一种聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球及其制备方法和应用技术

本申请涉及一种聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球及其制备方法和应用，所述聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球由羧基受体微球的羧基与聚乙二醇衍生物的活性基团发生化学反应生成；所述聚乙二醇衍生物的活性基团为氨基、巯基、羟基、羧基、醛基、甲氧基和/或马来酰亚胺。本申请通过聚乙二醇衍生物对光激发均相发光中的羧基受体微球表面改性后，用于光激发均相发光雌二醇检测试时，在10μL至50μL中随着待测样本量的增加而带来的非特异免疫蛋白球(IgG)吸附所造成较高阴性本底或假阳性大大减低，同时与未进行羧基受体微球表面改性所包被的雌二醇抗体试剂进行对比测试样本相关性表现更好。表现更好。

【技术实现步骤摘要】
一种聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球及其制备方法和应用


[0001]本申请涉及生物检测
，尤其涉及一种聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]雌二醇是一种分子量为272.3KD的天然雌性激素。目前，临床测量雌二醇的主要方法有化学发光免疫分析法、液相色谱串联质谱法等。而光激化学发光分析作为一种新型化学发光分析方法，已逐渐被临床实验室接受并得到一定程度的应用。此项技术与电化学发光、直接化学发光、酶促化学发光不同，采用发光物质和感光物质两种标记分别分布于发光微球与感光微球内。两种微球之间借助抗原
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抗体间结合，实现高能活性氧的传递，诱导光激发化学发光过程，从而实现“免清洗”的均相免疫分析，精密度高，检测速度快。
[0003]在血液中雌二醇的临床检测中，因其高灵敏度的要求，待测血液样本的加样量较大，但任何的血液样本都是成分复杂的混合物，存在各种影响免疫反应的干扰物。由于光激化学发光技术“免清洗”的特征，尤其容易受到干扰物的影响，若样本添加较多，则干扰物所带来的影响更大，这些干扰物会对微球产生非特异吸附，从而导致信号值的异常变化，造成假阴性或假阳性。因此，高加样量所带来的干扰物非特异性吸附，是目前雌二醇临床检测中亟待解决的问题。

技术实现思路

[0004]本申请提供了一种聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球及其制备方法和应用，以解决用光激化学发光技术检测血液中雌二醇存在的样本中非特异性干扰的问题。
[0005]本申请提供了一种聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球，所述聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球由羧基受体微球的羧基与聚乙二醇衍生物的活性基团发生化学反应生成；
[0006]所述聚乙二醇衍生物的活性基团为氨基、巯基、羟基、羧基、醛基、甲氧基和/或马来酰亚胺。
[0007]进一步地，所述聚乙二醇衍生物的活性基团为氨基和羧基。
[0008]进一步地，所述聚乙二醇衍生物的分子量为400
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20000，所述羧基受体微球与所述聚乙二醇衍生物的质量比为1:(0.1
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10)。
[0009]进一步地，所述所述聚乙二醇衍生物的分子量为2000，所述羧基受体微球与所述聚乙二醇衍生物的质量比为1:1。
[0010]本申请还提供了上述聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球的制备方法，所述方法包括：
[0011]将交联活性剂加入羧基受体微球中混匀，后摇床孵育、离心、弃去上清液，再用缓冲液重悬，后加入聚乙二醇衍生物、交联活性剂、表面活性剂，后进行恒温反应，恒温反应后
离心、弃去上清液，再加入缓冲液，后超声、离心、弃去上清液、洗涤，即得。
[0012]进一步地，所述摇床孵育的工艺参数包括：温度为35～40℃、时间为20～40min；
[0013]所述恒温反应的工艺参数包括：温度为35～40℃，转速为800～1200rpm，反应时间为1.8～2.2h。
[0014]进一步地，所述交联活性剂为浓度为8～12mg/mL的EDC、NHS、CMC、DTSSP、DMP、SMPT和SMCC中的至少一种；
[0015]所述缓冲液为2
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吗啉代乙磺酸缓冲液(MES)、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris
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HCL缓冲液、羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲(HEPES)、碳酸盐
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碳酸氢盐缓冲液和N
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[三(羟甲基)甲基]‑3‑
氨基丙磺酸缓冲液(TAPS)中的至少一种；
[0016]所述表面活性剂为浓度为8～12wt％的Tween
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20、Tween
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40、Tween
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60、Tween
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80、TritonX
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100、TritonX
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405、脱氧胆酸钠、甘油硬脂酸酯、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和月桂基吡咯烷酮中的至少一种。
[0017]本申请还提供了上述聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球在光激发均相发光雌二醇检测中的应用。
[0018]本申请还提供了一种包被有雌二醇抗体的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球，由上述的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球将雌二醇抗原包被至表面而得。
[0019]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0020]微球与蛋白的吸附主要依赖于蛋白的疏水区段与微球表面的疏水作用力，而聚乙二醇有良好的亲水性，本申请通过聚乙二醇对微球表面改性后，增加了微球表面亲水性，从而减少蛋白与微球的非特异吸附。本申请的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球用于光激发均相发光雌二醇检测试时，在10μL至50μL中随着待测样本量的增加而带来的非特异免疫蛋白球(IgG)吸附所造成较高阴性本底或假阳性大大减低，同时与未进行羧基受体微球表面改性所包被的雌二醇抗体试剂进行对比测试样本相关性表现更好。
附图说明
[0021]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本申请的实施例，并与说明书一起用于解释本申请的原理。
[0022]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为本申请实施例1提供的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球的修饰过程反应原理图；
[0024]图2为本申请实施例1提供的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球的检测反应原理图。
具体实施方式
[0025]为使本专利技术实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施方式中的附图，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领
域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本专利技术的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施方式。
[0026]在本专利技术的描述中，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。
[0027]除非另有特别说明，本申请中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0028]实施例1
[0029]一种聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球，其制备方法包括：
[0030]取1ml的200nm的羧基受体微球(浓度为10mg/mL，为度生物Cat：67700005)置于离心机中，于14000rpm下离心15min，后弃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球，其特征在于：所述聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球由羧基受体微球的羧基与聚乙二醇衍生物的活性基团发生化学反应生成；所述聚乙二醇衍生物的活性基团为氨基、巯基、羟基、羧基、醛基、甲氧基和/或马来酰亚胺。2.根据权利要求1所述的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球，其特征在于：所述聚乙二醇衍生物的活性基团为氨基和羧基。3.根据权利要求1所述的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球，其特征在于：所述聚乙二醇衍生物的分子量为400
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20000，所述羧基受体微球与所述聚乙二醇衍生物的质量比为1:(0.1
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10)。4.根据权利要求3所述的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球，其特征在于，所述所述聚乙二醇衍生物的分子量为2000，所述羧基受体微球与所述聚乙二醇衍生物的质量比为1:1。5.根据权利要求1～4任意一项所述的聚乙二醇衍生物修饰的羧基受体微球的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将交联活性剂加入羧基受体微球中混匀，后摇床孵育、离心、弃去上清液，再用缓冲液重悬，后加入聚乙二醇衍生物、交联活性剂、表面活性剂，后进行恒温反应，恒温反应后离心、弃去上清液，再加入缓冲液，后超声、离心、弃去上清液、洗涤，即得。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述摇床孵育的工艺参数包括：温度为35～40℃、时间为20～40min；所述恒温反应的工艺参数包括：温度为35～40℃，转速为800～1200rpm，反应时间为1.8～2.2h。7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述交联活性剂为浓度为8～12mg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽白，杨苏清，张伟，
申请(专利权)人：厦门宝太和瑞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：