【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测领域。
技术介绍
1、蜜蜂在维持自然生态平衡和生态农业，供给人类高营养和保健功能蜂产品的过程中扮演重要角色。中华蜜蜂(apis cerana cerana)是我国独特的蜜蜂资源，具有极强的耐寒性和抗螨性，因此中华蜜蜂(简称中蜂)对于农业生产以及花卉植物的冬季繁殖具有不可替代的作用。但近十年来，由于各种原因，世界各地的蜜蜂大量流失，严重威胁各国的养蜂业、生态平衡和农村农业生产。
2、研究表明，蜜蜂幼虫感染的病毒主要是囊状幼虫病毒(sbv)。sbv感染中华蜜蜂a.cerana cerana时被称为中蜂囊状幼虫病毒(csbv)，csbv使中蜂幼虫不完全蛹化且蛹内充满病毒粒子。当损害严重时，大量幼虫会因感染而死亡，同时成虫为维护蜂群的生存环境而清理病死的幼虫时也会被感染上csbv，最终导致种群的灭绝，对养蜂产业形成无法挽回的损失。
3、神经酰胺是鞘磷脂代谢途径的中心成分。它是从头合成途径中的关键中间体，首先在内质网中产生，然后转移到高尔基复合体。一旦转移，它就会在许多不同的生物合成途径中的一种中进一步代谢。
技术实现思路
1、为了检测感染csbv前后中蜂幼虫体内神经酰胺含量的变化，对感染csbv病毒的中蜂幼虫体内神经酰胺含量进行检测。研究发现，与正常组相比，感染csbv病毒的幼虫体内神经酰胺含量显著增加，但随着感染程度的加深，感染组与正常组神经酰胺含量的差异不显著。结果表明，中蜂幼虫感染csbv病毒后神经酰胺的含量升高，目前市面上，主要为检测昆
2、本申请公开了一种针对中蜂感染csbv情况的检测试剂盒，使其对中蜂感染情况的检测更加灵敏，特异性更强，大大缩短检测时间和成本。可及时筛选出染病中蜂来指导后续治疗并提高存活率，为饲养、研究提供有效帮助。
3、首先，对于神经酰胺通路中所涉及到的几种蛋白酶进行检测，筛选出中华蜜蜂中性鞘磷脂酶acnsmase作为关键酶，扩增acnsmase基因，进行t载体的构建并完成转化，挑选目的基因片段并进行重组表达载体的构建，最后进行重组蛋白的诱导表达。大量诱导该重组蛋白，免疫小鼠，获得多克隆抗体。
4、用从中蜂幼虫中提取的总蛋白作为抗原包被微孔板，往包被抗原的微孔中加入制备出来的抗体，再与hrp标记的抗体结合，形成抗原－抗体－酶标抗体复合物，进行显色反应。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(od值)。
5、本申请能够灵敏、快速、高效的新型试剂盒，用于检测中蜂病原微生物感染情况，辅助有关蜜蜂生产以及相关实验研究，与现有昆虫神经酰胺检测试剂盒相比，该试剂盒的成本更低。
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1.一种中蜂囊状幼虫病毒的检测试剂盒，其特征在于，通过检测正常蜂群和疑似患病蜂群中的神经酰胺含量的差异性来预测蜂群是否感染CSBV，包括如下：检测试剂盒的检测抗体为多克隆抗体，所述的多克隆抗体的制备方法如下：
2.根据权利要求1所述的中蜂囊状幼虫病毒的检测试剂盒，其特征在于，在步骤三中IPTG诱导目的蛋白表达的条件为：在室温下培养至OD值0.6-0.8时加入终浓度为0.1mmol/L的IPTG，诱导8h。
3.根据权利要求1所述的中蜂囊状幼虫病毒的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒还包括：pH9.6的碳酸盐缓冲液、5％的脱脂奶粉、TBST洗涤液、HRP-羊抗鼠、2mol/L的H2SO4。
4.一种中蜂囊状幼虫病毒的检测方法，其特征在于，步骤如下：
5.根据权利要求4所述的中蜂囊状幼虫病毒的检测方法，其特征在于，步骤二具体包括：
【技术特征摘要】
1.一种中蜂囊状幼虫病毒的检测试剂盒，其特征在于，通过检测正常蜂群和疑似患病蜂群中的神经酰胺含量的差异性来预测蜂群是否感染csbv，包括如下：检测试剂盒的检测抗体为多克隆抗体，所述的多克隆抗体的制备方法如下：
2.根据权利要求1所述的中蜂囊状幼虫病毒的检测试剂盒，其特征在于，在步骤三中iptg诱导目的蛋白表达的条件为：在室温下培养至od值0.6-0.8时加入终浓度为0.1mmol/...
【专利技术属性】
技术研发人员：党晓群，郭悦，张洁，张飞扬，谢欣瑞，姚丽莎，王艺璇，
申请(专利权)人：重庆师范大学，
类型：发明
国别省市：
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