【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药的检测方法，具体涉及一种一测多评法测定通络生骨胶囊中六种成分含量的方法。
技术介绍
1、通络生骨胶囊为中药6类新药，2010年成为国家中药保护品种，通络生骨胶囊是木豆叶药材通过煎煮、浓缩、干燥等工艺精制而成的单方制剂，可用于股骨头缺血性坏死，症见髋部活动受限、疼痛、跛行、肌肉萎缩、腰膝酸软、乏力疲倦等。
2、文献中对于通络生骨胶囊的研究仅集中于药理、药效及临床研究，目前基于光谱和色谱分析的通络生骨胶囊质量控制和含量测定未有报道，且也未见对通络生骨胶囊多组分综合含量检测方法报道。一测多评技术通过测定易得、廉价、有效的一种成分实现多个成分含量的同步分析，是一种较为简单和有效的中药质量控制模式。
3、综上所述，有必要开发通络生骨胶囊多组成分的含量检测方法，通过多指标同步质量控制反映中药产品质量，进一步推动通络生骨胶囊质量控制水平的提高并为相关评价体系提升提供参考。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提供一种测多评法测定通络生骨胶囊中六种成分含量的方法，该检测方法可以得、廉价、有效的一种成分实现多个成分含量的同步分析，是一种较为简单和有效的中药质量控制模式，从而提高通络生骨胶囊的质量控制水平。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、一种测多评法测定通络生骨胶囊中六种成分含量的方法，包括以下步骤：
4、(1)对照品溶液的制备
5、精密称取荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷、球松素、木豆
6、(2)供试品溶液的制备：
7、取通络生骨胶囊内容物粉末约0.1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入50％甲醇水溶液20ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取滤液，即得。
8、(3)相对校正因子的计算
9、将步骤(1)中的对照品混合溶液注入液相色谱分析测定，注入高效液相色谱仪，得到对照品混合溶液中荭草苷和其他各待测成分的峰面积，以荭草苷为内标，以相对校正因子计算公式f k/s＝fk/fs＝(ck×as)/(cs×ak)分别计算异牡荆苷、牡荆苷、球松素、木豆芪酸、银松素单甲醚5种成分的相对校正因子，式中，fs为荭草苷的校正因子，fk为除荭草苷以外的某一待测成分的校正因子，cs是对照品混合溶液中荭草苷的含量，as是对照品混合溶液中荭草苷含量为cs时测得的峰面积，ck是对照品混合溶液中除荭草苷以外的某一待测成分的含量，ak是对照品混合溶液中除荭草苷以外的某一待测成分含量为ck时测得的峰面积；
10、(4)目标化合物的含量计算：
11、将步骤(2)中供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到供试品溶液中各待测成分的峰面积，首先采用外标法计算得到通络生骨胶囊中荭草苷的含量；然后结合步骤(3)所得的相对校正因子分别计算通络生骨胶囊中异牡荆苷、牡荆苷、球松素、木豆芪酸、银松素单甲醚的含量。
12、上述技术方案中，优选地，步骤(2)中的检测波长为286nm，在该检测波长下，色谱峰分离较好，基线较为平稳，峰面积较大响应较好。
13、优选地，步骤(2)中的提取溶剂为50％甲醇水溶液，在该溶剂提取下，峰面积较大响应较好。
14、优选地，步骤(2)中的提取(即超声处理)时间为30min，在该提取时间下，可充分提取。
15、优选地，步骤(2)中每0.1g通络生骨胶囊内容物粉末的提取溶液加入量为20ml，在该提取溶液加入量下，粉末可以充分溶解。
16、优选地，所述步骤(3)、(4)中的定量检测指标为：荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷、球松素、木豆芪酸、银松素单甲醚。在本专利技术的检测条件下，上述六种成分可以充分提取出来及分离。
17、优选地，所述步骤(3)、(4)中，色谱条件如下：色谱柱：infinitylabporoshell120aq-c18(2)或infinitylab poroshell 120ce-c18；检测波长：286nm；进样量10μl，以乙腈为流动相a，以0.1％甲酸水溶液为流动相b，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：0～5min：95～83％b；15～23min：83％b；23～30min：83～71％b；30～40min：71％～35％b；40～45min：35％～20％b；45～50min：20～0％b。
18、精密称定荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷、球松素、木豆芪酸、银松素单甲醚对照品适量，分别加50％甲醇水溶液稀释成不同浓度的溶液，注入高效液相色谱进行分析，以各个化合物的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，用于计算不同批次样品中的指标成分含量。
19、优选地，色谱条件下：流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液，在该流动相下，各目标成分的分离度、对称性均更好。
20、更优选地，流速为0.8ml/min；柱温为25℃。
21、优选地，色谱条件下：流速为0.8ml/min，在该流速下，色谱图峰形、分离效果均符合要求。
22、优选地，色谱条件下：柱温为25℃，在该柱温下，色谱图峰形、分离效果均符合要求。
23、优选地，所述色谱柱的规格为4.6mm×150mm，2.7μm；高效液相色谱仪为agilent1260高效液相色谱仪或岛津lc-20ad高效液相色谱仪。
24、优选地，以荭草苷为内标，异牡荆苷、牡荆苷、球松素、木豆芪酸、银松素单甲醚的相对校正因子如下：0.8525、0.6260、0.1998、0.1527、0.2357。
25、本专利技术还提供一测多评法测定通络生骨胶囊中6种成分含量的方法在通络生骨胶囊成品质量控制中的应用。
26、基于18个批次的通络生骨胶囊样品制备的供试品溶液以及对照品混合溶液的高效液相色谱图和异牡荆苷、牡荆苷、球松素、木豆芪酸、银松素单甲醚的相对校正因子，通过相关系数法和t检验法分别比较一测多评法的计算值和外标法的实测值。
27、本专利技术的有益效果为：
28、本专利技术首次建立了一测多评法测定通络生骨胶囊中6种成分含量的方法，测定易得、廉价、有效的一种成分即可实现多个成分含量的同步分析，通过多指标同步质量控制反映中药产品质量，进一步推动通络生骨胶囊质量控制水平的提高以及相关评价体系提升提供参考。本专利技术方法实用性强、操作简单、节约成本，检测结果准确可靠，可以更好更全本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种一测多评法测定通络生骨胶囊中六种成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一测多评法测定通络生骨胶囊中6种成分含量的方法，其特征在于，步骤(3)和(4)中高效液相色谱条件为：色谱柱：InfinityLab Poroshell 120Aq-C18(2)或InfinityLab Poroshell 120CE-C18；检测波长：286nm；进样量10μL，以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸水溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：0～5min：95～83％B；15～23min：83％B；23～30min：83～71％B；30～40min：71％～35％B；40～45min：35％～20％B；45～50min：20～0％B。
3.根据权利要求2所述的一测多评法测定通络生骨胶囊中6种成分含量的方法，其特征在于，流速为0.8ml/min；柱温为25℃。
4.根据权利要求2所述的一测多评法测定通络生骨胶囊中6种成分含量的方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为4.6mm×150mm，2.7μm；高效液相色谱仪为Agilent
5.根据权利要求1所述的一测多评法测定通络生骨胶囊中6种成分含量的方法，其特征在于，以荭草苷为内标，异牡荆苷、牡荆苷、球松素、木豆芪酸、银松素单甲醚的相对校正因子如下：0.8525、0.6260、0.1998、0.1527、0.2357。
...【技术特征摘要】
1.一种一测多评法测定通络生骨胶囊中六种成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一测多评法测定通络生骨胶囊中6种成分含量的方法，其特征在于，步骤(3)和(4)中高效液相色谱条件为：色谱柱：infinitylab poroshell 120aq-c18(2)或infinitylab poroshell 120ce-c18；检测波长：286nm；进样量10μl，以乙腈为流动相a，以0.1％甲酸水溶液为流动相b，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：0～5min：95～83％b；15～23min：83％b；23～30min：83～71％b；30～40min：71％～35％b；40～45min：35％～20％b；45～50m...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴革林，邢冷，虞焰钧，方爱军，周赟，谢永建，龚平，周鹏，
申请(专利权)人：浙江赞生药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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