一种小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱检测方法，该方法具体为：(1)制备供试品溶液和对照品混合溶液，对照品混合溶液的制备方法为：以核糖醇、果糖、蔗糖、水苏糖为对照品，分别加入溶剂溶解并混合均匀得到；(2)采用高效液相色谱仪对步骤(1)制备的两种溶液进行分析，其中色谱条件为：仪器选用高效液相色谱系统，色谱柱选用Asahipak NH2P

【技术实现步骤摘要】
一种小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱检测方法


[0001]本专利技术涉及一种中药的检测方法，具体涉及小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱检测方法。

技术介绍

[0002]小柴胡胶囊是由柴胡、黄芩、甘草、党参、大枣、生姜、姜半夏七味药材通过煎煮、渗漉、浓缩、干燥等工艺制备而成，可用于外感病，邪犯少阳证，症见寒热往来、胸胁苦满、食欲不振、心烦喜呕、口苦咽干等。2020版《中国药典》(一部)采用高效液相色谱法测定小柴胡胶囊中的黄芩苷含量用于其质量控制，同时采用柴胡、甘草、党参对照药材定性鉴别这三味药材。考虑到小柴胡胶囊药味较多，药典中只针对黄芩苷这一种成分进行定量检测的方法无法全面体现出制剂质量，因此需要建立指纹图谱方法进行综合性整体评价。
[0003]多指标成分同时定量检测在2020版《中国药典》(一部)使用很多，是公认检测中药质量的可行方法。指纹图谱是另一种检测中药质量的有效方法，采用相似度等指标总体体现指纹图谱的光谱或者色谱峰信息，就可以定量地反映中药整体质量情况，所以近年来指纹图谱技术得到了长足发展。
[0004]但目前文献中对于小柴胡胶囊质控方法报道较少。尤其是未见小柴胡胶囊中糖类成分定量指纹图谱方法的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的是提供一种小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱，该检测方法可以弥补现有分析方法对于药效成分质量控制的不足，从而更加全面的评价小柴胡胶囊的质量，对于控制小柴胡胶囊的质量和临床疗效有着重要作用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]本专利技术的目的之一：提供一种小柴胡胶囊糖类成分的指纹图谱检测方法，所述的小柴胡胶囊包括以下药材：柴胡、黄芩、甘草、党参、大枣、生姜、姜半夏。所述的指纹图谱检测方法，包括以下步骤：
[0008](1)对照品混合溶液以及供试品溶液的制备：
[0009]对照品混合溶液的制备：精密称定核糖醇、果糖、蔗糖、水苏糖对照品，分别用60％乙腈溶液溶解并定容至10ml，摇匀后得到4种对照品溶液，将4种单标各移取适量于同一50ml容量瓶中，加入60％乙腈溶液精密定容，摇匀后得到混标储备液。将混标储备液稀释5倍，即得含0.6512mg/ml核糖醇、2.189mg/ml果糖、1.636mg/ml蔗糖、0.6767mg/ml水苏糖组成的对照品混合溶液。
[0010]供试品溶液的制备：取小柴胡胶囊内容物于研钵中，研碎，精密称定，置于25mL容量瓶中，加入60％乙腈溶液，加热超声溶解，放冷至室温后定容，摇匀，离心，取上清液，即得。
[0011](2)高效液相色谱测定
[0012]将步骤(1)中的对照品混合溶液和供试品溶液注入液相色谱分析测定，仪器为：Thermo Scientific Ultimate3000高效液相色谱仪；色谱条件为：色谱柱：NH2P
‑
50 4E色谱柱(4.6
×
250mm，5μm)，以水(A)
‑
乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱，洗脱方式：0～10min，78％～74％B；10～28min，74％～50％B；28～33min，50％B，流量：0.6ml/min；柱温：30℃；电喷雾式检测器(CAD)的雾化温度35℃，采样频率10Hz，滤光片5s，幂函数1.0，进样体积为10μL。
[0013](3)建立定量指纹图谱并进行质量评价
[0014]取10个不同批次小柴胡胶囊按照步骤(1)方法制备得到10个不同批次的供试品溶液，按照步骤(2)进行高效液相色谱分析，记录色谱图；根据10个不同批次的色谱图，以不同批次共有的色谱峰确定共有峰和定量检测指标。同时通过建立的指纹图谱相似度和测定的糖类成分对小柴胡胶囊进行质量评价。
[0015]优选的，步骤(2)中的雾化温度为35℃，在该雾化温度下，色谱峰分离较好，基线较为平稳，峰面积较大响应较好。
[0016]优选的，步骤(2)中的进样体积为10μL，在该进样体积下，峰面积较大响应较好。
[0017]优选的，步骤(3)中的定量检测指标为：核糖醇、果糖、蔗糖、水苏糖。在本专利技术的检测条件下，上述四种成分可以充分分离。
[0018]优选的，步骤(3)中的共有峰数量为7。
[0019]本专利技术的目的之二：提供一种小柴胡胶囊糖类成分的含量测定的方法。
[0020]色谱条件如下：仪器：Thermo Scientific Ultimate3000高效液相色谱仪；色谱条件为：色谱柱：NH2P
‑
50 4E色谱柱(4.6
×
250mm，5μm)，以水(A)
‑
乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱，洗脱方式：0～10min，78％～74％B；10～28min，74％～50％B；28～33min，50％B，流量：0.6ml/min；柱温：30℃；进样体积为10μL。
[0021]精密称定核糖醇、果糖、蔗糖、水苏糖对照品适量，分别加60％乙腈稀释成不同浓度的溶液，注入高效液相色谱进行分析，以各个化合物的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，计算不同批次样品中的指标成分含量。
[0022]本专利技术的目的之三：提供一种小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱在小柴胡胶囊质量控制中的应用。
[0023]将10个批次的小柴胡胶囊的供试品溶液的色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(国家药典委员会2012版)，生成对照指纹图谱，将不同批次的小柴胡胶囊的供试品溶液导入相似度评价软件，计算相似度，对相似度低于0.9的批次，认为质量差异较大，不建议放行。
[0024]企业可自行设定糖类成分的含量标准，若未达到企业内控标准，也可以认为质量不合格，不建议放行。
[0025]本专利技术的有益效果为：
[0026]本专利技术首次建立了小柴胡胶囊中糖类成分的定量指纹图谱，填补了现有方法对糖类成分控制不足的空白，所述的定量指纹图谱可用于全面评价小柴胡胶囊的质量。针对小柴胡胶囊中的7种中药材，本专利技术筛选出4种糖类成分进行测定。其中，水苏糖是一种功能性低聚四糖，可促进益生菌生长，起到调节肠道菌群的作用，作为药效成分，对其进行检测和质量控制是十分必要的；核糖醇是D
‑
核糖的还原产物，以游离的状态存在于柴胡的根中，是
柴胡的特征性成分，建立其指纹图谱可体现小柴胡胶囊中柴胡的部分质量信息；果糖、蔗糖在小柴胡胶囊中含量较多，因此也有必要对其进行检测。
附图说明
[0027]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用来解释本专利技术，不构成对于本专利技术的不当限定。
[0028]图1为小柴胡胶囊样品糖类成分部分化合物的LC/Q
‑
TOF
‑
MS负离子模式下的总离子流图。
[0029]图2为混合对照品(A)和样品(B)的色谱。
[0030]图3为10批小柴本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱检测方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)对照品混合溶液和供试品溶液的制备对照品混合溶液的配制：以核糖醇、果糖、蔗糖、水苏糖这四种糖类成分作为对照品，制备对照品混合溶液；供试品溶液的配制：称取若干批次小柴胡胶囊内容物为供试品，分别以溶剂进行超声溶解，摇匀后，离心后取得上清液即为供试品溶液；(2)高效液相色谱测定将步骤(1)中的对照品混合溶液和供试品溶液注入液相色谱分析测定，色谱条件为：色谱柱：NH2P
‑
50 4E色谱柱，内径4.6mm
×
柱长250mm，粒径5μm，以水(A)
‑
乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱，洗脱方式：0～10min，78％～74％B；10～28min，74％～50％B；28～33min，50％B，流量：0.6ml/min；柱温：30℃；(3)建立定量指纹图谱并进行质量评价取若干不同...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚行楚，方爱军，兰婧，吴琳琳，邰艳妮，周鹏，虞焰钧，李道超，
申请(专利权)人：浙江赞生药业有限公司，
类型：发明
国别省市：