【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供用于无血清细胞培养基或低血清细胞培养基的新的细胞培养基和补充剂。也提供相应的方法和用途。当用于组织工程时，例如在角膜细胞和/或皮肤细胞的体外细胞培养期间，新的细胞培养基和补充剂尤其有益。
技术介绍
1、组织工程的领域在过去十年中已经取得了巨大进步并且仍不断发展。现在不仅仅可更精确地控制细胞和其环境，还可组织越来越复杂的活的组织和器官以用于潜在的临床和商业用途。正在探索该领域中的数个商业和临床途径，包括用于疗法或其他工业应用(比如实验室生长皮革)的组织(比如角膜或皮肤替代物)的创建。
2、角膜基质等同物的创建，特别是使用天然组分时，代表了组织工程中的许多挑战。适当的角膜基质替代物需要是生物相容的、机械稳定的和光学透明的，以及能够在组织移植之前和之后抵抗收缩和蛋白水解的降解。近期，已经通过自下而上策略的方式在体外工程化角膜基质组织，使用细胞来生成细胞外基质，以便重建天然角膜的轮廓清晰的3d微结构。
3、皮肤负责几种重要的生理功能并且在伤口愈合中具有极大的临床意义。组织工程的替代物可用于遭受皮肤损伤的患者以支持表皮、真皮或二者的再生。作为用于产品测试的动物模型的替换物，皮肤替代物在化妆品和制药行业也越来越受到关注。最近的在细胞水平疗法(比如，间质干细胞或生长因子递送)到大规模生物制造技术(包括3d打印)的范围的生物医学进展，已经确保独特的策略和新的生物材料的实施，以再现天然皮肤的生物、结构和功能复杂性。另外，使用皮肤组织工程(例如从实验室生长皮革)生成商业收入也越来越受到关注。
4、当
5、需要用于组织工程(包括角膜和皮肤组织的工程化)的改善的细胞培养基和补充剂。
技术实现思路
1、本专利技术基于令人吃惊的发现，即具体的大分子拥挤(mmc)试剂在角膜细胞和/或皮肤细胞的培养期间为有用的补充剂。即使当不使用血清或减少血清时，这些试剂也可令人吃惊地促进细胞增殖。这些试剂可因此有利地用作角膜细胞和/或皮肤细胞培养过程期间的血清的可选的补充剂。它们因此提供新的、有效的、有成本效益的和符合伦理的用于角膜细胞和/或皮肤细胞生产(例如用于组织工程或细胞结构的生长)方式。
2、mmc试剂为具体类的食品级、无毒、非成瘾性、惰性的物质。它们通常作为常见的农业、海洋、发酵和生物燃料生产过程中的副产物生成，使它们成为用于高产率组织工程/细胞制造的便宜细胞培养基的便宜和理想补充剂。mmc试剂也是化学限定的，因此，它们在细胞培养基中作为血清替代物的用途减少了目前观察到的依赖于血清的过程的可变性。这为组织工程或细胞作为工业工具或产品的用途提供了明显的优势。mmc试剂在细胞培养基中的用途代表用于增加组织工程/细胞制造的效率的新的无动物/无异生素方法、可减少(或甚至消除)血清补充的需要的策略，使得产品真正无动物。本专利技术因此解决了该行业中的几种挑战。
3、在一个方面中，本专利技术因此提供用于体外细胞培养的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基，其中该细胞培养基包括基础培养基和选自由下述组成的组中的一种或多种大分子拥挤试剂：peg8、角叉藻聚糖、pvp40、pvp360和peg35；或其组合。
4、适当地，大分子拥挤试剂可为下述的组合：pvp40和pvp360；或peg8和peg35。
5、也提供了用于体外细胞培养的包括基础培养基和一种或多种大分子拥挤试剂的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基的用途，其中：
6、a)细胞为角膜细胞并且大分子拥挤试剂选自由下述组成的组中：peg8、角叉藻聚糖、pvp40、pvp360、peg35、70和400；或其组合；或者
7、b)细胞为皮肤细胞并且大分子拥挤试剂选自由下述组成的组中：peg8、peg35、pvp40、pvp360、70和400；或其组合。
8、也提供了体外无血清细胞培养方法或低血清细胞培养方法，其包括在包括基础培养基和一种或多种大分子拥挤试剂的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基中培养细胞，其中：
9、a)细胞为角膜细胞并且大分子拥挤试剂选自由下述组成的组中：peg8、角叉藻聚糖、pvp40、pvp360、peg35、70和400；或其组合；
10、b)细胞为皮肤细胞并且大分子拥挤试剂选自由下述组成的组中：peg8、peg35、pvp40、pvp360、70和400；或其组合。
11、适当地，细胞可为角膜细胞并且大分子拥挤试剂可为下述的组合：peg8和peg35；70和400；或pvp40和pvp360。
12、适当地，细胞可be皮肤细胞并且大分子拥挤试剂可为下述的组合：peg8和peg35；70和400；或pvp40和pvp360。
13、适当地，基础培养基可为dmem/f12。
14、适当地，细胞培养基可为无血清细胞培养基，任选地其中细胞培养基不含从动物获得的材料。
15、适当地，无血清细胞培养基可为化学限定的细胞培养基。
16、适当地，细胞培养基可进一步包括谷氨酰胺，任选地其中细胞培养基进一步包括抗坏血酸、胰岛素、运铁蛋白、硒和乙醇胺。
17、适当地，细胞培养基可包括大于约1mm，但是小于约10mm的l-丙氨酰-l-谷氨酰胺二肽；和任选地：
18、a)大于约0.1mm，但是小于约10mm的抗坏血酸；和
19、b)大于约1mg/l，但是小于约100mg/l的胰岛素；和
20、c)大于约0.5mg/l，但是小于约10mg/l的运铁蛋白；和
21、d)大于约0.5μg/l，但是小于约10μg/l的硒；和
22、e)大于约0.2mg/l，但是小于约20mg/l的乙醇胺。
23、适当地，细胞培养基可进一步包括青霉素和链霉素。
24、也提供了用于体外无血清细胞培养或低血清细胞培养的细胞培养基补充剂，其包括选自由下述组成的组中的一种或多种大分子拥挤试剂：pvp40、角叉藻聚糖、peg8、pvp360和peg35、70和400；或其组合，其中补充剂进一步包括：胰岛素、运铁蛋白、硒、乙醇胺、抗坏血酸和/或谷氨酰胺。
25、适当地，补充剂可包括：
26、a)胰岛素，其浓度为，当补充剂添加至基础培养基时，胰岛素在所得细胞培养基中的终浓度大于约1mg/l，但是小于约100mg/l；
27、b)运铁蛋白，其浓度为，当补充剂添加至基础培养基时，运铁蛋白在所得细胞培养基中的终浓度大于约0.5mg/l，但是小于约10mg/l；
28、c)硒，其浓度为，当补充剂添加至基础培养基时，硒在所得细胞培养基中的终浓度大于约0.5μg/l，但是小于约10μg/l；
29、d)乙醇胺，其浓度为，当补充剂添加至基础培养基时，乙醇胺在所得细胞培养基中的终浓度大于约0.2mg/l，但是小于约2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.包括基础培养基和一种或多种大分子拥挤试剂的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基用于体外细胞培养以促进细胞增殖的用途，其中：
2.一种用于促进细胞增殖的体外无血清细胞培养方法或低血清细胞培养方法，包括在包括基础培养基和一种或多种大分子拥挤试剂的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基中培养细胞，其中：
3.根据权利要求1或权利要求2所述的用途或方法，其中所述细胞为皮肤细胞并且所述大分子拥挤试剂为下述的组合：PEG8和PEG35；或PVP40和PVP360。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的用途或方法，其中所述细胞为角膜细胞并且所述大分子拥挤试剂为下述的组合：PEG8和PEG35；PVP40和PVP360。
5.一种用于体外细胞培养的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基，其中所述细胞培养基包括基础培养基和选自由下述组成的组中的一种或多种大分子拥挤试剂：PEG8、PVP40、PVP360和PEG35；或其组合。
6.根据权利要求5所述的细胞培养基，其中所述大分子拥挤试剂为下述的组合：PVP40和PVP360；或PEG8和PEG3
7.根据任何前述权利要求所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述基础培养基为DMEM/F12。
8.根据任何前述权利要求所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述细胞培养基为无血清细胞培养基，任选地其中所述细胞培养基不含从动物获得的材料。
9.根据权利要求8所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述无血清细胞培养基为化学限定的细胞培养基。
10.根据任何前述权利要求所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述细胞培养基进一步包括谷氨酰胺，任选地其中所述细胞培养基进一步包括抗坏血酸、胰岛素、运铁蛋白、硒和乙醇胺。
11.根据权利要求10所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述细胞培养基包括大于约1mM，但是小于约10mM的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽；和任选地：
12.根据任何前述权利要求所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述细胞培养基进一步包括青霉素和链霉素。
13.一种用于体外无血清细胞培养或低血清细胞培养的细胞培养基补充剂，包括选自由下述组成的组中的一种或多种大分子拥挤试剂：PVP40、PEG8、PVP360和PEG35；或其组合，其中所述补充剂进一步包括：胰岛素、运铁蛋白、硒、乙醇胺、抗坏血酸和/或谷氨酰胺。
14.根据权利要求13所述的补充剂，包括：
15.根据权利要求14所述的补充剂，包括：
16.根据权利要求13至15中的任一项所述的补充剂，其中所述补充剂为液体溶液或干燥粉末或粒状干燥粉末。
17.根据权利要求16所述的补充剂，其中所述补充剂为50×浓缩液体溶液，并且所述液体溶液包括：0.5g/L的胰岛素、0.27g/L的运铁蛋白、0.35ml/L的硒、0.1g/L的乙醇胺、50mM的抗坏血酸、100mM的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽以及选自由55g/L的PEG8、225g/L的PVP40、100g/L的PEG35和500g/L的PVP360组成的组中的大分子拥挤试剂。
18.一种气密密封容器，含有根据前述权利要求中的任一项所述的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基或者细胞培养基补充剂。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.包括基础培养基和一种或多种大分子拥挤试剂的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基用于体外细胞培养以促进细胞增殖的用途，其中：
2.一种用于促进细胞增殖的体外无血清细胞培养方法或低血清细胞培养方法，包括在包括基础培养基和一种或多种大分子拥挤试剂的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基中培养细胞，其中：
3.根据权利要求1或权利要求2所述的用途或方法，其中所述细胞为皮肤细胞并且所述大分子拥挤试剂为下述的组合：peg8和peg35；或pvp40和pvp360。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的用途或方法，其中所述细胞为角膜细胞并且所述大分子拥挤试剂为下述的组合：peg8和peg35；pvp40和pvp360。
5.一种用于体外细胞培养的无血清细胞培养基或低血清细胞培养基，其中所述细胞培养基包括基础培养基和选自由下述组成的组中的一种或多种大分子拥挤试剂：peg8、pvp40、pvp360和peg35；或其组合。
6.根据权利要求5所述的细胞培养基，其中所述大分子拥挤试剂为下述的组合：pvp40和pvp360；或peg8和peg35。
7.根据任何前述权利要求所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述基础培养基为dmem/f12。
8.根据任何前述权利要求所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述细胞培养基为无血清细胞培养基，任选地其中所述细胞培养基不含从动物获得的材料。
9.根据权利要求8所述的细胞培养基、用途或方法，其中所述无血清细胞培养基为化学限定的细胞培养基。
10.根据任何前述权利要求所述的细胞培养基、用...
【专利技术属性】
技术研发人员：切·约翰·康农，里卡多·戈维亚，
申请(专利权)人：三D细胞生物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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