【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物发酵领域，涉及一种卷曲乳杆菌的食品级培养基及其应用。
技术介绍
1、卷曲乳杆菌(lactobacillus crispatus)被公认为阴道正常菌群中的重要成员，在维持阴道微生态平衡、抵抗阴道感染发挥着关键作用。在健康育龄妇女阴道中，卷曲乳杆菌是维护阴道菌群平衡的主要菌属。卷曲乳杆菌可产乳酸和过氧化氢，可有效降低阴道加德纳菌、白色念珠菌等致病菌的生长，降低其对阴道上皮细胞的粘附，也能降低hiv感染和性传播疾病的风险，是一种理想的生殖道益生菌。
2、卷曲乳杆菌主要发酵方式以传统的静置发酵为主，得到的发酵液中菌体密度较低，活菌数在108-109cfu/ml左右，为了得到更高的活菌数，需要增大生物反应器的体积或增加发酵批次，因此提高了生产成本，延长了生产周期。
3、卷曲乳杆菌目前难以大规模实现高密度发酵，主要原因是发酵培养基及其发酵方法。因此，选择廉价的食品级原料，优化培养基配方，开发一种合适的卷曲乳杆菌发酵方法，提高发酵液中的活菌数是本领域的研究重点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种卷曲乳杆菌的食品级培养基。
2、本专利技术的第二个目的是提供一种卷曲乳杆菌的食品级培养基的应用。
3、本专利技术的技术方案概述如下：
4、一种卷曲乳杆菌的食品级培养基，由下述食品级组分组成：葡萄糖3-30g/l、大豆蛋白胨2-20g/l、牛肉膏2-20g/l、酵母浸粉2.5-25g/l、无水乙
5、上述食品级培养基，优选地，由下述食品级组分组成：葡萄糖5-15g/l、大豆蛋白胨5-10g/l、牛肉膏5-15g/l、酵母浸粉5-15g/l、无水乙酸钠2-8g/l、磷酸氢二钾1-3g/l、硫酸镁0.5g-1g/l、硫酸锰0.05-0.3g/l、半胱氨酸盐酸盐0.1-0.5g/l、生长因子2-5g/l，余量是水。
6、优选地，生长因子为n-乙酰-d-半乳糖胺，海藻糖，山梨糖，甜菜碱，菊糖和n-乙酰-d-氨基葡萄糖中的至少一种。
7、上述一种卷曲乳杆菌的食品级培养基的应用，包括如下步骤：
8、(1)卷曲乳杆菌菌种活化，将-80℃保存的卷曲乳杆菌在mrs固体平板上划线，37℃，过夜静置培养；
9、(2)一级种子制备，挑取步骤(1)获得的单菌落，接种于含1ml的上述一种卷曲乳杆菌的食品级培养基的ep管中，37℃，过夜静置培养，得一级种子；
10、(3)二级种子制备，将1ml的一级种子转接到200ml上述一种卷曲乳杆菌的食品级培养基中，37℃，过夜静置培养，得二级种子；
11、(4)将上述一种卷曲乳杆菌的食品级培养基，倒入发酵罐中，灭菌；水循环冷却，并通入氮气0.1-3l/min；直至冷却至37±2℃；
12、(5)在氮气保护下，将所述二级种子按3％-10％的接种量用火焰接种法，接种到发酵罐中；(6)维持发酵液ph值为5.5-6.0；在发酵4-6h时，流加补料培养基，补料速率20-30ml/h，
13、补料10-12h；在温度37-39℃、转速50-100rpm条件下，保持正压发酵18-22小时；终止发酵，得到卷曲乳杆菌。
14、优选地，补料培养基由下述食品级组分组成：葡萄糖50-350g/l、大豆蛋白胨20-200g/l、酵母浸粉20-200g/l、生长因子5-50g/l，余量是水。
15、较好地，补料培养基由下述食品级组分组成：葡萄糖100-200g/l、大豆蛋白胨50-100g/l、酵母浸粉50-100g/l、生长因子10-20g/l，余量是水。
16、生长因子优选n-乙酰-d-半乳糖胺，海藻糖，山梨糖，甜菜碱，菊糖和n-乙酰-d-氨基葡萄糖中的至少三种。
17、本专利技术的优点：
18、本专利技术的培养基采用食品级原料，降低了生产成本，并选择了添加多种生长因子，提高了活菌数，并基于发酵罐采用补料发酵的方式，生产出活菌数不低于1010cfu/ml，提高了生产效率。菌体密度且全部原料满足《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(gb2760)，故本方法适用于食品级卷曲乳杆菌的工业化生产。
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1.一种卷曲乳杆菌的食品级培养基，其特征是由下述食品级组分组成：葡萄糖3-30g/L、大豆蛋白胨2-20g/L、牛肉膏2-20g/L、酵母浸粉2.5-25g/L、无水乙酸钠1-10g/L、磷酸氢二钾0.5-3g/L、硫酸镁0.1-1g/L、硫酸锰0.05-0.5g/L、半胱氨酸盐酸盐0.05-0.7g/L、生长因子1-10g/L，余量是水。
2.根据权利要求1所述食品级培养基，其特征是由下述食品级组分组成：葡萄糖5-15g/L、大豆蛋白胨5-10g/L、牛肉膏5-15g/L、酵母浸粉5-15g/L、无水乙酸钠2-8g/L、磷酸氢二钾1-3g/L、硫酸镁0.5g-1g/L、硫酸锰0.05-0.3g/L、半胱氨酸盐酸盐0.1-0.5g/L、生长因子2-5g/L，余量是水。
3.根据权利要求1或2所述食品级培养基，其特征在于所述的生长因子为N-乙酰-D-半乳糖胺，海藻糖，山梨糖，甜菜碱，菊糖和N-乙酰-D-氨基葡萄糖中的至少一种。
4.权利要求1-3之一的一种卷曲乳杆菌的食品级培养基的应用，其特征在于包括如下步骤：(1)卷曲乳杆菌菌种活化，将-80℃
5.根据权利要求4所述的应用，其特征是所述补料培养基由下述食品级组分组成：葡萄糖50-350g/L、大豆蛋白胨20-200g/L、酵母浸粉20-200g/L、生长因子5-50g/L，余量是水。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征是所述补料培养基由下述食品级组分组成：葡萄糖100-200g/L、大豆蛋白胨50-100g/L、酵母浸粉50-100g/L、生长因子10-20g/L，余量是水。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征是所述生长因子为N-乙酰-D-半乳糖胺，海藻糖，山梨糖，甜菜碱，菊糖和N-乙酰-D-氨基葡萄糖中的至少三种。
...【技术特征摘要】
1.一种卷曲乳杆菌的食品级培养基，其特征是由下述食品级组分组成：葡萄糖3-30g/l、大豆蛋白胨2-20g/l、牛肉膏2-20g/l、酵母浸粉2.5-25g/l、无水乙酸钠1-10g/l、磷酸氢二钾0.5-3g/l、硫酸镁0.1-1g/l、硫酸锰0.05-0.5g/l、半胱氨酸盐酸盐0.05-0.7g/l、生长因子1-10g/l，余量是水。
2.根据权利要求1所述食品级培养基，其特征是由下述食品级组分组成：葡萄糖5-15g/l、大豆蛋白胨5-10g/l、牛肉膏5-15g/l、酵母浸粉5-15g/l、无水乙酸钠2-8g/l、磷酸氢二钾1-3g/l、硫酸镁0.5g-1g/l、硫酸锰0.05-0.3g/l、半胱氨酸盐酸盐0.1-0.5g/l、生长因子2-5g/l，余量是水。
3.根据权利要求1或2所述食品级培养基，其特征在于所述的生长因子为n-乙酰-d-半乳糖胺，海藻糖，山梨糖，甜菜碱，菊...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔建军，吴昊，刘柯，易德伟，王晓娜，牛宇琴，钱永清，刘江波，
申请(专利权)人：天津大学浙江研究院绍兴，
类型：发明
国别省市：
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