【技术实现步骤摘要】
本申请涉及眼科疾病基因治疗和分子药物领域，具体涉及chm基因在制备无脉络膜症治疗剂中的应用及包含chm基因编码序列的治疗产品。
技术介绍
1、无脉络膜症(choroideremia，omim 303100)是一种x连锁隐性遗传的退行性脉络膜视网膜疾病，发病率约为50000–100000分之一，其表现为光感受器(pr)、视网膜色素上皮(rpe)和脉络膜的进行性退化(hurk j v d et al.human mutation,1997,9(2):110-117.)。男性患者大多在十岁前出现夜盲症状，成年后表现为缓慢进展的视野缺损，晚期呈管状视野甚至失明。女性chm携带者在早期多无临床表现或仅有轻微的眼底改变，但在晚年可能会出现夜视力下降。有研究报道，将携带chm基因的2型aav载体转染至离体人类细胞以及chm模型小鼠视网膜后的rep1蛋白出现表达同时伴有视功能恢复，但效果有限。目前，临床上多以观察及并发症的治疗为主，尚无有效的治疗方法。目前，已有一些基因治疗药物用于治疗基因突变或基因损伤导致的疾病。但是，本领域仍然缺乏能够有效治疗无脉络膜症的基因药物。
技术实现思路
1、为提供预期临床效果更佳的无脉络膜症药物，本申请提供了一种可在真核细胞中表达chm蛋白的核酸分子以及包含所述核酸分子的病毒颗粒。在剂量相同的情况下，所述核酸分子及病毒颗粒相较于现有技术具有显著更高的表达效率，并成功在动物水平实现了无脉络膜症的明显逆转。
2、具体地，本申请提供了：
3、1、可在
4、2、根据项1所述的工程化核酸分子，所述编码序列包含如seq id no：4所示的多核苷酸序列或与其具有85％(例如86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％)以上序列同一性的多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述核酸分子可以经过化学修饰。在一些实施方案中，所述核酸分子中的一个或多个核苷酸被置换为其他在转录和/或翻译过程中具有相同作用的核苷酸，包括但不限于将其中的一个或多个t(胸腺嘧啶)与u(尿嘧啶)互换，将其中一个或多个其中的一个或多个g(鸟嘌呤)替换为i(肌酐)等。
5、3、根据项1或2所述的工程化核酸分子，在一些实施方案中，所述核酸分子为mrna分子或为编码mrna分子的dna分子。在一些实施方案中，所述编码序列的5’端一侧进一步包含5’utr序列。
6、4、根据项3所述的工程化核酸分子，所述5’utr序列包含如seq id no：7和/或seqid no：8所示的多核苷酸序列或与其具有85％(例如86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％)以上序列同一性的多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述5’utr序列包含如seq id no：7所示的多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述5’utr序列包含如seq id no：8所示的多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述5’utr序列包含如seq id no：7所示的多核苷酸序列、如seq id no：8所示的多核苷酸序列、以及一段连接所述seq id no：7所示的多核苷酸序列和如seq id no：8所示的多核苷酸序列的短肽序列。在一些实施方案中，所述短肽为gs连接子。
7、5、根据项3所述的工程化核酸分子，所述5’utr序列包含如seq id no：9所示的多核苷酸序列或与其具有85％(例如86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％)以上序列同一性的多核苷酸序列。
8、6、根据项1-5中任一项所述的工程化核酸分子，其进一步包含kozak序列。
9、7、根据项6所述的工程化核酸分子，其中kozak序列如seq id no：5所示。
10、8、根据项1-7中任一项所述的工程化核酸分子，其为dna分子，且进一步包含hghpa加尾信号序列和/或wpre序列。在一些实施方案中，所述dna分子进一步包含poly(a)尾的编码序列和/或wpre序列。
11、9、根据项8所述的工程化核酸分子，其中hghpa加尾信号序列如seq id no：2所示，所述wpre序列如seq id no：6所示。
12、在一些实施方案中，所述dna分子还包含启动子。在一些实施方案中，所述启动子为哺乳动物启动子。在一些实施方案中，所述启动子为cmv启动子。在一些实施方案中，所述启动子包含如seq id no：1所示的多核苷酸序列。
13、10、根据项1所述的工程化核酸分子，其包含如seq id no：11至13中任一项所述的多核苷酸序列或与其具有85％(例如86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％)以上序列同一性的多核苷酸序列。
14、在一些实施方案中所述核酸分子具有插入宿主基因组的能力，例如包含转座子序列。
15、此外，本申请还提供了：
16、11、可在真核细胞中表达chm蛋白或其片段的工程化核酸分子，其从5’至3’端依次包含cmv启动子、5’utr、kozak序列、以及chm编码序列，其中所述5’utr序列包含如seq idno：7和/或seq id no：8所示的多核苷酸序列，或与如seq id no：7和/或seq id no：8所示的多核苷酸序列具有85％(例如86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％)以上序列同一性的多核苷酸序列。
17、12、根据项11所述的工程化核酸分子，所述5’utr序列包含如seq id no：9所示的多核苷酸序列或与如seq id no：9所示的多核苷酸序列具有85％(例如86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.可在真核细胞中表达CHM蛋白(CHM Rab escort protein)或其片段的工程化核酸分子，所述核酸分子包含编码序列，所述编码序列编码如SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列，或如SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的保守取代变体。
2.根据权利要求1所述的工程化核酸分子，所述编码序列包含如SEQ ID NO：4所示的多核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的工程化核酸分子，其在所述编码序列的5’端一侧进一步包含5’UTR序列。
4.根据权利要求3所述的工程化核酸分子，所述5’UTR序列包含如SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8所示的多核苷酸序列。
5.根据权利要求3所述的工程化核酸分子，所述5’UTR序列包含如SEQ ID NO：9所示的多核苷酸序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的工程化核酸分子，其进一步包含Kozak序列。
7.可在真核细胞中表达CHM蛋白或其片段的工程化核酸分子，其从5’至3’端依次包含CMV启动子、5’UTR、Kozak序列、以及CHM编码序
8.包含根据权利要求1-7中任一项所述的工程化核酸分子的病毒颗粒。
9.根据权利要求8所述的病毒颗粒，其为AAV病毒颗粒。
10.根据权利要求9所述的病毒颗粒，其衣壳蛋白血清型为AAV8。
...【技术特征摘要】
1.可在真核细胞中表达chm蛋白(chm rab escort protein)或其片段的工程化核酸分子，所述核酸分子包含编码序列，所述编码序列编码如seq id no：10所示的氨基酸序列，或如seq id no：10所示的氨基酸序列的保守取代变体。
2.根据权利要求1所述的工程化核酸分子，所述编码序列包含如seq id no：4所示的多核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的工程化核酸分子，其在所述编码序列的5’端一侧进一步包含5’utr序列。
4.根据权利要求3所述的工程化核酸分子，所述5’utr序列包含如seq id no：7和/或seq id no：8所示的多核苷酸序列。
5.根据权利要求3所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈吟，
申请(专利权)人：中眸医疗科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：
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