具有SIRT-1基因敲除的哺乳动物细胞系制造技术

本文报道了一种用于产生表达异源多肽的重组哺乳动物细胞的方法以及一种用于使用所述重组哺乳动物细胞产生异源多肽的方法，其中在所述重组细胞中，内源性SIRT‑1基因的表达已被降低。已经发现，哺乳动物细胞例如CHO细胞中的去乙酰化酶‑1基因(SIRT‑1)的敲除使重组生产率提高，并且减少所述细胞产生的乳酸。此外，已经发现，补料分批发酵结束时活力下降有所减少。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于用于重组生产治疗性多肽(例如治疗性抗体)的细胞系开发领域。更详细地，本文报道了具有sirt-1基因的功能性敲除的哺乳动物细胞，其导致表达特性的改善。

技术介绍

1、哺乳动物宿主细胞系，尤其是cho和hek细胞系，用于分泌蛋白，例如供应蛋白(例如抗原、受体等)和治疗分子(例如抗体、细胞因子等)的重组生产。这些宿主细胞系用包含编码相应治疗分子的表达盒的载体进行转染。随后通过施加选择压力选择稳定的转染子。这导致由各个克隆组成的细胞池。在单个细胞克隆步骤中，这些克隆被分离出来，随后用不同的测定法进行筛选，以确定顶级生产细胞。

2、基因工程方法已应用于宿主细胞系以改善它们的特性，例如(i)参与未折叠蛋白反应途径的内源蛋白的过表达以改善蛋白折叠和分泌(gulis,g.等人,bmcbiotechnology,14(2014)26)，(ii)抗凋亡蛋白的过表达以提高细胞活力和延长发酵过程(lee,j.s.,等人biotechnol.bioeng.110(2013)2195-2207)，(iii)mirna和/或shrna分子的过表达以改善细胞生长本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种哺乳动物细胞，其中内源SIRT-1基因的活性或功能或表达已被降低或消除或减弱或完全敲除。

2.一种哺乳动物细胞，其中内源性SIRT-1基因的表达已被降低，并且其中与在相同条件下培养的具有相同基因型但具有内源性SIRT-1基因表达的细胞相比，所述哺乳动物细胞具有以下的至少一项：在培养期间增加的异源多肽生产率和/或减少的乳酸产量、和/或在培养期间和/或延长的培养时间内提升的高活力水平。

3.权利要求1或2任一项的哺乳动物细胞，其中所述SIRT-1基因敲除是杂合敲除或纯合敲除。

4.权利要求1-3任一项的哺乳动物细胞，其中与表达SIRT-1的亲本哺乳...

【技术特征摘要】

1.一种哺乳动物细胞，其中内源sirt-1基因的活性或功能或表达已被降低或消除或减弱或完全敲除。

2.一种哺乳动物细胞，其中内源性sirt-1基因的表达已被降低，并且其中与在相同条件下培养的具有相同基因型但具有内源性sirt-1基因表达的细胞相比，所述哺乳动物细胞具有以下的至少一项：在培养期间增加的异源多肽生产率和/或减少的乳酸产量、和/或在培养期间和/或延长的培养时间内提升的高活力水平。

3.权利要求1或2任一项的哺乳动物细胞，其中所述sirt-1基因敲除是杂合敲除或纯合敲除。

4.权利要求1-3任一项的哺乳动物细胞，其中与表达sirt-1的亲本哺乳动物细胞相比，sirt-1敲除细胞系的生产率增加了至少10％。

5.权利要求1-4任一项的哺乳动物细胞，其中所述减少或消除或减弱或敲除是由核酸酶辅助的基因靶向系统介导的。

【专利技术属性】
技术研发人员：S·奥斯兰德，B·奥斯瓦尔德，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：

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