【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，具体涉及一种工程化干细胞外泌体的制备方法。
技术介绍
1、外泌体是指包含了复杂rna和蛋白质的小膜泡(30-150nm)。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、干细胞等。外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。目前广泛用于护肤领域，发挥抗炎，修复，防止氧化，免疫调节等作用。
2、然而随着市场的发展，天然干细胞外泌体的局限性逐渐显露，天然干细胞外泌体粘附性不足，应用在妆品中首先可能会停留在皮肤表面，不易与皮肤细胞粘附，导致浪费。因此工程化外泌体策略应运而生，但是目前并没有通过对天然干细胞外泌体进行表面改造，增强其与皮肤细胞粘附性的技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种工程化外泌体，通过对天然干细胞外泌体进行表面改造，增强其与皮肤细胞的粘附，增强外泌体本身的抗炎，修复等功效。
2、为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案包括以下步骤：
3、1)外泌体的收获：外泌体选取培养的p5-p10代培养的间充质干细胞，待细胞培养至融合度达到约75％-85％时，加入生理盐水浸泡48h，进行饥饿处理，收取浸泡液，离心，取上清，弃去细胞碎片沉淀，即得外泌体溶液溶液；
4、(2)胆固醇-透明质酸配体的制备:将溶解均匀的胆固
5、(3)外泌体表面改造修饰：将胆固醇-透明质酸配体按0.01％-0.02％的比例加入到外泌体溶液，混匀，采用超声技术，将胆固醇-透明质酸配体装载到外泌体表面，4度条件孵育24h。可充分将胆固醇-透明质酸配体嵌入干细胞外泌体的磷脂双分子层中，对外泌体表面进行改造修饰。形成工程化外泌体。
6、本专利技术的有益效果为：
7、天然干细胞外泌体粘附性不足，应用在妆品中首先可能会停留在皮肤表面，不易与皮肤细胞粘附，导致浪费。工程化外泌体是将胆固醇-透明质酸配体嵌入干细胞外泌体的磷脂双分子层。胆固醇与外泌体膜磷脂双分子层相似相溶，可成功将透明质酸(ha)装载到外泌体的表面。对外泌体表面进行改造。改造后的工程化外泌体表面的透明质酸(ha)可以与皮肤炎症部位的cd44受体结合。使外泌体会迅速进入受损细胞，增强其与皮肤细胞的粘附，发挥外泌体更好的抗炎功效。
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1.一种工程化干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述制备方法包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述外泌体的提取具体包含：
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述胆固醇-透明质酸配体的制备具体包含：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述醇沉工艺具体包含：
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述醇沉的次数为5次。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述冷冻干燥具体包含：
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述外泌体表面改造修饰具体包含：
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述孵育的条件为：在4℃下孵育24h。
【技术特征摘要】
1.一种工程化干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述制备方法包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述外泌体的提取具体包含：
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述胆固醇-透明质酸配体的制备具体包含：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述醇沉工艺具体包含：
【专利技术属性】
技术研发人员：雷凯，李艳鹏，程蕊苹，李雪茹，
申请(专利权)人：山东佰鸿干细胞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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