【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物合成1,6-己二胺，特别涉及一种生产己二胺的菌株及其制备方法。
技术介绍
1、目前，有研究利用生物酶催化构建了1,6-己二胺的人工合成途径，例如文献1(laum k.methods and microorganisms for the biological synthesis of(s)-2-amino-6-hydroxypimelate,hexamethylenediamine and 6-aminocaproate[z].googlepatents.2015)公开了谷氨酸至1,6-己二胺的生物催化途径；文献2(fedorchuk t p,khusnutdinovaa n,evdokimova e,et al.one-pot biocatalytic transformation ofadipic acid to 6-aminocaproic acid and1,6-hexamethylenediamine usingcarboxylic acid reductases and transaminases[j].jam chem soc,2020,142(2):1038-48.)公开了己二酸至1,6-己二胺的生物转化途径，成功在体外实现了己二酸至1,6-己二胺的生物转化，并获得了3mm的产量；文献3(zhang z,fang l,wang f,etal.transforming inert cycloalkanes intoα,ω-diamines by designed enzymaticcascade c
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种生产己二胺的菌株，所要解决的技术问题是如何通过天然生物合成路径以6-氨基己酸为底物制备1,6-己二胺。本专利技术的另一目的在于提供一种上述菌株的制备方法，解决如何获得上述重组菌株的问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供以下的技术方案：
3、一种生产己二胺的菌株，所述菌株的保藏名称为escherichia coli dah4，保藏编号为cctcc no：m20231768，所述菌株于2023年9月22日保藏于中国典型培养物保藏中心。
4、优选地，所述菌株表达羧酸还原酶突变体mab car l342e和转氨酶，所述mab carl342e的氨基酸序列如seq id no.1所示。
5、优选地，所述转氨酶为spta或hata，所述spta的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述hata的氨基酸序列如seq id no.5所示。
6、本专利技术还提供一种上述生产己二胺菌株的制备方法，包括如下步骤：
7、(1)构建表达羧酸还原酶突变体mab car l342e的重组菌一；
8、(2)向重组菌一中转化含转氨酶基因的表达载体得到同时表达羧酸还原酶突变体和转氨酶的生产1,6-己二胺的菌株。
9、优选地，所述步骤(1)的方法为：以含羧酸还原酶野生型基因的质粒为模板，设计引物对进行pcr反应，克隆羧酸还原酶突变体基因，将羧酸还原酶突变体基因插入表达载体后转化宿主菌，即得重组菌一。
10、优选地，所述引物对的核酸序列如seq id no.11-12所示，所述pcr反应的退火温度为55-67℃。
11、优选地，步骤(2)中所述转氨酶基因包括如seq id no.13所示dna序列的spta基因和/或如seq id no.14所示dna序列的hata基因。
12、本专利技术应用上述方法构建的菌株以6-氨基己酸为底物生物合成1,6-己二胺。
13、本专利技术提供一种含有spta基因和/或hata基因的质粒。
14、本专利技术获得的有益效果：本专利技术通过优化羧酸还原酶和转氨酶基因的表达，构建了1,6-己二胺生物合成菌株dah4，提供了一种以6-氨基己酸为起始底物生物合成1,6-己二胺的全新路径。
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1.一种生产己二胺的菌株，其特征在于：所述菌株的保藏名称为Escherichia coliDAH4，保藏编号为CCTCC NO：M20231768，所述菌株于2023年9月22日保藏于中国典型培养物保藏中心。
2.根据权利要求1中所述生产己二胺的菌株，其特征在于：所述菌株表达羧酸还原酶突变体MAB CAR L342E和转氨酶，所述MAB CAR L342E的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求2中所述生产己二胺的菌株，其特征在于：所述转氨酶为SPTA或HATA，所述SPTA的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述HATA的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
4.如权利要求1-3中任一项所述生产己二胺菌株的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
5.如权利要求4所述生产己二胺菌株的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)的方法为：以含羧酸还原酶野生型基因的质粒为模板，设计引物对进行PCR反应，克隆羧酸还原酶突变体基因，将羧酸还原酶突变体基因插入表达载体后转化宿主菌，即得重组菌一。
6.如权利要求
7.如权利要求4所述生产己二胺菌株的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述转氨酶基因包括如SEQ ID NO.13所示DNA序列的SPTA基因和/或如SEQ ID NO.14所示DNA序列的HATA基因。
8.如权利要求1-3中任一项所述生产己二胺菌株在以6-氨基己酸为底物合成1,6-己二胺中的应用。
9.一种含有SPTA基因和/或HATA基因的质粒。
...【技术特征摘要】
1.一种生产己二胺的菌株，其特征在于：所述菌株的保藏名称为escherichia colidah4，保藏编号为cctcc no：m20231768，所述菌株于2023年9月22日保藏于中国典型培养物保藏中心。
2.根据权利要求1中所述生产己二胺的菌株，其特征在于：所述菌株表达羧酸还原酶突变体mab car l342e和转氨酶，所述mab car l342e的氨基酸序列如seq id no.1所示。
3.根据权利要求2中所述生产己二胺的菌株，其特征在于：所述转氨酶为spta或hata，所述spta的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述hata的氨基酸序列如seq id no.5所示。
4.如权利要求1-3中任一项所述生产己二胺菌株的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
5.如权利要求4所述生产己二胺菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟，姚良雨，阮玉磊，蔡彭鹏，张召，邓禹，李国辉，李文飞，
申请(专利权)人：淮北矿业绿色化工新材料研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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