【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析检测，具体涉及一种同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法。
技术介绍
1、再造烟叶(reconstituted tobacco)又称烟草薄片或重组烟草，属烟草废弃资源再生利用的一种产品，它主要利用烟叶采收、调制、复烤、仓储以及烟草制品加工过程所产生的烟梗、烟末、碎片、碎丝甚至下低次烟叶等烟草副产品和烟草废弃物，按一定配方要求，经过特定工艺加工而成的类似牛皮纸状的重组烟草制品。由于其以烟草为原料加工而成且其理化特性与烟叶接近甚至优于天然烟叶，通常在烟草制品中作为叶组配方原料或填充料使用，也是加热卷烟(htps)的主要烟草段材料之一。研究发现，烟草中富含葡萄糖、果糖、脯氨酸和蛋白质等微生物生长繁殖所需的碳源和氮源，腐败微生物极易在浆料中生长繁殖，致使浆料腐败变质，影响纸基的物理性能，从而进一步影响再造烟叶的整体品质。因此，再造烟叶在生产、运输以及储存的过程中，为了防止因微生物繁殖引起的变质，提高保存性，往往需要添加一些化学物质来抑制微生物的生长或者杀死这些微生物。
2、苯甲酸和山梨酸作为食品添加剂和防腐剂被广泛使用，用以避免产品腐败、延长保质期。对羟基苯甲酸酯可通过破坏细胞膜和胞内蛋白质并改变微生物细胞酶活性，起到防腐的作用，是食品、化妆品等行业常用的一类防腐剂。上述防腐剂通常被认为是安全的，但超标使用也会带来隐患，例如过量摄入苯甲酸和山梨酸可能导致代谢性酸中毒、痉挛和过敏等一系列不良反应。同时，有研究表明对羟基苯甲酸酯具有雌激素活性，可能干扰人体内分泌，并且其雌激素属性随链长的增加而增加，因此2014年后
3、不同于日化用品，再造烟叶中的防腐剂可随着消费者的抽吸或者口含行为而直接进入人体，可能对消费者健康带来潜在威胁。目前国内烟草制品防腐剂行业标准(yc/t423-2011)以及行业基层实验室防腐剂检测多采用液-液萃取作为样品前处理，灵敏度和选择性均有局限，且未包含长碳链对羟基苯甲酸酯的检测。因此，为了对再造烟叶等烟用辅材中防腐剂的使用情况进行有效监管，建立简单、快速、灵敏的样品前处理及分析方法具有重要意义。
4、中空纤维液相微萃取(hf-lpme)是一种较为新颖的样品前处理技术，由pedersen-bjergaard和rasmussen于1999年提出。hf-lpme是将多孔的中空纤维作为有机溶剂的载体，实际为液-液膜萃取，原理类似于膜分离液相萃取法，避免了样品基质对分析物或萃取剂的污染，起到微过滤和样品净化的作用。相较于传统方法，hf-lpme法具有溶剂用量少、富集倍数大的特点。由于hf-lpme萃取相有纤维膜的保护，选择性和稳定性优于一般的液相微萃取(lpme)，纤维膜成本低，适用于批量测试，在复杂基质痕量分析领域具有广阔的应用前景，可很好地弥补已有标准方法的不足。
5、专利《一种同时测定烟用香精香料中苯甲酸、山梨酸及对羟基苯甲酸酯类杀菌剂的方法》建立了三相中空纤维液液微萃取-高效液相色谱法，实现了烟用香精香料中山梨酸、苯甲酸和7种对羟基苯甲酸酯类杀菌剂的同时测定，取得了良好的实际应用效果。然而，采用三相中空纤维微萃取技术作为样品前处理，也有一定程度的局限。对羟基苯甲酸酯因：①亲脂性更强；②在水溶液中离解程度更低，富集倍数低于山梨酸和苯甲酸。由于现行法规对于对羟基苯甲酸酯类的限量标准低于山梨酸和苯甲酸，所以对于提升对羟基苯甲酸酯类化合物检测灵敏度具有现实意义。
6、因此，本专利选择再造烟叶中山梨酸、苯甲酸以及7种对羟基苯甲酸酯类杀菌剂作为目标化合物，开展两相中空纤维液相微萃取的探索，以期待能获得更好的萃取富集效果。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的局限与不足，开发一种基于两相中空纤维液液微萃取技术的样品前处理方法用于再造烟叶中杀菌剂的测定。该方法集萃取、富集与净化为一体，待测组分经中空纤维萃取/富集后加入衍生化试剂，利用gc进样口在线衍生后，质谱内标法定量。本方法检出限低，灵敏度可超过串联质谱的水平。
2、一种同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
3、1)配制标准溶液：分别称取9种杀菌剂的标准品，定容，得到9种杀菌剂的混标储备溶液，分别称取第一内标物和第二内标物，定容，得到第一内标混合溶液和第二内标物混合溶液；
4、2)标准工作溶液的处理：称取不含待测成分的再造烟叶，分别加入一系列不同体积的步骤1)得到的混标储备溶液和第一内标混合溶液和第二内标物混合溶液，配置一系列不同浓度的标准工作溶液并调节ph；
5、3)待测样品的处理：将待测样品放入样品瓶中，加入第一内标物和第二内标物，调节ph，得到待测样品；
6、4)萃取富集：在步骤2)所得的一系列不同浓度的标准工作溶液和步骤3)所得待测样品中分别置入中空纤维，所述中空纤维的内腔中注入萃取相，进行萃取、富集；
7、5)待测样品的测定：将步骤4)标准工作溶液和待测样品的萃取相在gc进样口在线衍生后，采用质谱内标法对待测样品中的待测成分进行定性和定量分析。
8、优选地，11)步骤1)中，所述杀菌剂选自山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯或对羟基苯甲酸苄酯中的一种或者多种；所述待测化合物的相关信息如下,
9、表1.待测化合物相关信息
10、
11、优选地，12)步骤1)中，所述第一内标物选自氘代苯甲酸；
12、优选地，13)步骤1)中，所述第二内标物选自氘代对羟基苯甲酸丙酯；
13、优选地，14)步骤1)中，所述定容的试剂为甲醇。
14、优选地，步骤2)中，所述ph＝2～8；例如可以是ph＝2～3、ph＝3～4、ph＝4～5、ph＝5～6、ph＝6～7、ph＝7～8等。
15、优选地，22)步骤2)中，所述调节ph的试剂为盐酸水溶液，所述盐酸水溶液在标准工作溶液的摩尔浓度可以为0～10mmol/l，例如可以是0～0.001mmol/l，0.001～0.01mmol/l，0.01～0.1mmol/l，0.1～1mmol/l，1～10mmol/l等。优选地，31)步骤3)中，当所述待测样品为膏状粘稠或固体样品，进行均质化；
16、优选地，32)步骤3)中，所述ph＝2～8，例如可以是ph＝2～3、ph＝3～4、ph＝4～5、ph＝5～6、ph＝6～7、ph＝7～8等。
17、优选地，33)步骤3)中，所述调节ph的试剂为盐酸水溶液。
18、优选地，311)特征31)中，所述均质化的试剂选自水或甲醇中的一种或者多种；所述水为煮沸后去除co2的去离子水；
19、优选地，312)特征33)中，所述盐酸水溶液在待测样品中的摩尔浓度为0～10mmol/l，例如可以是0～0.001mmol/l，0.001～0.01mmol/l，0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下技术特征中的至少一项：
3.根据权利要求1所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，步骤2)中，所述pH＝2～8。
4.根据权利要求3所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，步骤2)中，所述调节pH的试剂为盐酸水溶液。
5.根据权利要求1所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下技术特征中的至少一项：
6.根据权利要求5所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下技术特征中的至少一项：
7.根据权利要求5所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，所述样品均质液与所述待测样品的体积比为(1:15)～(2:5)。
8.根据权利要求1所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下技术特征中的至少一项：
9.根据权利要求8所述的同时测定烟草产品中9种杀菌
10.根据权利要求1所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下技术特征中的至少一项：
...【技术特征摘要】
1.一种同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下技术特征中的至少一项：
3.根据权利要求1所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，步骤2)中，所述ph＝2～8。
4.根据权利要求3所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，步骤2)中，所述调节ph的试剂为盐酸水溶液。
5.根据权利要求1所述的同时测定烟草产品中9种杀菌剂的方法，其特征在于，包括以下技术特征中的至少一项：
6.根据权利要求5所...
【专利技术属性】
技术研发人员：王晔，谢剑晨，黄灵洁，夏志骋，
申请(专利权)人：上海烟草集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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