【技术实现步骤摘要】
一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒
[0001]本专利技术属于生物
,具体涉及一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒。
技术介绍
[0002]心肌肌钙蛋白I(cTnI)在心肌组织中表达,在胎儿、健康人或疾病状态下的成人骨骼肌中不表达,因而对心肌具有高度特异性。于1994
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1995年被美国国家食品与药品管理局(FDA)批准应用于临床急性心肌梗死(AMI)的诊断。肌钙蛋白(Tn)属于调节蛋白,由三个亚单位组成,即肌钙蛋白C(TnC)、肌钙蛋白I(TnI)及肌钙蛋白T(TnT)。TnI是一种碱性蛋白,由209个氨基酸组成,是一个延伸分子,采取反向平行与TnC 形成二元复合物。TnC 是钙离子受体,参予调节细丝的活化过程。TnT 是一种非对称性蛋白质,伴有一球形C端功能区,它有一个与原肌球蛋白结合的位点。cTnI以不同形式存在于心肌细胞中,如以游离形式存在于胞浆内cTnI 只占很少部分,大部分与肌钙蛋白T及C亚单位结合以复合体形式存在。当心肌损伤时,外周血中cTnI主要以cTnI
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TnC复合物形式居多(90%以上)。cTnI
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cTnT复合物仅发现存在于50%以下病人的血中,因此,检测的重要性远不如cTnI
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cTnC复合物;其他形+式的cTnI(如氧化型、还原型、磷酸化、去磷酸化、蛋白降解形式)较少。当心肌细胞膜的完整性受破坏,cTnI先从胞浆内释放,因此,血清水平很快升高,而结合的cTnI由于相对分子质量大,从心肌细胞结构蛋白缓慢持 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒,其特征在于,包括如下组分:生物素标记的抗cTnI 24
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40 aa嵌合人源抗体冻干小球、抗cTnI 41
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49 aa抗体和抗TnC抗体包被的受体微球冻干小球、链霉亲和素包被的供体微球冻干小球、进样稀释液及检测卡。2.如权利要求1所述的cTnI干式均相化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述cTnI 24
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40的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述cTnI 41
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49 的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.如权利要求1所述的cTnI干式均相化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述抗cTnI 41
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49 aa抗体标记微球的制备过程如下:(1)将100μL,浓度为10mg/mL受体微球混悬液放入试管内,于14000rpm的转速下离心15min,去除上清液,加入两倍体积的pH5~6 MES溶液清洗两遍,同样于14000rpm的转速下离心15min,去除上清,加入200μL的pH5~6 MES溶液,超声分散,制成初级微球混悬液I;(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液I中分别加入50~70μg抗cTnI 41
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49 aa抗体、2~4μL 10mg/mL的EDC
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MES溶液、1~3μL 10%的Tween20
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去离子水,混匀,在30~37 ℃摇床下震荡2h,反应结束后加入1mg牛血清白蛋白和1.2μL乙醇胺,混匀,置于30~37℃摇床上封闭30min,于14000rpm转速下离心15min,去除上清液,加入两倍体积的缓冲液
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清洗两遍,加入50μL的缓冲液
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贮存。4.如权利要求1所述的cTnI干式均相化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述抗TnC抗体标记微球的制备过程如下:(1)将100μL,浓度为10mg/mL受体微球混悬液放入试管内,于14000rpm的转速下离心15min,去除上清液,加入两倍体积的pH5~6的MES溶液清洗两遍,同样于14000rpm的转速下离心15min,去除上清,加入200μL的pH5~6的MES溶液,超声分散,制成初级微球混悬液I;(2)向步骤(1)制得的初级微球混悬液I中分别加入2~4μL 10mg/mL的EDC
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MES溶液、4~8μL 10mg/mL的NHS
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MES,混匀,在30~37 ℃摇床下震荡0.5h,反应结束后离心去除上清,加入200μL pH7.4~8.0 0.05M的HEPES清洗2遍,同样于14000rpm的转速下离心15min,去除上清,加入200μL的pH7.4~8 HEPES溶液,超声分散,制成次级微球混悬液Ⅱ;(3)向步骤(2)制成次级微球混悬液Ⅱ中依次加入50~70μg抗TnC抗体、1~3μL 10%的Tween20
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去离子水溶液,混匀,在30~37 ℃摇床下震荡4 h,反应结束后加入1mg牛血清白蛋白和1.2μL乙醇胺,混匀,置于30~37℃摇床上封闭30min,于14000rpm转速下离心15min,去除上清液,加入两倍体积的缓冲液
①
清洗两遍,加入50μL的缓冲液
①
贮存。5.如权利要求1所述的cTnI干式均相化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述生物素标记抗cTnI 24
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40 aa抗体制备过程如下:50μg的抗cTnI 24...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈东慧,张伟,敖艳艳,何升姣,陈伟凯,刘妍琳,
申请(专利权)人:厦门宝太和瑞生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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