【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病原检测。具体地，本专利技术涉及用于检测人乳头瘤病毒的crrna、引物、试剂盒及方法，更具体地，本专利技术涉及crrna及其用途、用于hpv16和/或hpv18检测的试剂盒及其用途、以及检测hpv16和/或hpv18的方法。
技术介绍
1、宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一，主要起源于宫颈上皮组织。宫颈癌通常与高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，简称hpv)感染相关。hpv感染在大多数情况下会自行清除，但在一部分感染持续存在的情况下，可能会导致宫颈上皮细胞发生异常，最终发展为宫颈癌。
2、宫颈癌通常具有潜隐性发展过程，早期往往没有明显的症状，因此常常被忽视，直到进展到晚期才会出现症状，如异常阴道出血、性交疼痛等。由于宫颈癌早期发现和治疗的成功率较高，宫颈癌筛查和早期诊断非常重要。目前，宫颈癌的筛查方法主要包括：宫颈细胞学检查和hpv病毒检测等。
3、2020年，世卫组织发布了《加速消除宫颈癌全球战略》，致力于在全球范围消除宫颈癌。为了实现这一目标，各地区需要充分结合疫苗接种和hpv病毒检测筛查，进一步提升hpv病毒的筛查率。
4、因此，亟需开发一种高特异性或高灵敏性的检测hpv病毒的方法。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提供了一种检测hpv16和hpv18的方法，该方法中的crrna可检测hpv16和/或hpv18的l1或e6/
2、本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：
3、hpv病毒种类繁多，目前已发现200余种亚型，根据导致宫颈癌的风险高低可分为高危型、中危型和低危型，其中hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68这13种基因型为高危型。在世界范围内，大约70％的宫颈癌中检测到致癌hpv16/18型。目前的检测方法主要针对hpv病毒l1区域的基因组dna(简称l1 dna)、e6/e7区域的基因组dna(简称e6/e7dna)或者e6/e7区域的mrna。
4、然而l1 dna在基因组整合发生之后通常会丢失，而e6/e7基因会在基因组发生整合之后大量表达。由此可见，以l1基因作检测靶点，会导致部分因hpv基因组整合而造成的漏检；而以e6/e7 mrna作检测靶点，会使得检测窗口延后，不利于hpv感染的早期监控。此外，尽管e6/e7区域在整合前后都存在，但单独将hpv e6检测用于子宫颈癌初筛，其灵敏度较低仅为44.4％，从而影响检测结果。
5、基于此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种crrna。根据本专利技术的实施例，所述crrna包括：核心序列，所述核心序列包括如seq id no:5～8、seq id no:15～20和seqid no:50～51任一项所示的核苷酸序列中的至少之一。本专利技术的crrna可高特异性地与hpv16和/或hpv18的目的片段结合，在crispr/cas12a编辑系统中，该crrna在激活cas12a酶的特异切割活性的同时，也可激发了该cas12a酶的非特异性单链dna切割活性，从而实现了对目的核酸片段的检测。
6、在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了第一方面所述的crrna在制备试剂中的用途，所述试剂用于检测hpv16和/或hpv18。由前可知，上述crrna可高特异性地与hpv16和/或hpv18的目的片段结合。由此，采用上述试剂可激活cas12a酶的特异切割活性的同时，也激发了该cas12a酶的非特异性单链dna切割活性，从而实现了对目的核酸片段的检测。
7、在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了一种试剂盒。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒包括第一方面所述的crrna。由前可知，上述crrna可高特异性地与hpv16和/或hpv18的目的片段结合。由此，采用本专利技术的试剂盒能高效检出hpv16和/或hpv18。
8、在本专利技术的第四方面，本专利技术提出了第三方面所述的试剂盒在制备产品中的用途，所述产品用于检测hpv16和/或hpv18。由前可知，上述试剂盒中的crrna可高特异性地与hpv16和/或hpv18的目的片段结合。由此，采用含有上述试剂盒的产品能高效检出hpv16和/或hpv18。
9、在本专利技术的第五方面，本专利技术提出了一种检测hpv16和/或hpv18的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括第一方面所述的crrna或第三方面所述的试剂盒对待测样本进行检测。本专利技术的方法可有效检测出hpv16和/或hpv18，且具有准确性高、特异性强或灵敏度高等优点。
10、本专利技术所涉及的序列说明详见下表：
11、
12、
13、
14、本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种crRNA，其特征在于，包括核心序列；
2.根据权利要求1所述的crRNA，其特征在于，所述crRNA包括：
3.根据权利要求1和2所述的crRNA，其特征在于，进一步包括发夹结构，
4.权利要求1～3任一项所述的crRNA在制备试剂中的用途，所述试剂用于检测HPV16和/或HPV18。
5.一种试剂盒，其特征在于，包括：
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括如下组分中的至少之一：
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增引物为MIRA扩增引物；
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述Cas12a蛋白选自FnCas12a蛋白、AsCas12a蛋白、LbCas12a蛋白、Lb5Cas12a蛋白、HkCas12a蛋白、OsCas12a蛋白、TsCas12a蛋白、BbCas12a蛋白、BoCas12a蛋白和Lb4Cas12a蛋白中的至少之一；
9.权利要求5～8任一项所述的试剂盒在制备产品中的用途，所述产品用于检测HPV16和/或HPV18。<...
【技术特征摘要】
1.一种crrna，其特征在于，包括核心序列；
2.根据权利要求1所述的crrna，其特征在于，所述crrna包括：
3.根据权利要求1和2所述的crrna，其特征在于，进一步包括发夹结构，
4.权利要求1～3任一项所述的crrna在制备试剂中的用途，所述试剂用于检测hpv16和/或hpv18。
5.一种试剂盒，其特征在于，包括：
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括如下组分中的至少之一：
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增引物为mira扩增引物；
<...【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，赵健博，
申请(专利权)人：深圳华大基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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