。
12、在本专利技术的一个优选实施例中，所述硝酸盐供体，包括但不限于piloty酸、angeli盐、硝酸银、硝酸铁、硝酸铜、硝酸铝、硝酸钠、硝酸钾、硝酸铵。
13、在本专利技术的一个优选实施例中，所述盐酸盐，包括但不限于林西多明、氯化钙、氯化钡、氯化亚铁、氯化铁、氯化铜、氯化铝、氯化、氯化钾、氯化铵。
14、在本专利技术的一个优选实施例中，所述金属-no络合物，包括但不限于硝普钠。
15、在本专利技术的一个优选实施例中，所述组分ii包括camp、8-(4-氯苯硫基)腺苷3'，5'-环单磷酸、地塞米松、氢化可的松。
16、在本专利技术的一个优选实施例中，所述组分iii包括雌激素、hmg-coa还原酶抑制剂、血管紧张素转化酶抑制剂、西地那非。
17、在本专利技术的一个优选实施例中，所述雌激素为促进雌性动物第二性征发育及性器官成熟的物质，由雌性动物卵巢和胎盘分泌产生；包括天然雌激素和人工合成雌激素两大类，包括但不限于雌二醇、雌三醇、雌酮、炔雌醇、炔雌醚。
18、在本专利技术的一个优选实施例中，所述hmg-coa还原酶抑制剂，包括但不限于阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀和西立他汀。
19、在本专利技术的一个优选实施例中，所述血管紧张素转化酶抑制剂，包括但不限于卡托普利、赖诺普利、依那普利、贝那普利、福辛普利、培哚普利、雷米普利。
20、本专利技术的另一个方面还提供了一种促进移植物体外内皮化的方法，所述方法包括：
21、配制内皮细胞专用培养基：将前述的组合物加入至完全培养基中；
22、采用内皮细胞专用培养基对内皮细胞进行诱导培养；
23、将诱导后的内皮细胞贴合于移植物，从而使移植物内皮化。
24、在本专利技术的一个优选实施例中，所述诱导培养条件为：37℃，5％co2恒温培养箱中进行培养。
25、在本专利技术的一个优选实施例中，将内皮细胞贴合于移植物的具体操作为：直接在移植物表面加入内皮细胞单细胞悬液，于37℃，5％co2的条件下进行培养，6h后细胞将完成贴壁。
26、在本专利技术的一个优选实施例中，所述内皮细胞为人源性或非人源性内皮细胞，优选地，为来源于小鼠、大鼠、兔、猴、猪、狗或人的心血管器官、脐带血、外周血源性内皮祖细胞、继发性血液生长细胞或干细胞分化而来的内皮细胞。
27、在本专利技术的一个优选实施例中，所述移植物包括人工心脏瓣膜、血管支架、血管移植物、人工心脏或心室辅助装置。
28、借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点：
29、本专利技术提供了一种促进移植物体外内皮化组合物及基于生物技术原理实现细胞体外内皮化的方法，本专利技术的组合物可以促进人脐静脉内皮细胞在体外更好的、均匀地铺展，形成紧密连接，缩小细胞间隙和可能存在的其他空隙，用更本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种促进移植物体外内皮化组合物，其特征在于，所述组合物主要由以下物质组成：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分I包括有机硝酸盐类、N-二氮烯鎓二醇或具有二醇基的二醇二氮烯鎓盐、S-亚硝基硫醇、亚硝胺类或其前体物质亚硝酸盐、硝酸盐供体、盐酸盐和金属-NO络合物。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述有机硝酸盐类包括硝酸甘油、三硝酸甘油酯、异山梨醇一硝酸酯；
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分II包括CAMP、8-(4-氯苯硫基)腺苷3'，5'-环单磷酸、地塞米松、氢化可的松。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分III包括雌激素、HMG-CoA还原酶抑制剂、血管紧张素转化酶抑制剂、西地那非。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述雌激素包括雌二醇、雌三醇、雌酮、炔雌醇、炔雌醚；
7.一种促进移植物体外内皮化的方法，其特征在于，所述方法包括：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述诱导培养条件为：37℃，5％CO2恒
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述内皮细胞为人源性或非人源性内皮细胞，优选地，为来源于小鼠、大鼠、兔、猴、猪、狗或人的心血管器官、脐带血、外周血源性内皮祖细胞、继发性血液生长细胞或干细胞分化而来的内皮细胞。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述移植物包括人工心脏瓣膜、血管支架、血管移植物、人工心脏或心室辅助装置。
...【技术特征摘要】
1.一种促进移植物体外内皮化组合物，其特征在于，所述组合物主要由以下物质组成：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分i包括有机硝酸盐类、n-二氮烯鎓二醇或具有二醇基的二醇二氮烯鎓盐、s-亚硝基硫醇、亚硝胺类或其前体物质亚硝酸盐、硝酸盐供体、盐酸盐和金属-no络合物。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述有机硝酸盐类包括硝酸甘油、三硝酸甘油酯、异山梨醇一硝酸酯；
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分ii包括camp、8-(4-氯苯硫基)腺苷3'，5'-环单磷酸、地塞米松、氢化可的松。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分iii包括雌激素、hmg-coa还原酶抑制剂、血管紧张素转...
【专利技术属性】
技术研发人员：董磊，周徐倩，
申请(专利权)人：无锡市南京大学锡山应用生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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