【技术实现步骤摘要】
本专利技术是有关于一种用于制备包含间叶干细胞、间叶干细胞所产生的细胞外囊泡及生长因子的组成物的方法、由此方法制得的组成物及其用于治疗关节炎的用途。
技术介绍
1、关节炎是全世界最常见的慢性疾病之一，主要是关节的软骨退化或者结缔组织发炎，导致关节疼痛从而干扰关节的正常运动就叫关节炎，常见的关节炎包含骨关节炎(osteoarthritis,oa)、类风湿性、风湿性、化脓性关节炎、外伤性骨性关节炎、自身免疫性关节炎，僵直性关节炎等。关节炎的症状及征兆主要发生在受侵犯的关节，多以承载体重的关节或手指指间关节，可以发生在膝盖、髋关节、足踝、手、肩关节背、颈。
2、其中，骨关节炎也称为退化性关节炎(degenerative arthritis)，是一种可动关节(diarthrosis)衰竭的症状表现，主要病征为关节软骨退化，骨骼间相互磨擦，而造成关节疼痛、触痛(tenderness)、僵硬(stiffness)、锁紧(locking)、关节积液(effusion)、关节活动度降低、关节空间丧失、骨赘生成、囊肿形成、关节变形，严重时可能导致残疾(disability)。
3、世界卫生组织(world health organization,who)将每年10月12日定为「世界关节炎日world arthritis day」。全球骨关节炎患病率从1990年2.4751亿增加到2019年5.2781亿，增长了113.25％。根据precision reports指出全球干细胞用于治疗骨关节炎市场规模预计将从2021年2,2
4、骨关节炎的病患年龄层下降，原本以50岁以上居多，但近年却开始出现30、40岁的病患，已不是老年人特有的疾病，在美国是仅次于心脏病让人无法工作的「凶手」，在中国台湾省也是导致成年人残疾的主要原因。由于退化性关节炎患者常常因为身体病痛，关节酸痛，或产生其他全身性的不适感，不仅难以入眠，容易疲倦，也造成体重减轻，再加上严重的关节损伤及变形，行动力大受影响，外出机会变少，有的患者甚至只能久卧病床，根本无法出门，严重影响健康相关生活质量(health-related quality of life,hrqol)。
5、间叶干细胞(mesenchymal stem cells,mscs)因为具有再生性(regenerative)、免疫调节性(immunomodulatory)和旁分泌特性(paracrine properties)被视为一种治疗药物，为骨关节炎病患提供新的治疗模式。目前已有17种不同来源的间叶干细胞，包含脂肪组织(adipose tissue)、脐带血(umbilical cord blood)、羊膜(amniotic membrane)、羊水(amniotic fluid)、华通氏胶质(wharton's jelly)、胎盘(placenta)、滑膜(synovium)、牙髓(dental pulp)、骨髓(bone marrow)及外围血(peripheral blood)等。已有研究指出自体(autologous)干细胞能治疗骨关节炎，然而，自体干细胞疗法需要从病患身上取组织后，再进行干细胞培养，才能进行治疗，花费时间较长，另外，自体干细胞治疗对于无法提供自己组织的病患们，像年长者、体弱者、具传染性疾病者或因病程无法等待者，有局限。而异体干细胞治疗克服了这个限制，异体干细胞治疗骨关节炎可以直接患部关节腔注射干细胞，完成治疗后，即可离开医院、不需等待细胞培养放大时间、无需住院、无需开刀和节省治疗步骤，提高病友使用的意愿，进而增加产品的普及性及方便性。vega等学者证实异体骨髓来源干细胞(allogeneic bone marrow mscs,bmmscs)用于治疗骨关节炎，可以降低骨关节炎所引起的不适感，但对于生活质量改善并无显著效果，另一篇文献与vega等学者研究有类似结果，其采用异体脂肪间叶干细胞(allogeneic adipose-derived mscs,adscs)治疗骨关节炎，亦可以降低骨关节炎所引起的不适感，但生活质量量表结果反而是降低的，目前异体干细胞治疗骨关节炎相关研究指出在接受治疗后1周仅能降低10％左右的关节炎不适感，需要到12周达到降低56％关节炎不适感，总上，骨关节炎治疗市场上需要能快速及有效改善质量生活的产品。
6、目前临床上关节炎药物治疗效果有限且具有严重副作用，许多患者无法持续治疗。更重要的是，药物仅缓解症状，但未能根本解决问题，所以如何开发出一种可以有效治疗关节炎的新药物是本专利技术在此欲解决的重要课题。
7、为了解决上述问题，本领域的技术人员亟需研发出新颖的用于治疗骨关节炎的医药品以造福有此需求的广大族群。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的为提供一种用于制备包含间叶干细胞(mesenchymalstem cell,msc)、该间叶干细胞所产生的细胞外囊泡(extracellular vesicle,ev)及生长因子的组成物的方法，包含以下步骤：(a)提供一间叶干细胞；(b)将该间叶干细胞培养在补充有n-乙酰基-l-半胱胺酸(n-acetyl-l-cysteine)及l-抗坏血酸2-磷酸(l-ascorbicacid 2-phosphate)的角质形成细胞(keratinocyte)无血清培养基(serum free medium,sfm)中，藉此扩增该间叶干细胞；以及(c)将该间叶干细胞静置一段预定时间，得到该包含间叶干细胞、该间叶干细胞所产生的细胞外囊泡及生长因子的组成物。
2、在本专利技术的一实施例中，该n-乙酰基-l-半胱胺酸具有一为1-100mm的浓度，及该l-抗坏血酸2-磷酸具有一为0.05-50mm的浓度。
3、在本专利技术的一实施例中，方法进一步包含将该间叶干细胞于含氧官能基团比例在20～35％的材质的培养皿进行细胞扩增。
4、在本专利技术的一实施例中，该预定时间为18～24小时。
5、在本专利技术的一实施例中，该生长因子是uteroglobin。
6、在本专利技术的一实施例中，该本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于制备包含间叶干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)、所述间叶干细胞所产生的细胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)及生长因子的组成物的方法，其特征在于，包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述间叶干细胞为人类脂肪间叶干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cell,ADSC)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述N-乙酰基-L-半胱胺酸具有为1-100mM的浓度，及所述L-抗坏血酸2-磷酸具有为0.05-50mM的浓度。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包含将所述间叶干细胞于含氧官能基团比例在20％～35％的材质的培养皿进行细胞扩增。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预定时间为18～24小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生长因子是Uteroglobin。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生长因子是选自于下列所组成的群组：白血球生
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述生长因子是十号介白素或转化生长因子-α的表现是下调表现。
9.一种包含间叶干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)、所述间叶干细胞所产生的细胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)及生长因子的组成物，其特征在于，是藉由一包含如权利要求1至5中任一项所述的方法而被制备。
10.权利要求9所述的包含间叶干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)、所述间叶干细胞所产生的细胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)及生长因子的组成物用于制备治疗关节炎的医药品的用途。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述间叶干细胞为人类脂肪间叶干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cell,ADSC)。
12.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述关节炎为退化性关节炎(degenerative arthritis)。
13.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述间叶干细胞的有效浓度为单次关节内注射6×106～5×107个间叶干细胞。
14.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述组成物增加软骨厚度。
15.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述组成物改善关节炎的疼痛、僵硬及身体功能。
16.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述ADSC是藉由使用包含1～100mM的N-乙酰基-L-半胱胺酸(N-acetyl-L-cysteine)及0.05～50mM的L-抗坏血酸2-磷酸(L-ascorbic acid 2-phosphate)的角质形成细胞(keratinocyte)-无血清培养基(serumfree medium,SFM)而被扩增。
17.根据权利要求16所述的用途，其特征在于，所述ADSC是于含氧官能基团比例在20％～35％的材质的培养皿进行扩增。
18.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述关节炎是在所述医药品被投药后一周产生治疗效果。
19.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述医药品为供非经肠道投药的剂型。
...【技术特征摘要】
1.一种用于制备包含间叶干细胞(mesenchymal stem cell,msc)、所述间叶干细胞所产生的细胞外囊泡(extracellular vesicle,ev)及生长因子的组成物的方法，其特征在于，包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述间叶干细胞为人类脂肪间叶干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cell,adsc)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述n-乙酰基-l-半胱胺酸具有为1-100mm的浓度，及所述l-抗坏血酸2-磷酸具有为0.05-50mm的浓度。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包含将所述间叶干细胞于含氧官能基团比例在20％～35％的材质的培养皿进行细胞扩增。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预定时间为18～24小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生长因子是uteroglobin。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生长因子是选自于下列所组成的群组：白血球生长激素(granulocyte colony-stimulating factor,g-csf)、十号介白素(interleukin-10,il-10)、血小板衍生生长因子-aa(platelet-derived growth factor-aa,pdgf-aa)、转化生长因子-α(transforming growth factor-α,tgfα)、血管内皮生长因子-a(vascular endothelial growth factor,vegf-a)、软骨寡聚基质蛋白(cartilageoligomeric matrix protein,comp)、十八号介白素结合蛋白-α(il-18binding protein-α,il-18bpα)、类血管生成蛋白-3(angiopoietin-like 3,angptl-3)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,mmp-2)之中的任意一种，或任意两种以上的组合。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述生长...
【专利技术属性】
技术研发人员：李家昕，林珀丞，高咏晟，庄明熙，陈俊宏，张朝亮，张恺玲，
申请(专利权)人：国玺干细胞应用技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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