【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽用生物制品，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒株新型变异毒株及其在制备猪流行性腹泻疫苗中的应用。
技术介绍
1、全悬浮培养工艺是一种不依赖血清和载体的细胞培养工艺，目前主要用vero和st细胞进行培养，以vero细胞居多。st全悬浮细胞株较vero全悬浮细胞具有培养效率更高、成本更低、更能适应大体积培养等优势特点。st细胞为猪睾丸细胞，体外培养呈贴壁生长，可进行连续传代培养。st细胞培养成为病毒类疫苗的关键技术节点，直接影响到兽用疫苗质量和经济效益。
2、猪流行性腹泻(procine epidemic diarrhea,ped)首次在英国被报道，后续在美洲和亚洲被报道发现。2010年之前，ped在我国的流行形式主要以散发和地方流行为主，2010年10月新的ped疫情在南方爆发，在全国流行。猪流行性腹泻是目前养猪业危害最严重的疾病之一，以呕吐、腹泻、厌食、脱水为主要发病特征，该病严重危害新生仔猪，死亡率高达100％，对养猪业造成了巨大的经济损失。
3、猪流行性腹泻主要是由猪流行性腹泻病毒(pedv)引起猪的一种高度接触性肠道传染病，各日龄阶段的猪均易感。猪流行性腹泻病毒是一种具有囊膜的单股正链rna病毒，属于冠状病毒科、冠状属。pedv基因组包含7个开放阅读框，分别编码2个多聚蛋白orf1a和orf1b；4种结构蛋白包括纤突蛋白(s)、膜蛋白(m)、包膜蛋白(e)、核衣壳蛋白(n)。s蛋白是病毒进行靶细胞的关键蛋白，介导受体结合和病毒与细胞膜的融合。此外s蛋白通常用来表明冠状病毒分离株的遗传特征。
4、研究表明pedv只有一个血清型，但基于s基因n末端结构域的氨基酸差异，pedv可以分为基因组1(gia和gib)和2(g2a和g2b)型。在2010年之前，欧洲和亚洲流行的大多数ped病毒株属于g1a型毒株，包括经典株和疫苗株，如cv777和dr-13。自2010年以来，我国又多次大规模暴发该病，我国405株pedv毒株中，84.2％(341/405)为新型pedv毒株，15.8％(64/405)为传统pedv或传统pedv来源的疫苗毒株。目前，经典毒株疫苗(如cv777、dr13等)对pedv新型变异毒株缺乏有效的交叉中和作用，并不能提供可靠的交叉保护。虽然疫苗在ped的防控中发挥了重要的作用，但越来越多的猪场在使用pedv疫苗后ped仍然会发生和流行，这说明pedv在环境压力下一直处于变异的状态，这可能是导致近年pedv大规模爆发，而不能以疫苗接种等措施控制此病流行的主要原因。
5、由于冠状病毒易变异，导致目前已上市应用的猪流行性腹泻类相关疫苗对疫病流行控制效果不理想。现有的pedv疫苗毒株多数从发病猪场分离毒株的方式获取，由于pedv为冠状病毒易变异，因此分离获得变异pedv毒株变得尤为重要，对pedv变异毒株疫苗的制备和应用具有重要意义。新型变异毒株的出现给猪场的生物安全防控体系带来更大的挑战。因此，pedv疫苗毒株的更新迫在眉睫，疫苗毒株需要跟随毒株变异的速度，制备变异毒株pedv疫苗，更好的为畜牧业提供免疫保护。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种猪流行性腹泻病毒毒株及其在疫苗制备中的应用，所提供的猪流行性腹泻病毒株的抗原蛋白基因发生变异，为一新型的变异病毒株，将该病毒株可作为抗原来制备疫苗。另外将制备的疫苗进行猪的安全性与效力检验，对疫苗进行评价。
2、本专利技术首先提供一种猪流行性腹泻病毒pedv-wl20株，该病毒株于2021年8月5日保藏于中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:v202162。
3、本专利技术所提供的猪流行性腹泻病毒pedv-wl20变异株，其s基因的氨基酸序列为seq id no:1；
4、本专利技术所提供的猪流行性腹泻病毒pedv-wl20株可用于制备疫苗；
5、所述的疫苗，作为实施例的一种具体记载，为灭活疫苗；
6、本专利技术再一个方面还提供一种灭活疫苗，其中所使用的抗原为灭活的猪流行性腹泻病毒pedv-wl20株；
7、所述的灭活，作为实施例的一种记载，是使用甲醛进行灭活。
8、本专利技术的病毒株，其另一个用途是用于制备中和抗体。
9、本专利技术还提供一种扩繁所述的猪流行性腹泻病毒pedv-wl20株的方法，是使用猪睾丸传代细胞系悬浮适应株st-wl来繁殖所述的猪流行性腹泻病毒pedv-wl20株；所述的猪睾丸传代细胞系悬浮适应株st-wl，已于2021年8月5日保藏于中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c2021214。
10、本专利技术分离得到的猪流行性腹泻病毒pedv-wl20株经鉴定为新型变异毒株，通过从潍坊某猪场发病猪群中分离得到，与现在流行毒株基因同源性99％以上。用新型变异毒株制成的灭活疫苗进行超剂量安全性检验，实验组均无异常临床反应。在效力检验方面，本专利技术分离得到的猪流行性腹泻病毒pedv-wl20株制成的灭活疫苗能显著降低仔猪的腹泻率和死亡率。实验组较市售同类产品在初乳和血清elisa抗体进行对比，结果表明实验疫苗组在elisa抗体表现上优于市售竞品组。以上安全与效力实验证明用st-wl悬浮细胞培养的猪流行性腹泻病毒新型变异株具有良好的临床防护效果，有很好的免疫原性。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种猪流行性腹泻病毒，其特征在于，所述的猪流行性腹泻病毒的保藏编号为CCTCCNO:V202162。
2.如权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒，其特征在于，所述的猪流行性腹泻病毒的S基因的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。
3.权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒在制备疫苗中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的疫苗为灭活疫苗。
5.一种灭活疫苗，其特征在于，所述的灭活疫苗中所使用的抗原为灭活的权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒。
6.如权利要求5所述的灭活疫苗，其特征在于，所述的灭活是使用甲醛进行灭活。
7.权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒在制备中和抗体中的应用。
8.一种扩繁权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒的方法，其特征在于，所述的方法是使用保藏编号为CCTCC NO：C2021214的猪睾丸传代细胞系来悬浮繁殖。
【技术特征摘要】
1.一种猪流行性腹泻病毒，其特征在于，所述的猪流行性腹泻病毒的保藏编号为cctccno:v202162。
2.如权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒，其特征在于，所述的猪流行性腹泻病毒的s基因的氨基酸序列为seq id no:1。
3.权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒在制备疫苗中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的疫苗为灭活疫苗。
5.一种灭活疫苗...
【专利技术属性】
技术研发人员：高杰，徐宏军，李义星，侯晓岚，张艳平，董婷婷，杨杰华，赵玉惠，王麒文，王少沛，李文华，张孝智，王宗祥，韩娜，
申请(专利权)人：青岛蔚蓝动物保健集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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