【技术实现步骤摘要】
本申请属于关节软骨修复，具体涉及一种用于软骨修复的组合物及其制备方法以及软骨细胞凋亡囊泡在制备软骨修复药物中的用途。
技术介绍
1、软骨是人或动物体内骨骼系统的重要组成部分，由创伤、感染或先天性疾病等病因而导致的软骨缺损日益增多。由于软骨由于无血液供应、神经支配和淋巴循环的特殊结构，其损伤后难以自我修复，发生退行性关节变化，甚至出现骨性关节炎等并发症。受损关节软骨的再生仍然是软骨修复的重要研究方向。
2、临床上，对软骨损伤的疗法，一把采用微骨折手术、自体软骨组织移植或自体软骨细胞扩增。但上述疗法可能带来供体部位的二次创伤，或者，使再生软骨发生肥大和纤维化，机械性能较差，难以满足临床要求以及患者愈后的运动要求。
技术实现思路
1、本申请实施例提供一种用于软骨修复的组合物及其制备方法以及软骨细胞凋亡囊泡在制备软骨修复药物中的用途，旨在提供一种新的组合物修复再生损伤的软骨。
2、第一方面，本申请实施例提供一种用于软骨修复的组合物，包括：
3、含治疗有效量的来源于软骨细胞的凋亡囊泡；和
4、一种或多种可药用的载体。
5、根据本申请一个方面的实施例，载体包括生物相容性材料、去离子水或无菌生理盐水中的一种或几种。
6、根据本申请一个方面的实施例，生物相容性材料包括经交联的明胶、经交联的透明质酸、经接枝的藻酸盐、经改性的聚乳酸-聚乙二醇共聚物、经交联的脱细胞外基质中的一种或几种。
7、根据本申请一个方面的实施例，
8、根据本申请一个方面的实施例，凋亡囊泡满足下列条件中的至少一项：
9、1)凋亡囊泡的直径为420-580nm，可选为504nm；
10、2)所述凋亡囊泡包含ddr2蛋白、lnpk蛋白、trps1蛋白、pbxip1蛋白中的一种或几种；
11、3)所述凋亡囊泡的包含rno-mir-125b-5p核酸分子、rno-mir-16-5p核酸分子、rno-let-7a-5p核酸分子、rno-let-7i-5p核酸分子中的一种或几种。
12、第二方面，本申请实施例提供了一种用于软骨修复的组合物的制备方法，方法包括：
13、提供来源于软骨细胞的凋亡囊泡；
14、将凋亡囊泡与一种或多种可药用的载体混合，制得用于软骨修复的组合物。
15、根据本申请一个方面的实施例，提供来源于软骨细胞的凋亡囊泡包括：
16、将鼠来源的膝关节软骨通过胶原酶消化法分离培养，制得软骨细胞；
17、采用诱导剂诱导软骨细胞的凋亡，制得凋亡囊泡。
18、根据本申请一个方面的实施例，方法满足下列条件中的至少一项：
19、1)分离培养的条件包括在含有8％-12％，可选为10％的无外泌体胎牛血清的f-12培养基中；
20、2)诱导剂的浓度为200-550nm，可选为250nm；
21、3)诱导剂包括星形孢菌素、紫外线、低氧环境中的一种或几种；
22、4)诱导的时间为12-48h，可选为12-24h；
23、5)软骨细胞包括第三代软骨细胞，采用诱导剂诱导第三代软骨细胞至细胞凋亡；
24、6)将采用诱导剂诱导软骨细胞的凋亡后所得的上清液通过差速离心，从沉淀中制得凋亡囊泡。
25、第三方面，本申请实施例提供了一种来源于软骨细胞的凋亡囊泡在制备药物中的用途，药物用于治疗和预防软骨损伤类疾病。
26、根据本申请一个方面的实施例，疾病包括关节软骨损伤、骨性关节炎、关节软骨退变中的任意一种。
27、第四方面，本申请实施例提供了一种软骨复合支架，软骨复合支架包括：
28、具有孔隙结构的软骨支架本体，包含可降解医用高分子材料；
29、水凝胶生物墨水，承载于软骨支架本体的孔隙结构中和软骨支架本体的表面，包含：
30、水凝胶基质，包含具有三维网络结构的基质聚合物和溶胀基质聚合物的水；
31、第一方面用于软骨修复的组合物或第二方面任一项制备方法制得的用于软骨修复的组合物，其中，凋亡囊泡被束缚在基质聚合物的三维网络结构中。
32、根据本申请一个方面的实施例，可降解医用高分子材料选自聚己内酯、聚氨酯、聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸-聚己内酯共聚物、聚氨基酸、聚乙醇酸或其组合。
33、根据本申请一个方面的实施例，基质聚合物选自经交联的明胶、经交联的透明质酸、经接枝的藻酸盐或其组合。
34、本申请的技术方案至少具有以下技术效果：
35、本申请实施例的用于软骨修复的组合物中的凋亡囊泡具有多种功能性蛋白和mirnas，通过生物信息学分析发现其参与多种生物学过程，可能调控干细胞的生物学行为以及可能参与软骨再生过程，发现该组合物能够促进大鼠膝关节软骨的修复。且用于软骨修复的组合物中的凋亡囊泡能够在体外被骨髓间充质干细胞吞噬，从而诱导骨髓间充质干细胞转录重编程，使该组合物能够明显地促进骨髓间充质干细胞的增殖、迁移和成软骨分化。
36、另外，软骨复合支架中包含凋亡囊泡能够起到更好地软骨修复效果。
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1.一种用于软骨修复的组合物，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述载体包括生物相容性材料、去离子水或无菌生理盐水中的一种或几种；可选地，生物相容性材料包括经交联的明胶、经交联的透明质酸、经接枝的藻酸盐、经改性的聚乳酸-聚乙二醇共聚物、经交联的脱细胞外基质中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述凋亡囊泡在组合物中的浓度为10-50μg/mL，可选为25μg/mL。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述凋亡囊泡满足下列条件中的至少一项：
5.一种用于软骨修复的组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述提供来源于软骨细胞的凋亡囊泡包括：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法满足下列条件中的至少一项：
8.一种来源于软骨细胞的凋亡囊泡在制备药物中的用途，所述的药物为用于治疗和预防软骨损伤类疾病；可选地，所述疾病包括关节软骨损伤、骨性关节炎、关节软骨退变中的任意一种。
...【技术特征摘要】
1.一种用于软骨修复的组合物，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述载体包括生物相容性材料、去离子水或无菌生理盐水中的一种或几种；可选地，生物相容性材料包括经交联的明胶、经交联的透明质酸、经接枝的藻酸盐、经改性的聚乳酸-聚乙二醇共聚物、经交联的脱细胞外基质中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述凋亡囊泡在组合物中的浓度为10-50μg/ml，可选为25μg/ml。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述凋亡囊泡满足下列条件中的至少一项：
5.一种用于软骨修复的组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
...【专利技术属性】
技术研发人员：郭全义，殷瀚，刘舒云，眭翔，严子能，吴江，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第一医学中心，
类型：发明
国别省市：
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