【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物合成、药理活性，具体涉及一种黄酮糖苷的制备及应用。
技术介绍
1、芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷是一种常见的黄酮糖苷，存在于多种植物中(如：芹菜、菊花、神农香菊、洋甘菊、顶羽菊、地锦草等)，多为植物提取，目前合成的较少。黄酮类化合物具有多方面的生物活性，如抗氧化、抗菌抗病毒、血管调节、抗炎镇痛等作用。目前关于芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷药理活性研究较少。
2、专利号为cn200910053444.0和cn200610025622.5的专利技术专利公开了其相关化合物芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷-4'-o-α-l-鼠李糖在防治胃癌前期病变，防治缺血性疾病，特别是心、脑缺血性疾病方面的用途。但是目前的芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷多存在于植物中，含量少，提取困难。仅靠植物提取的芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷难以满足正常的动物体内，体外药理活性研究及相关的药物研发工作，亟待开发一种简单有效的人工合成方法。
3、目前关于芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷药理活性研究的报道少见，据相关文献报告，黄酮类化合物在降血糖方面也有一定作用，加之目前随着人口老龄化严重，各国经济发展及人们生活方式的改变，糖尿病的患病率在世界范围内迅速增长，严重威胁着人类的健康。因此，降糖药物物的研发一直是国内外广大科研工作者们的研究热点。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种黄酮糖苷的制备及应用，对所得黄酮糖苷及其中间体进行抗高血糖研究，突出本专利
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种黄酮糖苷的制备方法，包括以下步骤，
3、s1、以黄酮苷元芹菜素原料置于第一溶剂中后，加入酰化试剂经酰化反应，得酰化后的芹菜素；
4、s2、酰化后的芹菜素加入第二溶剂中，并加入催化剂后加热；而后加入溴代糖待反应完全时进行抽滤，并使用第二溶剂和水进行萃取，对萃取溶液采用第二溶剂继续洗涤，而后进行干燥、重结晶、抽滤、干燥，得酰化后的芹菜素糖苷；
5、s3、酰化后的芹菜素糖苷经脱保护基后，得黄酮糖苷芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷。
6、进一步地，所述步骤s1中，第一溶剂为吡啶、二氯甲烷、甲苯氢呋喃、1，4-二氧六环、乙酸乙酯中的一种或多种；酰化试剂为醋酐、苯甲酰氯、特戊酰氯、醋酸、乙酰氯；r为甲基、乙基、戊基、芳基中的一种；所述酰化试剂与黄酮苷元芹菜素的摩尔比为5：1-50：1；所述酰化反应中采用了催化剂，催化剂为吡啶、盐酸吡啶、三乙胺、碳酸钾中的一种，酰化反应的温度50-300℃，反应时间3-15小时。
7、进一步地，所述步骤s2中，糖苷化反应中采用的催化剂为无机碱催化剂或相转移催化剂；所述无机碱催化剂为碘化钾、溴化钾、碳酸钾、贵金属催化剂如碳酸银和氧化银中的一种；所述相转移催化剂为四丁基溴化铵、四丁基氟化铵、四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵、三(3，6-二氧杂庚基)胺(tda-1)、苄基三乙基溴化铵(bteab)、三辛基甲基氯化铵中的一种；
8、糖苷化反应中采用的第二溶剂为丙酮、n，n-二甲基甲酰胺、吡啶、喹啉、丁酮、甲醇、乙醇、丙酮、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃、二氯甲烷中的一种，糖苷化反应的温度为0-200℃，反应时间为3-24小时。
9、进一步地，所述步骤s3中，脱保护基的方式为酸水解或碱水解。
10、进一步地，所述酸水解反应脱去保护基时，采用的酸反应溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、丙酮中的一种，采用的酸为稀释的硫酸、盐酸、磷酸、甲酸、乙酸中的一种；酸与酸反应溶剂的体积比为0.5：1000-50：1000，酸水解时反应温度为60-90℃，反应时间6-15小时。
11、所述碱水解反应脱去保护基时，采用的碱反应溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、水、四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜或二氧六环等中的一种或多种；采用的碱为稀释的氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的一种或几种的水溶液，碱与碱反应溶剂的摩尔比0.1：1-5：1，碱水解时的反应温度为-10-40℃，反应时间为1-10小时，中和的酸为稀盐酸、稀硫酸、稀磷酸、乙酸、甲酸等中的一种或几种，中和温度为-10-40℃。
12、进一步地，所述步骤s1的反应方程式如下：
13、
14、步骤s2的反应方程式如下：
15、
16、步骤s3的反应方程式如下：
17、
18、进一步地，所述黄酮糖苷的制备方法制备的黄酮糖苷，用于芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷的合成及抗高血糖研究。
19、进一步地，在建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型时，采用α-葡萄糖苷酶和底物ρnpg的体外反应模型，用于实验的α-葡萄糖苷酶，底物ρnpg；缓冲液pbs为磷酸二氢钾水溶液，dmso；阿卡波糖，所用的水为去离子水，溶剂为10％dmso水溶液。
20、进一步地，在筛选黄酮糖苷芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷及其中间体对α-葡萄糖苷酶抑制作用时，所采用的药物浓度均为0.1mm，体系浓度50um，阳性对照药为阿卡波糖，药物浓度为0.1mm，体系浓度为50um，10％dmso为空白对照，磷酸盐缓冲液调零。
21、进一步地，在进行黄酮糖苷芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷及其中间体ic50值测定时，以样品浓度0.3mm，2/3倍稀释，稀释10个浓度，阳性对照药阿卡波糖ic50值测定时，20000mm起始浓度，3倍稀释，稀释10个浓度；以体系浓度，抑制率采用软件求得ic50值。
22、本专利技术的有益效果在于：
23、1、本专利技术以黄酮苷元芹菜素为起始原料，经过酰化、糖苷化及脱保护基(酸或碱水解)三步反应得到目标产物黄酮糖苷芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷；该方法起始原料廉价易得、各步反应条件温和、收率良好，色谱纯度可达98％以上，可以实现克级规模反应，具备工业化前景；同时，各步反应均避开过渡金属的使用，避免了后处理中金属离子对环境造成的污染，符合绿色环保、绿色化学的宗旨。
24、2、本申请通过半合成的方法，合成出高纯度、高收率的芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷，为更深入的研究及其将来可能的放大生产做准备。
25、3、本专利技术还公开了黄酮糖苷芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷及其合成过程中各中间体在抗高血糖、降糖方面的应用。以阿卡波糖为阳性对照药，进行α-葡萄糖苷酶抑制实验；根据芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷及其中间体对α-葡萄糖苷酶抑制作用的ic50值，比较对α-葡萄糖苷酶抑制作用的强弱，发现黄酮糖苷芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷及其中间体对α-葡萄糖苷酶抑制作用均强于阳性对照药阿卡波糖；其中，黄酮糖苷芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖苷的抑制作用最强，具备成药的可能性，为黄酮苷元衍生化及新药来源提供更多的选择，突出该方法潜在的运用价值。
26、4、本专利技术从糖尿病学入手，探本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，
2.根据权利要求1所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，第一溶剂为吡啶、二氯甲烷、甲苯氢呋喃、1，4-二氧六环、乙酸乙酯中的一种或多种；酰化试剂为醋酐、苯甲酰氯、特戊酰氯、醋酸、乙酰氯；R为甲基、乙基、戊基、芳基中的一种；所述酰化试剂与黄酮苷元芹菜素的摩尔比为5：1-50：1；所述酰化反应中采用了催化剂，催化剂为吡啶、盐酸吡啶、三乙胺、碳酸钾中的一种，酰化反应的温度50-300℃，反应时间3-15小时。
3.根据权利要求1所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，糖苷化反应中采用的催化剂为无机碱催化剂或相转移催化剂；所述无机碱催化剂为碘化钾、溴化钾、碳酸钾、贵金属催化剂如碳酸银和氧化银中的一种；所述相转移催化剂为四丁基溴化铵、四丁基氟化铵、四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵、三(3，6-二氧杂庚基)胺(TDA-1)、苄基三乙基溴化铵(BTEAB)、三辛基甲基氯化铵中的一种；
4.根据权利要求1所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中，脱保护基
5.根据权利要求4所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：所述酸水解反应脱去保护基时，采用的酸反应溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、丙酮中的一种，采用的酸为稀释的硫酸、盐酸、磷酸、甲酸、乙酸中的一种；酸与酸反应溶剂的体积比为0.5：1000-50：1000，酸水解时反应温度为60-90℃，反应时间6-15小时。
6.根据权利要求1所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：
7.根据权利要求1-6任一权利要求所述黄酮糖苷的制备方法制备的黄酮糖苷，用于黄酮糖苷芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的合成及抗高血糖研究。
8.根据权利要求7所述的抗高血糖研究，其特征在于：在建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型时，采用α-葡萄糖苷酶和底物ρNPG的体外反应模型，用于实验的α-葡萄糖苷酶，底物ρNPG；缓冲液PBS为磷酸二氢钾水溶液，DMSO；阿卡波糖，所用的水为去离子水，溶剂为10％DMSO水溶液。
9.根据权利要求8所述的抗高血糖研究，其特征在于：在筛选黄酮糖苷芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷及其中间体对α-葡萄糖苷酶抑制作用时，所采用的药物浓度均为0.1mM，体系浓度50uM，阳性对照药为阿卡波糖，药物浓度为0.1mM，体系浓度为50uM，10％DMSO为空白对照，磷酸盐缓冲液调零。
10.根据权利要求9所述的抗高血糖研究，其特征在于：在进行黄酮糖苷芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷及其中间体IC50值测定时，以样品浓度0.3mM，2/3倍稀释，稀释10个浓度，阳性对照药阿卡波糖IC50值测定时，20000mM起始浓度，3倍稀释，稀释10个浓度；以体系浓度，抑制率采用软件求得IC50值。
...【技术特征摘要】
1.一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，
2.根据权利要求1所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中，第一溶剂为吡啶、二氯甲烷、甲苯氢呋喃、1，4-二氧六环、乙酸乙酯中的一种或多种；酰化试剂为醋酐、苯甲酰氯、特戊酰氯、醋酸、乙酰氯；r为甲基、乙基、戊基、芳基中的一种；所述酰化试剂与黄酮苷元芹菜素的摩尔比为5：1-50：1；所述酰化反应中采用了催化剂，催化剂为吡啶、盐酸吡啶、三乙胺、碳酸钾中的一种，酰化反应的温度50-300℃，反应时间3-15小时。
3.根据权利要求1所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中，糖苷化反应中采用的催化剂为无机碱催化剂或相转移催化剂；所述无机碱催化剂为碘化钾、溴化钾、碳酸钾、贵金属催化剂如碳酸银和氧化银中的一种；所述相转移催化剂为四丁基溴化铵、四丁基氟化铵、四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵、三(3，6-二氧杂庚基)胺(tda-1)、苄基三乙基溴化铵(bteab)、三辛基甲基氯化铵中的一种；
4.根据权利要求1所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中，脱保护基的方式为酸水解或碱水解。
5.根据权利要求4所述的一种黄酮糖苷的制备方法，其特征在于：所述酸水解反应脱去保护基时，采用的酸反应溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、丙酮中的一种，采用的酸为稀释的硫酸、盐酸、磷酸、甲酸、乙酸中的一种；酸与酸反应...
【专利技术属性】
技术研发人员：张志朋，张冬，龚明福，周春宇，张皖苏，张亮，孙涛，刘旭，谢谦，赵悦，杨孝风，王苗苗，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：
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