一种基于邻近标记技术研究smad3蛋白质-蛋白质相互作用的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于邻近标记技术研究smad3蛋白质‑蛋白质相互作用的方法，属于生物技术领域。本发明专利技术在Smad3KO细胞系的基础上建立了Smad3‑Turboid生物素酶系统，采用邻近标记技术研究与smad3蛋白质相互作用的蛋白质，采用本发明专利技术方法可以发现体内多种与smad3蛋白质相互作用的蛋白质，包括一般方法不容易发现的体内瞬时和微弱相互作用的蛋白。同时，本发明专利技术排除了内源性Smad3蛋白竞争性结合可能造成的干扰。本发明专利技术检测方法检出率和灵敏度高，为后续Smad3的生物学功能研究奠定了基础，具有一定的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种基于邻近标记技术研究smad3蛋白质-蛋白质相互作用的方法。

技术介绍

1、tgf-β/smad3信号通路及其下游靶基因在多器官纤维化的研究相对深入，smad3作为tgf-β1效应因子可直接作用于基因启动子区域进而调控基因的表达，加剧纤维化和肾脏炎症的进程，引起器官损伤。文献《血管紧张素ii对smad2/3的活化及对smad3相互作用蛋白质组的影响》(花芳等，中国科技论文在线，2008)通过免疫共沉淀方法鉴定到两种新的smad3相互作用蛋白，对研究smad3在血管紧张素ii信号通路中的调控机制提供了新的线索，有利于进一步找到治疗心血管纤维化的方法。论文《dedd与smad3相互作用负性调控tgf-β介导的生物学活性》(薛箭飞，北京协和医学院中国医学科学院，博士研究生学位论文，2009年)研究表明通过dedd与smad3的相互作用在tgf-β信号途径和cd95途径之间建立崭新的联系，dedd成为tgf-β信号途径的抑制因素。可见，研究与smad3相互作用的蛋白，有利于研究发病机制，为进一步研究治疗方法提供线索。但是，由于科学技本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组质粒，其特征在于：所述重组质粒的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示。

2.一种重组慢病毒，其特征在于：所述重组慢病毒包括权利要求1所述的重组质粒。

3.一种重组细胞，其特征在于：所述重组细胞是由权利要求2所述的重组慢病毒感染后的细胞。

4.根据权利要求3所述的重组细胞，其特征在于：所述细胞为特异性敲除Smad3的细胞。

5.根据权利要求4所述的重组细胞，其特征在于：所述细胞为特异性敲除Smad3的小鼠肾小管上皮细胞。

6.权利要求1所述的重组质粒、权利要求2所述的重组慢病毒、或权利要求3～5任一项所述重组细胞在检测...

【技术特征摘要】

1.一种重组质粒，其特征在于：所述重组质粒的核苷酸序列如seq idno.5所示。

2.一种重组慢病毒，其特征在于：所述重组慢病毒包括权利要求1所述的重组质粒。

3.一种重组细胞，其特征在于：所述重组细胞是由权利要求2所述的重组慢病毒感染后的细胞。

4.根据权利要求3所述的重组细胞，其特征在于：所述细胞为特异性敲除smad3的细胞。

5.根据权利要求4所述的重组细胞，其特征在于：所述细胞为特异性敲除smad3的小鼠肾小管上皮细胞。

6.权利要求1所述的重组质粒、权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽，李健春，王洪连，缪捷，
申请(专利权)人：西南医科大学附属中医医院，
类型：发明
国别省市：