【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含编码乳头瘤病毒蛋白e1、e6和e7的核酸序列或由编码乳头瘤病毒蛋白e1、e6和e7的核酸序列组成的核酸；其中所述核酸分子编码单个多聚蛋白。
技术介绍
1、在本说明书中，引用了包括专利申请和制造商手册在内的许多文献。这些文献的公开内容虽然不被认为与本专利技术的可专利性相关，但其全部内容通过引用并入本文。更具体地，所有参考文献通过引用并入，其程度如同每个单独的文献被具体地和单独地指示通过引用并入。
2、尽管存在高效的预防性疫苗和筛查宫颈病变的可能性，但2020年全球仍有超过34万例宫颈癌相关死亡与人乳头瘤病毒(hpv)感染有关(h.宋等，《2020年全球癌症统计:全球185个国家36种癌症的发病率和死亡率估计》，ca:临床医生癌症杂志，71(3)，209-249,2001)。
3、超过85％的病例发生在中低收入国家(haghshenas，m.宫颈癌患者中高危人乳头瘤病毒的患病率和类型分布：一项基于人群的研究。感染.剂.癌症8，20，2013)。目前，有三种批准的预防性疫苗提供针对疫苗靶向的hpv类型的接近完全的保护，但疫苗摄取是不完全的(brotherton，j.m.l.，zuber，p.l.f.&bloem，p.j.n.通过疫苗接种进行hpv的一级预防：当前全球状况的更新.《现代妇产科学报告》2016年第5期，210-224)。此外，这些疫苗并不能消除已经感染的细胞，因为它们针对的是主要的外壳蛋白l1，而这种蛋白在感染的基底层和宫颈癌细胞中并不表达(lehtinen,m.等。hpv
4、虽然大多数hpv感染在几个月内会自发清除，但有些会持续数年(ho,g.y.,bierman,r.,beardsley,l.,chang,c.j.&burk,r.d.年轻女性宫颈阴道乳头状瘤病毒感染的自然史。新英格兰医学杂志。338,423–428,1998)这些可以进展为低度鳞状上皮内病变(lsil)，其可以进一步进展为高度鳞状上皮内病变(hsil)和宫颈癌。病毒蛋白的表达模式在sil进展过程中发生变化：在lsil中，主要表达早期蛋白e1/e2，而在hsil和转化细胞中，e6/e7高表达，e2低表达或不表达(xue,y.等人。hpv16 e2是病毒感染的即时早期标志，先于宫颈癌前体结构中e7的表达。癌症研究。70,5316–5325,2010；chang,l.,he,x.,yu,g.&wu,y.hpv 16病毒载量和e2/e6比率对中国妇女宫颈癌风险预测的有效性。j.med.virol.85,646–654,2013)。
5、然而，在许多sil病例中，由于cd4+和cd8+t细胞浸润而发生自然消退(hibma,m.h.在感染持续和消退期间对乳头瘤病毒的免疫反应。《开放病毒学杂志》2012年第6期)研究表明，cd4+t细胞在病变消退中起主要作用，在lsil的基质中发现cd4:cd8比率增加(monnier-benoit,s.等人。cd4+和cd8+t细胞亚群在高危人乳头瘤病毒相关的子宫颈癌前病变和恶性病变中的免疫组化分析。《妇科肿瘤学》102，22–31,2006)遗传学研究表明，慢性感染和癌症的耐药和易感基因座聚集在mhc ii区域。此外，hpv 16+宫颈癌患者对e2和e6的记忆性cd4+t辅助细胞应答受损，这强调了t细胞应答在预防进展和清除病变中的重要作用(brotherton等人，2016年；lehtinen等人，2012年；hildesheim等人，2007年；schiller等人，2012年；hung等人，2008年；ho等人，1998年；xue等人，2010年；chang等人，2013年；hibma，2012年；monnier-benoit等人，2006年；de jong,a.等。人乳头瘤病毒16型阳性宫颈癌与cd4+t细胞对早期抗原e2和e6的免疫受损有关。癌症研究64,5449lp-5455,2004；woo,y.l.等人。关于低级别鳞状上皮内病变自然进程和hpv16 e2、e6和e7特异性t细胞反应存在的前瞻性研究。《国际癌症杂志》126，133-141，2010；ragonnaud,e.,pedersen,a.g.&holst,p.j.腺病毒载体编码祖先抗原或多价乳头瘤病毒抗原免疫接种后的t细胞反应广度。scand.j.免疫学报，85,182-190,2017；dillon,s.等人.子宫颈异型增生的消退与对人乳头瘤病毒16型e2蛋白的t细胞增殖反应相关。《j.gen.virol.》88，803-813，2007)另据报道，暴露于hpv的儿童在清除感染后会产生e2特异性t细胞反应(koskimaa,h.m.等人。与母亲患有宫颈上皮内瘤变(cin)和持续hpv阴性的母亲所生的儿童中的人乳头瘤病毒16特异性细胞介导免疫。《j.transl.med.》13,1-11,2015)然而，目前对治疗性hpv疫苗的研究主要集中在疾病的hsil和癌症阶段，并针对致癌病毒蛋白e6和e7(hung等人，2008)。然而，针对癌症发生前的感染可能有利于减少与癌症治疗相关的发病率和痛苦，并且可能更容易实现。因此，为了靶向恶性前期感染，应将其他早期蛋白质作为抗原包括在内。
6、目前还没有合适的动物模型来研究临床前环境中的持续性hpv感染，但猴束状瘤病毒3型(mfpv3)与hpv16具有密切的系统发育和表型关系(ragonnaud等人,2017；chen,z.等人.非人类灵长类动物乳头状瘤病毒与人类同源体的进化历史和生态适应性相似。《front.microbiol.》10，2093，2019)这种病毒的自然发生的感染与繁殖雌性食蟹猴(macaca fascicularis)的宫颈中的长期持续性和至少lsil样病变相关，使其成为理想的非人灵长类(nhp)动物模型(chen,z.等人。猕猴(macaca fascicularis)乳头状瘤病毒(mfpvs)alpha12型的基因组多样性和种间宿主感染。《病毒学》393,304-310,2009；wood,c.e.,chen,z.,cline,j.m.,miller,b.e.&burk,r.d.对雌性猕猴患癌型乳本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸，其包含编码乳头瘤病毒蛋白E1、E6和E7的核酸序列或由编码乳头瘤病毒蛋白E1、E6和E7的核酸序列组成；其中所述核酸分子编码单个多蛋白。
2.根据权利要求1所述的核酸，其进一步包含编码乳头瘤病毒蛋白E2的核酸序列或进一步由编码乳头瘤病毒蛋白E2的核酸序列组成。
3.根据权利要求1或2所述的核酸，其中编码所述蛋白质的所述核酸的顺序是，从5'到3'，
4.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸，其包含编码乳头瘤病毒蛋白E6和/或E7的核酸序列或由编码乳头瘤病毒蛋白E6和/或E7的核酸序列组成，其中所述核酸序列与野生型对应物相比通过点突变和/或缺失而被修饰，其中所述点突变和/或缺失
5.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述乳头瘤病毒是灵长类乳头瘤病毒，优选人乳头瘤病毒(HPV)，例如HPV 16、HPV 18、HPV 45、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV52、HPV 58、HPV 6和HPV 11，更优选HPV 16或HPV 18，或猕猴乳头瘤病毒，优选MfPV 3。
6.根据权利要求4或
7.根据权利要求6所述的核酸，其中所述核酸还包含编码HPV 16 E7中的D21X5和C58X6、HPV 18 E7中的D24X5和C65X6以及MfPV 3 E7中的D21X5和C62X6的一个或两个突变，其中X5和X6独立地是与它们取代的相应氨基酸不同的蛋白原性氨基酸。
8.权利要求6或7的核酸，其中
9.根据权利要求1至8中任一项所述的核酸，其中所述多聚蛋白中Cys残基的总数是偶数。
10.根据权利要求9所述的核酸，其中如果所述数目不是偶数，
11.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述核酸还包含至少一个编码遗传佐剂、优选T细胞佐剂MHC-II相关不变链的核酸序列。
12.根据权利要求11的核酸，其中所述不变链
13.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述核酸是
14.根据权利要求13(i)所述的核酸，其中所述核酸包含，包括Tet算子的未翻译的5’末端。
15.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述核酸包含至少一种编码自切割肽的核酸序列，其中所述核酸序列编码自切割肽
16.根据前述权利要求中任一项的核酸，其中相邻核酸序列在一个、多个或所有情况下通过编码长度为10个或更少氨基酸(如2、3、4或5个氨基酸)的柔性接头的序列连接，其中GS和GCS是优选的接头。
17.一种病毒载体，其包含前述权利要求中任一项所述的核酸。
18.根据权利要求17所述的病毒载体，其中所述载体是DNA病毒载体，优选
19.一种多聚蛋白，其由前述权利要求中任一项所述的核酸或载体或由其衍生的切割产物编码。
20.一种药物组合物，优选疫苗，其包含或由以下组成：
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述载体、所述核酸、所述多聚蛋白或所述细胞是唯一的药物活性剂。
22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含两种或多种药物活性剂，其中第二种药物活性剂选自
23.根据权利要求22(ii)所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含两种药学活性剂，所述两种药学活性剂是
24.根据前述权利要求中任一项所述的核酸、载体、多聚蛋白或细胞，其用于医学。
25.根据权利要求20所述的疫苗，其中所述疫苗是治疗性疫苗。
26.根据前述权利要求中任一项的核酸、载体、多聚蛋白、细胞或疫苗，其用于治疗或预防乳头状瘤病毒感染、低级鳞状上皮内病变(LSIL)、高级鳞状上皮内损伤(HSIL)、鼻息肉病或乳头状瘤毒体相关的恶性病症如宫颈癌症，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)和口咽鳞状细胞瘤(OPSCC)。
27.一种刺激和/或扩增T细胞的体外或离体方法，所述方法包括使T细胞与前述权利要求中任一项所述的核酸、载体或多聚蛋白体外或离体接触。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种核酸，其包含编码乳头瘤病毒蛋白e1、e6和e7的核酸序列或由编码乳头瘤病毒蛋白e1、e6和e7的核酸序列组成；其中所述核酸分子编码单个多蛋白。
2.根据权利要求1所述的核酸，其进一步包含编码乳头瘤病毒蛋白e2的核酸序列或进一步由编码乳头瘤病毒蛋白e2的核酸序列组成。
3.根据权利要求1或2所述的核酸，其中编码所述蛋白质的所述核酸的顺序是，从5'到3'，
4.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸，其包含编码乳头瘤病毒蛋白e6和/或e7的核酸序列或由编码乳头瘤病毒蛋白e6和/或e7的核酸序列组成，其中所述核酸序列与野生型对应物相比通过点突变和/或缺失而被修饰，其中所述点突变和/或缺失
5.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述乳头瘤病毒是灵长类乳头瘤病毒，优选人乳头瘤病毒(hpv)，例如hpv 16、hpv 18、hpv 45、hpv 31、hpv 33、hpv 35、hpv52、hpv 58、hpv 6和hpv 11，更优选hpv 16或hpv 18，或猕猴乳头瘤病毒，优选mfpv 3。
6.根据权利要求4或5所述的核酸，其中与野生型相比，在所编码的蛋白质中仅存在以下修饰：
7.根据权利要求6所述的核酸，其中所述核酸还包含编码hpv 16 e7中的d21x5和c58x6、hpv 18 e7中的d24x5和c65x6以及mfpv 3 e7中的d21x5和c62x6的一个或两个突变，其中x5和x6独立地是与它们取代的相应氨基酸不同的蛋白原性氨基酸。
8.权利要求6或7的核酸，其中
9.根据权利要求1至8中任一项所述的核酸，其中所述多聚蛋白中cys残基的总数是偶数。
10.根据权利要求9所述的核酸，其中如果所述数目不是偶数，
11.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述核酸还包含至少一个编码遗传佐剂、优选t细胞佐剂mhc-ii相关不变链的核酸序列。
12.根据权利要求11的核酸，其中所述不变链
1...
【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯蒂安·蒂里翁，科杜拉·珀特尔，亚历山大·卡拉斯，沃尔克·桑迪格，英格·乔丹，彼得·乔纳斯·霍斯特，迪特·拉贝克·布伊勒森，拉夫·瓦格纳，帕特里克·奈克曼，贝内迪克·阿斯巴赫，
申请(专利权)人：西瑞恩生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。