【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及前列腺癌外泌体检测的，尤其是涉及一种前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法及应用。
技术介绍
1、作为男性中最严重的恶性肿瘤之一，前列腺癌症的死亡率在所有癌症中排名第五。为了实现癌症的早期筛查，前列腺特异性抗原(psa)检测已被公认为可靠的标准方法。然而，psa检测缺乏足够的特异性。这是因为psa在血清中的浓度也会因前列腺肥大和炎症等其他前列腺疾病而显著升高。因此，临床迫切需要开发具有良好特异性的生物标志物来提高前列腺癌症的诊断准确性。作为细胞分泌的囊泡，大小为30至150nm的外泌体在细胞间通讯和物质交换中发挥着至关重要的作用。与正常细胞相比，肿瘤细胞通常产生更多的外泌体，其膜表面具有大量特异性表达的蛋白质。如果具有特异性表达蛋白的外泌体被用作癌症标志物，将会为癌症早期筛查和监测提供新的技术方案。然而，现有的外泌体测定方法，如化学发光法和酶联免疫法等存在测定流程复杂、需要专业分析和灵敏度低等问题，不满足临床需求。因此，亟需开发能实现早期癌症细胞所分泌的痕量外泌体检测的体系。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是提供一种特异性强、灵敏度高的前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法及应用。
2、本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法，包括以下步骤：
3、(1)氧化铜纳米线-银免疫基底的制备
4、将铜箔在空气中加热到500℃，保持
5、(2)金纳米免疫探针的制备
6、将40-400微升浓度为10毫克每毫升的柠檬酸钠和1-10毫升浓度为10毫克每毫升的氯金酸在120℃下反应1小时，得到金纳米颗粒后，加入10-100微升浓度为10毫摩尔每毫升的二硫代双琥珀酰亚胺丙酸酯和20-200微升浓度为1毫摩尔每毫升的罗丹明b，离心收集沉淀，用乙醇清洗后重溶到pbs溶液中，然后置于由10毫克每毫升的n-羟基丁二酰亚胺溶液和10毫克每毫升1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液等体积混合的混合溶液中以活化羧基后，加入2-20微克epcam抗体溶液，静置反应1小时后，加入20-200微升浓度为1毫克每毫升的bsa溶液，离心清洗后得到金纳米免疫探针；
7、(3)基于三明治结构的免疫检测体系制备
8、将20-200微升含有前列腺癌症外泌体的待测溶液滴加到氧化铜纳米线-银免疫基底上，在37℃下反应2小时，通过抗原抗体特异性结合使得免疫基底捕获前列腺癌症外泌体后，将10-100微升浓度为10毫克每毫升的金纳米免疫探针溶液滴加到附着有外泌体的免疫基底上，在37℃下反应2小时，通过抗原抗体特异性结合使得免疫探针与前列腺癌症外泌体相结合形成三明治免疫结构，即得到前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系。
9、上述制备方法得到的前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的应用，其特征在于：将所述的前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系利用拉曼光谱仪进行光谱测量，根据光谱强度与前列腺癌外泌体浓度之间的定量关系，即可计算获得待测溶液中前列腺癌外泌体的浓度。
10、与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术首次公开了一种前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法及其应用，其采用的氧化铜纳米线-银免疫基底通过热氧化法和离子溅射法制备，方法简单高效、易于大规模生产。所合成的氧化铜纳米线交错互联，形成一种网状结构表面，有利于前列腺癌外泌体的高效链接。特别是，通过离子溅射所形成的银纳米颗粒在氧化铜纳米线表面紧密排列，形成高密度的热点区域，获得显著的电磁增强效果。氧化铜纳米线内部半导体异质结结构的形成，有利于获得高效的电荷转移，从而触发显著的化学增强效应。电磁和化学增强效应的协同作用能够进一步提高氧化铜纳米线-银免疫基底的sers性能，配合金纳米免疫探针的电磁增强效应，有利于实现痕量前列腺癌外泌体的高灵敏检测。
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1.一种前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
2.一种权利要求1所述制备方法得到的前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的应用，其特征在于：将所述的前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系利用拉曼光谱仪进行光谱测量，根据光谱强度与前列腺癌外泌体浓度之间的定量关系，即可计算获得待测溶液中前列腺癌外泌体的浓度。
【技术特征摘要】
1.一种前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
2.一种权利要求1所述制备方法得到的前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的应用...
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