【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯（dota- mono-nhsester）高效液相色谱测定方法。
技术介绍
1、轮环藤宁四乙酸（1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸, 简称：dota)是具有下列结构（式一）的由中心12元四氮杂环组成的有机化合物：
2、 。
3、 dota可以通过四个羧基中的一个的连接作为酰胺与单克隆抗体缀合，剩余的三个羧酸根阴离子与钇离子（90y）结合。经修饰的抗体在肿瘤细胞中积累，浓集了90y的放射活性效应。轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯（dota- mono-nhs ester，结构如式二）是这个操作过程中使用最广泛、最方便的试剂。
4、中国专利申请（cn113582975， 2021）提到了使用轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯参与反应后的高效液相色谱检测方法，但在使用该方法来检测轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯的纯度时，完全不可行，特别是该方法中提到用醋酸铵作为水相添加剂，而醋酸铵与需要检测的四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯会发生反应。欧洲专利（ep2740491，2014）报道了用硅胶板层析（tlc）来检测纯度，提到该化合物在硅胶板上完全没有展开（rf=0），没有使用价值。所有目前需要一种轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯的纯度检测方法，特别是简便的高效液相色谱检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯（dota- mon
2、本专利技术采用了以下技术方案：一种轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯高效液相色谱测定方法，包括以下步骤：
3、步骤一，准备测量的试剂，测量的试剂包括异丙醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），超纯水，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾（分析纯）。
4、步骤二，流动相溶液配置，流动相a（磷酸盐缓冲液）配制，精密称取4.35g 磷酸氢二钾和3.40g 磷酸二氢钾置于2l容量瓶，加500ml超纯水, 超声溶解，用超纯水定容至2l,超声脱气，过滤后备用；流动相b为乙腈（色谱纯），过滤后备用。
5、步骤三，样品溶液的配制，称取轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯试样置于棕色容量瓶中，加入异丙醇，室温条件下采用超声波溶解，用异丙醇定容，最后试样用聚丙烯有机滤膜过滤后进行高效液相色谱分析，当样品中轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯（dota- mono-nhs ester）吸收超过0.5au时，需稀释样品，使样品的吸收在0.2~0.5au范围。
6、步骤四，进行高效液相色谱测定。测定的的过程为：色谱条件为样品室温度为25℃，自动进样器进样体积为1~10 µl，色谱柱为：反相c18色谱柱，优选altantis t3, 4.6×150mm 3µm色谱柱，柱温：30 ℃，流速：0.45 ml/min，流动相为流动性a（磷酸盐缓冲液）和流动性b(色谱纯乙腈)，采用梯度洗脱程序，0～20min，v(b)为0到15%；通过对流动相酸度值的控制，使轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯（dota- mono-nhs ester）在色谱柱中保留时间适中，不至过早出峰；即保留时间~10 min的色谱峰采集到了轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯（dota- mono-nhs ester）的主成份。
7、所述的液相色谱测定时采用的色谱仪为安捷伦 1260色谱仪，该色谱仪采用dad检测器。
8、本专利技术具有以下有益效果：本专利技术方法操作简便、快速、准确，稳定性好，适用于一种轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯（dota- mono-nhs ester）的定性分析和定量检测，本专利技术在研究中发现，轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯（dota- mono-nhsester）的样品在异丙醇溶液中稳定，室温放置24小时后再次进行hplc分析，纯度未见明显变化；而用甲醇配样时发生甲酯化，用乙腈配样基本不溶解。
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1. 一种轮环藤宁四乙酸单N-羟基琥珀酰亚胺酯高效液相色谱测定方法, 其特征是：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种轮环藤宁四乙酸单N-羟基琥珀酰亚胺酯高效液相色谱测定方法，其特征是：所述的高效液相色谱测定时采用安捷伦 1260 液相色谱仪，该色谱仪采用DAD为检测器。
3.根据权利要求1所述的一种轮环藤宁四乙酸单N-羟基琥珀酰亚胺酯高效液相色谱测定方法，其特征是：所述反相C18色谱柱为Altantis T3, 4.6×150mm 3µm色谱柱。
【技术特征摘要】
1. 一种轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯高效液相色谱测定方法, 其特征是：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种轮环藤宁四乙酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯高效液相色谱测定方法，其特征是：所述的高效液相色谱测定时采用安捷伦 1...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，黄磊，袁伟芳，
申请(专利权)人：康化上海新药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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