【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物靶点检测领域，尤其涉及流式检测与药物靶点相结合并开展精准医疗的领域。
技术介绍
1、正常情况下，免疫细胞可以清除肿瘤微环境中的肿瘤细胞，但肿瘤患者的免疫系统受到抑制，使得免疫细胞不能正常杀伤肿瘤细胞，这种情况被称为免疫逃逸。免疫逃逸是临床肿瘤进展迅速的原因之一。因此，为了更好地治疗肿瘤患者，恢复其肿瘤-免疫系统，免疫治疗被认为是一种很有前景的治疗方式。目前多个肿瘤免疫治疗药物已经获得美国fda(food and drug administration,fda)批准临床应用。免疫药物主要是一些免疫检查点的抑制剂。
2、pd-1是t细胞上表达的主要抑制性受体，其受体抑制剂，在介导抗肿瘤免疫疗效中发挥重要作用。pd-1受体抑制剂中，帕博丽珠(k药)是一种igg4同种型抗体，可阻断癌细胞的保护机制，从而使免疫系统能够杀伤肿瘤细胞。它靶向淋巴细胞的程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)受体。
3、帕博利珠单抗是可与t细胞表达的pd-1受体结合的单克隆抗体，可阻断pd-1与pd-l1的相互作用，解除pd-1通路介导的免疫应答抑制，包括抗肿瘤免疫应答。
4、而对药物靶点pd-1/pd-l1的相关检测，成为了临床免疫治疗的关键。目前常见的药物靶点的检测方法主要有：免疫组化和二代测序。但这些检测方法的结果获取周期较久，且成本较高，对临床患者来说，在较短时间内获取关于药物靶点的检测结果，可以使得临床医生尽快为肿瘤患者提供治疗方案，提高患者的治疗效果，改善其预后。目前需要一种高效快速的检测方法对以上药物
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于解决现有技术中检测方法结果获取周期久，且成本较高的问题。本专利技术提供了一种检测药物靶点表达水平的方法，所述方法包括：
2、外周血获取步骤，获取临床肿瘤患者的外周血；
3、提取步骤，提取肿瘤患者外周血的pbmc；
4、流式检测步骤，采用流式检测，检测pbmc中药物靶点表达水平。
5、所述方法还包括：获取各癌种肿瘤患者pbmc中药物靶点表达水平，并收集整理，获得表达水平平均值；所述表达水平平均值用于判断临床肿瘤患者的药物靶点是否呈现高表达。
6、所述检测的抗原有：cd45、cd3、cd4、cd8、pd-1、ctla-4、epcam、pd-l1。
7、所述提取步骤包括：
8、使用edta抗凝管采集肿瘤患者外周血；
9、取一支干净的第一离心管，将外周血和稀释液进行稀释，将淋巴分离液加入到第二离心管中；离心，降速设置成只有1-2成的制动；
10、离心结束后，离心管内分成三层，吸取中间的白膜层至第三离心管内；
11、在所述第三离心管中加入pbs，离心后去掉上清，；
12、离心，离心后弃上清，加入pbs重悬，取10ul计数,明确获得的细胞量，得到pbmc。
13、所述提取步骤中如有红细胞沉淀，加入适量的红细胞裂解液，冰上静置裂解后加入pbs终止裂解。
14、所述流式检测步骤包括：
15、将提取好的细胞悬液离心，离心后弃上清，留下细胞沉淀；
16、1：100稀释相应抗体并吹打混匀；
17、避光4℃孵育，孵育结束后，离心，加入pbs清洗，再次离心；
18、离心后弃上清，加入dapi染料；
19、离心，弃上清，加入含2％fbs的pbs重悬细胞并上机检测，得到pbmc中药物靶点表达水平。
20、本专利技术的方法着眼于肿瘤免疫微环境，从寻找肿瘤患者的药物靶点出发，将免疫治疗的优势最大化发挥，为肿瘤患者带来更多希望；根据流式检测结果，为患者提供个性化强的临床用药指导；流式检测简易快速准确，可以及时出具结果；流式检测平台与免疫治疗的有效结合，缩短患者相关诊断资料的获取周期，为临床医生用药方案的出具提供依据。
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1.一种检测药物靶点的表达水平的方法，其特征在于与临床相结合，为患者提供个性化治疗方案。所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的一种检测药物靶点的表达水平的方法，其特征在于，所述方法还包括：获取各癌种肿瘤患者PBMC中药物靶点表达水平，并收集整理，获得表达水平平均值；所述表达水平平均值用于判断临床肿瘤患者的药物靶点是否呈现高表达。
3.根据权利要求1所述的一种检测药物靶点表达水平的方法，其特征在于，所述流式检测的抗原包括：CD45、CD3、CD4、CD8、PD-1、CTLA-
4.根据权利要求1所述的一种检测药物靶点表达水平的方法，其特征在于，所述提取步骤包括：
5.根据权利要求4所述的一种检测药物靶点表达水平的方法，其特征在于，所述提取步骤中如有红细胞沉淀，加入适量的红细胞裂解液，冰上静置裂解后加入PBS终止裂解。
6.根据权利要求1所述的一种检测药物靶点表达水平的方法，其特征在于，所述流式检测步骤包括：
【技术特征摘要】
1.一种检测药物靶点的表达水平的方法，其特征在于与临床相结合，为患者提供个性化治疗方案。所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的一种检测药物靶点的表达水平的方法，其特征在于，所述方法还包括：获取各癌种肿瘤患者pbmc中药物靶点表达水平，并收集整理，获得表达水平平均值；所述表达水平平均值用于判断临床肿瘤患者的药物靶点是否呈现高表达。
3.根据权利要求1所述的一种检测药物靶点表达水平的方法，其特征在于，所述流式检测的...
【专利技术属性】
技术研发人员：牛耿明，何爱娜，魏桂英，杨悦，张雪，
申请(专利权)人：上海万何圆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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