【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种血清淀粉样蛋白a均相化学发光试剂盒及其制备和应用，属于血清淀粉样蛋白a检测。
技术介绍
1、血清淀粉样蛋白a(saa)是组织淀粉样蛋白a的前体物质，和c反应蛋白相似，是一种主要来自肝脏细胞的急性时相蛋白质。saa在正常人的血清中以恒量存在，但当人体发生炎症或在感染急性期的48-72h内saa可增加数百至上千倍，并且在疾病恢复期中迅速降解，是一种比crp更为灵敏的诊断细菌或病毒感染的标志物。在几个炎症因子中，saa升高见于病毒、支原体、细菌感染，且敏感性高于crp；crp升高见于细菌感染，病毒及支原体等病原体感染不升高或轻微升高，两者应用可互补，可与crp结合判断是否为病毒感染。目前，细菌病毒感染、动脉粥样硬化、冠心病、急性移植排斥反应、肿瘤等疾病中均检测到血清saa升高，可为临床提供更好的参考价值。
2、但是，目前的saa的检测方法存在有线性范围窄、高值区分度差、易受到各种干扰物质的干扰等问题。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种血清淀粉样蛋白a均相化学发光试剂盒及其制备和应用，可以有效解决上述问题。
2、本专利技术是这样实现的：
3、一种血清淀粉样蛋白a均相化学发光试剂盒，包括生物素标记的抗saa第一抗体冻干球、抗saa第二抗体包被的受体微球冻干球、链霉亲和素包被的供体微球冻干球、反应缓冲液及检测卡；
4、所述受体微球上填充有可与单线态氧反应的物质；所述供体微球上填充有在激发光激发下可以产生单线态氧的物质；p>
5、所述检测卡包括加样孔、检测孔及滤血膜；所述加样孔和所述检测孔连通；所述滤血膜设置在所述加样孔中，所述滤血膜包被有冻干的游离saa抗体及阻断剂；
6、所述生物素标记的抗saa第一抗体冻干球、所述抗saa第二抗体包被的受体微球冻干球及所述链霉亲和素包被的供体微球冻干球均放置在所述检测孔中。
7、在一些实施例中，所述生物素标记的抗saa第一抗体冻干球的制备包括：将抗saa第一抗体和长链生物素按照1：1～40摩尔比加入到pbs缓冲液中，于24～26℃下震荡2h～8h，反应结束后加入甘氨酸，再于24～26℃下震荡封闭10min～120min，然后在pbs缓冲液中透析22～26h得到产物，最后将产物配制至使用浓度，控制液滴大小至10～20μl，滴落至液氮中形成冷冻形态，再进行冷冻干燥，制备成冻干小球的形态，即制备完成。
8、在一些实施例中，所述抗saa第二抗体包被的受体微球冻干球的制备包括：
9、(1)将受体微球混悬液放入容器内，于14000rpm的转速下离心15～30min，去除上清液，加入两倍体积的ph4.5～6.5的mes溶液清洗两遍，于14000rpm的转速下离心15～30min，去除上清，加入ph4.5～6.5的mes溶液，超声分散，制成初级微球混悬液i；
10、(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液i中分别投入0.005～0.2mg的edc、0.005～0.2mg的nhs，均用ph4.5～6.5的mes溶液溶解至10mg/ml，混匀，在37℃摇床下震荡0.5～2h，反应结束后离心去除上清，加入ph7.08.0hepes溶液清洗，同样于14000rpm的转速下离心15～30min，去除上清，加入的ph7.0～8.5hepes溶液，超声分散，制成次级微球混悬液ⅱ；
11、(3)向步骤(2)制成次级微球混悬液ⅱ中依次加入抗saa第二抗体、tween20，混匀，在37℃摇床下震荡4h，反应结束后加入牛血清白蛋白，混匀，置于37℃摇床上封闭30min，于14000rpm转速下离心15～30min，去除上清液，加入两倍体积的ph7.0～8.5hepes溶液清洗两遍，得到抗saa第二抗体包被的受体微球；
12、(4)将抗saa第二抗体包被的受体微球配制至使用浓度，控制液滴大小至10～20μl，滴落至液氮中形成冷冻形态，再进行冷冻干燥，制备成冻干小球的形态，即制备完成。
13、在一些实施例中，所述链霉亲和素包被的供体微球冻干球的制备包括：
14、(1)将供体微球混悬液放入容器内，于14000rpm的转速下离心15～30min，去除上清液，加入两倍体积的ph4.5～6.5mes溶液清洗两遍，于14000rpm的转速下离心15～30min，去除上清，加入ph4.5～6.5mes溶液，超声分散，制成初级微球混悬液i；
15、(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液i中分别加入链霉亲和素、edc-mes溶液，混匀，在37℃摇床下震荡2～4h，反应结束后10％牛血清白蛋白溶液，混匀，置于37℃摇床上封闭30～60min，于14000rpm转速下离心15～30min，去除上清液，加入两倍体积的ph4.5～6.5mes溶液清洗两遍，得到链霉亲和素包被的供体微球；
16、(3)将链霉亲和素包被的供体微球配制至使用浓度，控制液滴大小至10～20μl，滴落至液氮中形成冷冻形态，再进行冷冻干燥，制备成冻干小球的形态，即制备完成。
17、在一些实施例中，所述滤血膜包被有冻干的游离saa抗体及阻断剂的制备包括：
18、(1)把滤血膜浸泡于浓度为1～10ug/ml游离saa抗体的pbs缓冲液中，浸泡2～8h后取出，再将滤血膜转移平铺置于板上，保证滤血膜之间无重叠放置，用无纺布去除滤血膜表面多余水分；
19、(2)将含有1～100ug/ml的阻断剂的tbs缓冲液均匀喷涂到滤血膜上；
20、(3)将滤血膜于低于-40℃冷冻1h，再于37℃干燥2～6h，干燥结束后将滤血膜取出密封保存。
21、在一些实施例中，所述反应缓冲液的配方为：0.9％的氯化钠溶液。
22、一种上述的血清淀粉样蛋白a均相化学发光试剂盒的非疾病诊断目的检测方法，包括以下步骤：
23、s1，用0.9％的氯化钠溶液将样本溶解180～220倍；
24、s2，将反应缓冲液和稀释的样本加入检测卡的加样孔中的滤血膜上；
25、s3，将检测卡放入检测仪器中，检测仪器对加样孔抽负压，反应缓冲液及样本随压力进入检测孔与所述生物素标记的抗saa第一抗体冻干球、所述抗saa第二抗体包被的受体微球冻干球及所述链霉亲和素包被的供体微球冻干球混合，孵育，读取光信号，根据光信号的强度计算血清淀粉样蛋白a的浓度。
26、在一些实施例中，所述样本为全血样本或血浆样本。
27、本专利技术的有益效果是：
28、(1)本专利技术提供的试剂盒，采用了干式均相免疫化学发光法，无须清洗，操作简单快速，精密度和灵敏度优；采用冻干球的形式保存试剂，且反应缓冲液可常温保存，大大提高了试剂保存和运输的稳定性，且便于携带，解决了部分检测试剂某一组分需要分开并低温保存和稳定性较差的问题。
29、(2)本专利技术中提到的游离saa抗体冻干于滤血膜的保存方式，解决了蛋白在液态保存中不稳定的问题，可以灵活本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种血清淀粉样蛋白A均相化学发光试剂盒，其特征在于，包括生物素标记的抗SAA第一抗体冻干球、抗SAA第二抗体包被的受体微球冻干球、链霉亲和素包被的供体微球冻干球、反应缓冲液及检测卡；
2.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A均相化学发光试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗SAA第一抗体冻干球的制备包括：将抗SAA第一抗体和长链生物素按照1：1～40摩尔比加入到PBS缓冲液中，于24～26℃下震荡2h～8h，反应结束后加入甘氨酸，再于24～26℃下震荡封闭10min～120min，然后在PBS缓冲液中透析22～26h得到产物，最后将产物配制至使用浓度，控制液滴大小至10～20μL，滴落至液氮中形成冷冻形态，再进行冷冻干燥，制备成冻干小球的形态，即制备完成。
3.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A均相化学发光试剂盒，其特征在于，所述抗SAA第二抗体包被的受体微球冻干球的制备包括：
4.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A均相化学发光试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素包被的供体微球冻干球的制备包括：
5.根据权利要求1所述的血清淀
6.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A均相化学发光试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液的配方为：0.9％的氯化钠溶液。
7.一种权利要求1至6任一项所述的血清淀粉样蛋白A均相化学发光试剂盒的非疾病诊断目的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述样本为全血样本或血浆样本。
...【技术特征摘要】
1.一种血清淀粉样蛋白a均相化学发光试剂盒，其特征在于，包括生物素标记的抗saa第一抗体冻干球、抗saa第二抗体包被的受体微球冻干球、链霉亲和素包被的供体微球冻干球、反应缓冲液及检测卡；
2.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白a均相化学发光试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗saa第一抗体冻干球的制备包括：将抗saa第一抗体和长链生物素按照1：1～40摩尔比加入到pbs缓冲液中，于24～26℃下震荡2h～8h，反应结束后加入甘氨酸，再于24～26℃下震荡封闭10min～120min，然后在pbs缓冲液中透析22～26h得到产物，最后将产物配制至使用浓度，控制液滴大小至10～20μl，滴落至液氮中形成冷冻形态，再进行冷冻干燥，制备成冻干小球的形态，即制备完成。
3.根据权利要求1所述的血清淀...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁彬斌，杨苏清，张伟，王诗涵，郑莲菲，
申请(专利权)人：厦门宝太和瑞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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