【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种构建卵巢癌类器官的培养液及构建方法。
技术介绍
1、卵巢癌是严重威胁女性生命健康的恶性肿瘤，死亡率居女性恶性肿瘤首位。早期诊断的缺乏以及术后化疗效果差等原因，导致过去几十年卵巢癌患者的整体生存率提升有限。寻找与开发新的治疗方案需要新型高通量药物筛选疾病模型的创新，类器官是一种全新的药物筛选和机制研究的疾病模型。目前现有的卵巢癌类器官模型构建方法，(1)因培养基需要使用高浓度的noggin和r-spondin1这两种蛋白因子，导致培养基昂贵，成本高；(2)因卵巢癌异质性强导致卵巢癌类器官构建成功率较低，一般为40-50％左右。
技术实现思路
1、针对现在卵巢癌类器官领域，培养基昂贵导致类器官构建成本高，以及因卵巢癌异质性强导致卵巢癌类器官构建成功率较低的技术问题，本专利技术提出一种构建卵巢癌类器官的培养液及构建方法。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、一种构建卵巢癌类器官的培养液，所述培养液为高级dmem/f12培养基，其组成成分包括：
4、1％青链霉素；
5、4mmol/l谷氨酰胺；
6、1％4-羟乙基哌嗪乙磺酸；
7、8～15ng/ml表皮生长因子；
8、1mmol/l烟酰胺；
9、8～10μmol/ly27632；
10、5～15ng/ml骨形态发生蛋白2；
11、0.4～0.8μmol/l sb43154
12、添加剂。
13、优选地，所述添加剂包括：1×b27 gibco公司，货号17504-044；1×n2gibco公司，货号17502-048。
14、一种构建卵巢癌类器官的构建方法，所述构建方法包括下述步骤：
15、s1、取黄豆粒体积大小的卵巢癌新鲜组织样本放入培养皿用pbs溶液洗涤2-3次，然后将洗涤后的组织样本研磨至匀浆状；
16、s2、往匀浆状组织中加入培养液a，然后加入胶原酶进行第一次消化；
17、s3、消化10～20min后，加入培养液a终止消化；然后进行离心、使用过滤膜过滤、洗涤处理；
18、s4、将过滤膜上未过滤的组织块收集起来，继续加入胶原酶，37℃下进行第二次消化；
19、s5、消化10～20min后，加入培养液a终止消化；然后进行离心、使用过滤膜过滤、洗涤处理；
20、s6、使用移液枪将两次所得细胞合并，加入50～100μl培养液a吹打混匀，镜下观察，根据细胞密度，加入50-100μl基质胶，混匀，加入24孔板中，每个孔20～50μl，37℃下凝固20min。
21、s7、向每个孔中加入400μl培养液b，然后放入培养箱中进行培养即可得到卵巢癌类器官。
22、优选地，所述培养液a的组成成分包括：1％青链霉素，4mmol/l谷氨酰胺，1％4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
23、优选地，所述培养液b的组成成分包括：1％青链霉素，4mmol/l谷氨酰胺，1％4-羟乙基哌嗪乙磺酸，8～15ng/ml表皮生长因子，1×b27(gibco公司，货号17504-044)，1mmol/l烟酰胺，8～12μmol/ly27632(cas:129830-38-2)，1×n2(gibco公司，货号17502-048)，5～15ng/ml骨形态发生蛋白2，0.4～0.8μmol/lsb431542(cas:301836-41-9)。
24、优选地，所述pbs溶液的浓度为：137m mol/l氯化钠，2.7m mol/l氯化钾，10m mol/l磷酸二氢钠，2m mol/l磷酸二氢钾。
25、优选地，步骤s2中，胶原酶的浓度为2.5mg/ml，所述匀浆状组织与胶原酶的质量比为1:5。
26、优选地，步骤s3、s5中，过滤膜为100μm过滤膜；离心条件为转速为1000rpm，温度为4℃，离心时间为2～5min。
27、优选地，步骤s3、s5中，洗涤采用pbs溶液进行洗涤。
28、一种卵巢癌类器官能够通过上述所述的构建方法进行构建。
29、本专利技术的有益效果：
30、1、本方法采用两次消化，每次消化时间较传统消化时间缩短，降低了细胞由于过度消化导致的死亡，大大提高了卵巢癌类器官构建的成功率，成功率可达80％。
31、2、培养液b配方经过了反复试验优化，与传统的卵巢癌类器官培养基配方成分差别较大，最大的优势在于配方中不再使用noggin和r-spondin1这两个昂贵的蛋白细胞因子，大大降低了实验成本。
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1.一种构建卵巢癌类器官的培养液，其特征在于，所述培养液为DMEM/F12培养基，其组成成分包括：
2.根据权利要求1所述的一种构建卵巢癌类器官的培养液，其特征在于，所述添加剂包括：1×B27 Gibco公司，货号17504-044；1×N2 Gibco公司，货号17502-048。
3.一种构建卵巢癌类器官的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括下述步骤：
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述培养液A的组成成分包括：1％青链霉素，4mmol/L谷氨酰胺，1％4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述培养液B的组成成分包括：1％青链霉素，4mmol/L谷氨酰胺，1％4-羟乙基哌嗪乙磺酸，8～15ng/mL表皮生长因子，1×B27Gibco公司，货号17504-044，1mmol/L烟酰胺，8～12μmol/LY27632，1×N2 Gibco公司，货号17502-048，5～15ng/mL骨形态发生蛋白2，0.4～0.8μmol/LSB431542。
6.根据权利要求3所述的
7.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤S2中，胶原酶的浓度为2～3mg/ml，所述匀浆状组织与胶原酶的质量比为1:4～1:7。
8.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤S3、S5中，过滤膜为100μm过滤膜；离心条件为转速为1000rpm，温度为4℃，离心时间为2～5min。
9.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤S3、S5中，洗涤采用PBS溶液进行洗涤。
10.如权利要求1-2任一所述的一种培养液在构建卵巢癌类器官中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种构建卵巢癌类器官的培养液，其特征在于，所述培养液为dmem/f12培养基，其组成成分包括：
2.根据权利要求1所述的一种构建卵巢癌类器官的培养液，其特征在于，所述添加剂包括：1×b27 gibco公司，货号17504-044；1×n2 gibco公司，货号17502-048。
3.一种构建卵巢癌类器官的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括下述步骤：
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述培养液a的组成成分包括：1％青链霉素，4mmol/l谷氨酰胺，1％4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述培养液b的组成成分包括：1％青链霉素，4mmol/l谷氨酰胺，1％4-羟乙基哌嗪乙磺酸，8～15ng/ml表皮生长因子，1×b27gibco公司，货号17504-044，1mmol/l烟酰胺，8～12μmol/ly27632，1×n2...
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