【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物制剂领域，涉及药物载体及其制备方法和应用，具体涉及一种顺铂药物与蛋白酶k偶联的双药纳米药物递送系统及其制备方法。
技术介绍
1、化疗作为目前治疗癌症的最常用的治疗方法，在产生治疗效果的同时，较强的副作用对患病人群也有明显的损伤，为了获得最好的治疗效果同时尽量避免副作用，利用纳米给药技术将化疗药物与递送载体结合能够有效减弱化疗的副作用。
2、顺铂是目前临床上常用的非特异性强效抗癌药，具有效率高、广谱、副作用小、作用机制独特等特点，是治疗头颈部癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、食道癌和骨肉瘤的首选药物。它一般通过被动扩散进入细胞，也可通过铜转运蛋白的主动转运而进入细胞。进入细胞后细胞内低的氯离子浓度可有效促进顺铂的水解，从而导致分子中氯离子被水分子取代，形成带正电的水合顺铂([pt(nh3)2cl(oh2)]+)，而dna带负电，由于正负电的静电吸引，能够使顺铂定向的到达细胞核内与dna嘌呤碱基亲核的n7位点发生反应，导致dna链的交联，进而影响dna的转录和翻译导致细胞死亡。
3、顺铂在具备良好抗癌效果的同时，其较大的毒副作用以及在长期使用时产生的耐药性是一个亟需解决的问题。因此需构建一种能够具有高载药量和肿瘤靶向效果并能够改善顺铂耐药性的纳米药物递送系统来解决以上弊端。
4、利用肿瘤微环境的还原响应性，可以实现药物的受控释放，肿瘤处高浓度的gsh会与顺铂结合从而减弱顺铂的抗癌活性，这也是顺铂产生耐药性的一个重要原因。通过在纳米递送系统中引入二硫键，不仅能够使药物精准释放
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于针对现有顺铂药物在抗癌过程中产生的毒副作用和耐药性问题，提供一种顺铂药物与蛋白酶k偶联的双药纳米药物递送系统及其制备方法。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种顺铂药物与蛋白酶k偶联的双药纳米药物递送系统，其结构式为：
3、
4、其中，为蛋白酶k。
5、为实现上述目的，本专利技术还提供了一种顺铂药物与蛋白酶k偶联的双药纳米药物递送系统的制备方法，包括以下步骤：
6、(1)将mpeg-nhs溶解在ph为10的10mm nahco3缓冲液中，加入2～3倍量的crgd粉末，利用naoh调节体系的ph至9，20～30℃反应12～14h，反应后向体系内加入1～2ml盐酸脱boc保护，20～30℃反应12～14h，利用截留分子量5k的透析袋在水中透析三次，冷冻干燥机冻干得到产物crgd-peg粉末；
7、(2)将步骤(1)得到的crgd-peg粉末，用二氯甲烷溶解之后加入的苯，冷冻抽干做除水处理，然后用dmf溶解之后，按照1:50～1:80的比例称取glu(obz)-nca粉末加入至体系内，25～35℃反应72～74h，之后将所得产物在冰乙醚中沉淀三次，保留下层沉淀，除去乙醚，然后加入1n naoh的甲醇中脱去保护基团，之后转移到截留分子量10k的透析袋中在0.01n盐酸和水中各透析三次，冻干得到产物crgd-peg-pglu；
8、(3)氮气环境下，将预干燥的三乙胺按照1:1比例滴加到2,2'-二硫二乙醇的无水二氯甲烷溶液中；待反应物充分混合，缓慢加入氯甲酸4-硝基苯酯，封闭容器后在20～30℃下反应过夜，其中氯甲酸4-硝基苯酯：2,2'-二硫二乙醇＝1.5:1；
9、经tlc检测反应完全后，将悬浊液转移至旋转蒸发仪去除溶剂二氯甲烷，得到粗产物黄色油状液体；随后，粗产物用乙酸乙酯低温溶解，过滤掉析出的副产物三乙胺盐酸盐，最后将混合物通过硅胶柱层析纯化，其中洗脱液为二氯甲烷:乙酸乙酯＝20:1，得到的纯化产物命名为nc-ss-oh；
10、(4)在氮气环境下，将预干燥的三乙胺按照1:1～1:2的比例滴加到步骤(3)得到的nc-ss-oh的无水四氢呋喃溶液中；待反应物充分混合，加入丁二酸酐，封闭容器后在20～30℃环境下反应24-26h，其中nc-ss-oh:丁二酸酐＝1:1；
11、经tlc检测反应完毕后，将反应液转移至旋转蒸发仪去除溶剂四氢呋喃，得到粗产物淡黄油状液体；随后，粗产物用二氯甲烷溶解并在饱和食盐水中反复洗涤，去除部分未反应的丁二酸酐与三乙胺，收集有机相加入无水硫酸钠干燥过夜；最后将粗产物通过硅胶柱层析纯化，其中洗脱液为二氯甲烷:无水甲醇＝40:1，将得到的纯化产物命名为nc-ss-cooh；
12、(5)将蛋白酶k溶解在ph为10的1mm nahco3缓冲液中，在4℃～20℃下搅拌至充分溶解，将相对于蛋白酶k的50eq mol的nc-ss-cooh的dmso溶液缓慢加入到蛋白质水溶液中，置于4℃～20℃环境搅拌过夜，反应后置于截留分子量3k的透析袋内加入水透析三次，去除未反应的小分子和溶液中的dmso，透析后冻干得到羧基化的蛋白酶k粉末；
13、(6)将步骤(2)得到的crgd-peg-pglu及步骤(5)得到的羧基化的蛋白酶k按照1:1的比例加入到ph为8的nahco3缓冲溶液中搅拌至充分溶解，然后向体系中加入40倍量的顺铂pt粉末，20～30℃搅拌过夜；之后转移到截留分子量50k的透析袋中在水中透析三次，冻干得到产物双药纳米递送系统。
14、为实现上述目的，本专利技术还提供了一种顺铂药物与蛋白酶k偶联的双药纳米药物递送系统在抗癌药物中的应用。
15、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术的顺铂药物与蛋白酶k偶联的双药纳米药物递送系统能够克服传统化疗毒副作用大的缺点，并极大改善治疗效果。另外，通过双药联动的方式将化疗作用和免疫疗法结合能够一定程度上克服铂药的耐药性，同时在体系内引进了二硫键和肿瘤靶向肽能够针对癌症实现响应性靶向治疗。本专利技术构建的双药纳米药物递送系统具有生物相容性好、稳定性强、循环时间久的优点。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种顺铂药物与蛋白酶K偶联的双药纳米药物递送系统，其特征在于，其结构式为：
2.一种如权利要求1所述的顺铂药物与蛋白酶K偶联的双药纳米药物递送系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.一种如权利要求1所述的顺铂药物与蛋白酶K偶联的双药纳米药物递送系统在抗癌药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种顺铂药物与蛋白酶k偶联的双药纳米药物递送系统，其特征在于，其结构式为：
2.一种如权利要求1所述的顺铂药物与蛋白酶k偶联的双药纳米药...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈麒先，王琦，崔洪燕，
申请(专利权)人：浙江大学长三角智慧绿洲创新中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。